張 倩，湯旭山，朱雅婷，周湘龍（.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 8300；.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院消化內(nèi)科，新疆 烏魯木齊 8300）

胃癌在世界癌癥發(fā)病率中排名第五，死亡率排名第三，胃癌已成為我國(guó)發(fā)病率和死亡率均排名第二的惡性腫瘤[1]。由于早期胃癌的病癥并不明顯，多數(shù)患者在確診時(shí)已是晚期，且其發(fā)病率和死亡率隨著年齡的增長(zhǎng)而上升，五年生存率僅有不到10%[2]，但大部分的患者在就診時(shí)已經(jīng)是胃癌晚期，失去了手術(shù)的機(jī)會(huì)，所以針對(duì)晚期胃癌，化療是最主要的治療手段[3]。目前無(wú)論是針對(duì)局部晚期胃癌還是轉(zhuǎn)移性胃癌，化療有效率都較低，個(gè)體差異大，所以提高治療有效率成為目前國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。奧沙利鉑是胃癌治療的一線藥物[4]。奧沙利鉑進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后與DNA結(jié)合，形成鉑-DNA復(fù)合物導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)改變，引起DNA復(fù)制障礙，從而抑制腫瘤細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)。切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（excision repair crosscomplementation group 1，ERCC1）是核苷酸切除修復(fù)途徑的限速酶，在核酸損傷修復(fù)過(guò)程和細(xì)胞凋亡過(guò)程中起著重要作用。近年來(lái)有文獻(xiàn)[5-6]指出ERCC1的單核苷酸多態(tài)性突變可以影響DNA修復(fù)能力，從而影響奧沙利鉑治療的療效。本研究探討ERCC1基因多態(tài)性與SOX方案化療療效及其與患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月至2019年12月在我院接受SOX方案治療的進(jìn)展期胃癌患者進(jìn)行前瞻性研究，共計(jì)60例， 其中男性49例（81.67%），女性11例（18.33%）；年齡21 ～ 70歲，平均年齡（57.17±11.32）歲。TNM分期：Ⅲ期19例，Ⅳ期41例。納入標(biāo)準(zhǔn)：病理組織學(xué)診斷明確為局部進(jìn)展（不能手術(shù)）或轉(zhuǎn)移性胃癌；經(jīng)CT、MRI、B超檢查證實(shí)均有可測(cè)量病灶；預(yù)計(jì)生存期＞ 3個(gè)月；接受SOX方案化療2周期以上，并知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：之前接受過(guò)化療或是放療（除非后者是放射治療野之外復(fù)發(fā)的輔助治療）；嚴(yán)重的心臟疾病、肝、腎等疾病患者，或是臨床上重大的，不可控制的伴發(fā)疾病或是該腫瘤發(fā)病之前存在或與之共存的其它癌癥的患者；在化療過(guò)程中出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)且無(wú)法耐受毒副作用的患者。

1.2 化療方案

所有入組患者均接受SOX方案化療。奧沙利鉑（130 mg·m-2，qd，ivgtt，d1）+替吉奧（40 mg·m-2，bid，po，d1 - 14）， 3周一個(gè)療程?？稍u(píng)價(jià)療效患者需至少接受2個(gè)周期化療。

1.3 樣本收集和基因分型

所有患者在化療前抽取靜脈血2 mL置抗凝管中并標(biāo)注患者編號(hào)和樣品編號(hào)，提取基因組DNA后低溫- 80 ℃保存。采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP）技術(shù)檢測(cè)ERCC1 118C/T位點(diǎn)基因型。引物上游序列為5'-TCCAACACAGGGTCCCA-3'，引物下游序列為5'-TCAGGGACTGTCCAGGGTTA-3'。PCR反應(yīng)體系50 μL，包括TaKaRa LA Taq（0.5 μL）、10×LA Taq BufferⅡ（Mg2+）（5 μL）、引物F（10 μmol·L-1，2 μL）、引物R（10 μmol·L-1，2 μL）、dNTP（1 μL）。反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min，1個(gè)循環(huán)；95 ℃變性30 s、57 ℃退火30 s、72 ℃延伸60 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃徹底延伸10 min，1個(gè)循環(huán)。ERCC1 118C/T位點(diǎn)基因分型為C/C型、C/T型、T/T型。

1.4 療效評(píng)價(jià)指標(biāo)

根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)（1.0版）進(jìn)行評(píng)價(jià)療效。分為完全緩解（complete response，CR），部分緩解（partial response，PR），穩(wěn)定（stable disease，SD）和進(jìn)展（progressive disease，PD）。以CR+PR計(jì)算化療總有效率，以SD+PD計(jì)算疾病控制率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，基因分布情況分析采用Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，采用卡方檢驗(yàn)比較各基因型組有效率及不良反應(yīng)的分布差異，采用Kaplan-Meier法計(jì)算不同基因型的無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間，并用Log-rank檢驗(yàn)不同基因型無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的差異，以P＜ 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ERCC1基因位點(diǎn)多態(tài)性與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

60例胃癌患者的臨床特征見(jiàn)表1。其中ERCC1 118C/T基因型三種分布頻率分別為C/C 32例（53.3%），C/T 24例（40.0%），T/T 4例（6.7%），其基因型分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（χ2=0.031，P= 0.985）。對(duì)ERCC1不同基因型患者的臨床特征進(jìn)行比較，結(jié)果顯示ERCC1 118C/T不同基因型患者年齡、性別及TNM分期間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 ERCC1基因型與患者臨床特征的關(guān)系Tab 1 Relationship between ERCC1 genotype and the clinical characteristics of patients

2.2 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者化療有效率的相關(guān)性分析

60例患者均接受SOX方案化療，ERCC1 118C/T位點(diǎn)含T等位基因的C/T型和T/T型合并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩周期后進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，計(jì)算化療有效率，以CR+PR為有效組，SD+PD為無(wú)效組。分析結(jié)果顯示，C/C型患者化療有效率（40.6%）較C/T+T/T型患者有效率稍高（35.7%），但不同基因型患者的化療有效率之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞ 0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者化療有效率的關(guān)系Tab 2 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and the chemotherapy efficiency in gastric cancer patients

2.3 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者無(wú)進(jìn)展生存期的相關(guān)性分析

隨訪60例晚期胃癌患者SOX方案化療后患者無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間，1例失訪。C/C型32例，C/T型27例。治療后C/C型患者的平均PFS為8.49個(gè)月，C/T+T/T型平均PFS為10.44個(gè)月，含T等位基因的患者PFS較野生型長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3，Kaplan-Meier生存曲線見(jiàn)圖1。

表3 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者PFS的關(guān)系Tab 3 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and PFS in gastric cancer patients

圖1 ERCC1基因多態(tài)性與胃癌患者無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的關(guān)系Fig 1 Relationship between ERCC1 gene polymorphism and progression-free survival time in gastric cancer patients

3 討論

胃癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，目前化療為主要的治療方式，以期能夠顯著改善患者的生活質(zhì)量，同時(shí)明顯延長(zhǎng)患者生存期。主要采用以鉑類為主的化療方案，其中奧沙利鉑聯(lián)合替吉奧方案是晚期胃癌一線化療方案之一[4,7]。

奧沙利鉑（oxaliplatin，L-OHP）是第三代鉑類，大量的臨床試驗(yàn)證實(shí)奧沙利鉑是治療消化道腫瘤最重要的藥物之一。L-OHP更容易與DNA鏈上的G共價(jià)鍵結(jié)合，形成DNA蛋白質(zhì)交聯(lián)及鏈內(nèi)鏈間交聯(lián)，因而抗腫瘤作用更強(qiáng)[8]。但是抗腫瘤藥物對(duì)機(jī)體腫瘤細(xì)胞損傷后，機(jī)體會(huì)啟動(dòng)DNA修復(fù)作用，使腫瘤細(xì)胞得以存活。Kweekel等[9]研究表明，DNA修復(fù)作用是L-OHP耐藥的主要原因。核苷酸切除修復(fù)是DNA修復(fù)作用的關(guān)鍵基因，而ERCC1在該途徑中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有研究表明ERCC1的單核苷酸多態(tài)性與胃癌患者對(duì)化療藥物的敏感性有關(guān)[10]。因此，探討ERCC1基因多態(tài)性對(duì)以?shī)W沙利鉑為基礎(chǔ)治療的胃癌患者療效的影響具有重要意義。

ERCC1基因定位于人類染色體19q13.2，大小為15 kb，有10個(gè)外顯子。在DNA修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。其機(jī)制為ERCC1與DNA修復(fù)酶缺乏互補(bǔ)基因F形成具有結(jié)構(gòu)特異性核酸內(nèi)切酶活性異源二聚體，此異源二聚體能夠進(jìn)行損傷識(shí)別和切除5’端；而且ERCC1與異源二聚體組成的核酸內(nèi)切酶能夠參與同源重組途徑，同源重組途徑可被認(rèn)為是腫瘤化療的潛在靶點(diǎn)，ERCC1在DNA鏈間交聯(lián)損傷修復(fù)途徑中起著不可替代的作用。ERCC1表達(dá)使DNA修復(fù)作用增強(qiáng)，L-OHP誘導(dǎo)的DNA絡(luò)合物的清除增加，因而抗腫瘤能力減弱，從而降低了藥物療效，而抑制ERCC1表達(dá)則可以減弱DNA修復(fù)作用，從而提高L-OHP的藥物療效。近年來(lái)，關(guān)于ERCC1基因多態(tài)性與鉑類藥物化療敏感性研究逐漸增多[11-15]，但通過(guò)基因型檢測(cè)評(píng)估化療療效尚未得到統(tǒng)一結(jié)論。有研究顯示ERCC1的基因分型C/C型胃癌患者的化療效果顯著高于C/T與T/T型[16]。本研究結(jié)果顯示，C/C型患者化療有效率（40.6%）較C/T+T/T型患者有效率稍高（35.7%），但不同基因型患者的化療有效率之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞ 0.05）。有研究[17-18]表明ERCCl基因多態(tài)性與胃癌鉑類化療后的易感性無(wú)關(guān)，這與本研究結(jié)果吻合。也有研究[10]表明ERCC1基因多態(tài)性與生存期相關(guān)，T/T基因型中位PFS較C/T和C/C型顯著增加。本研究分析了ERCC1基因多態(tài)性與SOX方案治療的無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間的相關(guān)性，研究顯示治療后C/C型患者的平均PFS為8.49個(gè)月，C/T+T/T型平均PFS為10.44個(gè)月，含T等位基因的患者PFS較野生型長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。

本研究的局限性在于造成研究結(jié)果的差異可能與樣本量較少有關(guān)，本研究只收集到4例T/T型樣本，可能影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，后續(xù)將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。影響ERCC1活性的位點(diǎn)較多，本研究檢測(cè)位點(diǎn)覆蓋還不足，盡可能多的位點(diǎn)才能夠得到更準(zhǔn)確的結(jié)論，有待后續(xù)深入研究。