朱 靜 門奮勇 劉 冬 徐孝龍

乳腺癌為女性常見的惡性腫瘤之一。研究[1]顯示，人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)參與腫瘤的發(fā)生，與乳腺癌密切相關(guān)；膜結(jié)合受體型蛋白酪氨酸磷酸酶O(protein tyrosine phosphatase receptor type O，PTPRO)是最新發(fā)現(xiàn)的潛在抑癌基因，在腫瘤發(fā)生機(jī)制中具有重要意義[2]，但其對(duì)于乳腺癌的發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制尚未完全明確。有研究[3-4]表明PTPRO基因啟動(dòng)子甲基化在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用,可作為一種無創(chuàng)性的乳腺癌臨床診斷分子生物學(xué)指標(biāo)；HER2的水平和乳腺癌患者有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。為此本文回顧分析60例乳腺癌患者的臨床資料，分析PTPRO、HER2在乳腺癌中的表達(dá)及其與患者臨床特征的相關(guān)性，為進(jìn)一步闡明PTPRO、HER2與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2016年10月至2018年11月淮北礦工總醫(yī)院集團(tuán)確診的60例乳腺癌患者為研究對(duì)象，將60例癌組織標(biāo)本設(shè)為觀察組，將其癌旁的正常乳腺組織標(biāo)本設(shè)為對(duì)照組。60例患者中年齡35～68歲，平均(55.85±9.10)歲，均為已婚；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌37例、浸潤(rùn)性小葉癌11例、浸潤(rùn)性微乳頭狀癌12例。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)病理學(xué)診斷確診為乳腺癌，首發(fā)病例，臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)計(jì)生存期不超過1年者，接受過抗腫瘤治療者。

1.2 方法 比較觀察組與對(duì)照組PTPRO、HER2蛋白表達(dá)，采用單因素法分析PTPRO、HER2與患者臨床特征[年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)]的關(guān)系，采用Spearman相關(guān)分析法分析PTPRO與HER2的關(guān)系。

1.2.1 PTPRO、HER2檢測(cè) 采用免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PTPRO、HER2的表達(dá)。將組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛溶液固定24 h后，經(jīng)脫水、透明、石蠟包埋，常規(guī)制備厚約4 μm石蠟組織切片后，行免疫組化染色：經(jīng)脫蠟，水化，3%過氧化氫溶液封閉，山羊血清封閉，常溫復(fù)溫，滴加鼠抗人PTPRO、HER2多克隆抗體(濃度1∶100，37℃孵育30 min)，滴加廣譜通用型非生物素化IgG(濃度1∶1 000，37℃孵育20 min)，滴加DAB染色液，顯微鏡下控制顯色反應(yīng)時(shí)間；經(jīng)蘇木精復(fù)染2 min，梯度酒精脫水，自然晾干后，以中性樹膠封片，于光學(xué)顯微鏡下(1 500×)觀察各組織標(biāo)本中PTPRO、HER2蛋白表達(dá)情況。所用儀器：兔抗人PTPRO、HER2多克隆抗體(英國(guó)Abcam公司)，免疫組化試劑盒(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)；CUT4062型石蠟切片機(jī)(德國(guó)SLEE公司)，YD-A型生物組織攤片機(jī)(德國(guó)Lecia公司)，CKX41-A32RC型倒置顯微鏡(日本Olympus公司)。

1.2.2 PTPRO、HER2結(jié)果判斷 ①PTPRO表達(dá)：以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色為準(zhǔn)，以半定量積分法判定染色結(jié)果，染色總評(píng)分0～4分為表達(dá)陰性，染色總評(píng)分≥4分為表達(dá)陽性[5]。②HER2表達(dá)：使用ASCO/CAP指南[6]推薦的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：染色評(píng)分為0、1+判為陰性、染色評(píng)分2+判為不確定、染色評(píng)分3+判為陽性。

1.2.3 臨床特征 臨床分期依據(jù)美國(guó)腫瘤聯(lián)合會(huì)乳腺癌分期系統(tǒng)[7]將腫瘤分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。ER、PR采用免疫組化方法檢測(cè)[8]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以例或百分比表示，采用χ2檢驗(yàn)或校正χ2檢驗(yàn)。相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組PTPRO、HER2陽性表達(dá)率比較 觀察組PTPRO的陽性表達(dá)率為38.33%，低于對(duì)照組(90.00%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；觀察組HER2的陽性表達(dá)率為66.67%，高于對(duì)照組(3.33%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組標(biāo)本PTPR0、HER2表達(dá)比較

2.2 PTPRO、HER2與乳腺癌患者臨床特征的關(guān)系 單因素分析顯示，乳腺癌組織中PTPRO陽性表達(dá)率:淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，PR陰性患者低于PR陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。乳腺癌組織中HER2蛋白陽性表達(dá)率：年齡≥60歲患者高于年齡<60歲患者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，PR蛋白陰性和不確定患者高于PR蛋白陽性患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 PTPRO、HER2與患者臨床特征的單因素分析

2.3 PTPRO與HER2的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析顯示，PTPRO與HER2呈負(fù)相關(guān)(r=-0.392,P=0.002)。

3 討論

局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是乳腺癌患者死亡的主要原因，選擇特異性腫瘤標(biāo)志分子，并以此建立靈敏高效的檢測(cè)、診斷方法已成為乳腺癌患者轉(zhuǎn)移診斷、預(yù)后評(píng)估及個(gè)體化治療的迫切需求[9]。PTPRO是PTP家族的重要成員，是一種具有抑制性調(diào)節(jié)作用的磷酸化酶，具有潛在的抑癌作用。伍麗等[10]研究顯示，PTPRO在肝癌組織中的表達(dá)低于癌旁正常肝組織，是目前最具前景的腫瘤抑制因子之一。曹麗等[11]報(bào)道，51.5%的肺癌組織中存在PTPRO特異性甲基化，而癌旁正常組織中未發(fā)現(xiàn)PTPRO甲基化，且這種甲基化狀態(tài)與PTPRO基因表達(dá)下調(diào)相關(guān)。HER2是cerbB-2原癌基因編碼的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性。而HER2在20%左右的乳腺腫瘤中過度表達(dá)[12]。目前，關(guān)于PTPRO、HER2表達(dá)水平與乳腺癌患者的關(guān)系尚未完全明確，有待進(jìn)一步研究分析。本文探討乳腺癌組織PTPRO、HER2的表達(dá)及其與患者臨床特征的相關(guān)性，旨在為乳腺癌患者的發(fā)病機(jī)制及制定臨床診治方案提供參考依據(jù)。

本組資料顯示，乳腺癌組織的PTPRO陽性表達(dá)率(38.33%)低于正常乳腺組織(90%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明乳腺癌組織PTPRO低表達(dá)，此與李文梅等[13]研究結(jié)果一致，這可能是PTPRO作為潛在抑癌基因，可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、分裂周期和癌基因轉(zhuǎn)化等。此外，本研究發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織中PTPRO陽性表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的PTPRO陽性表達(dá)率較低，此與Ming等[14]報(bào)道的結(jié)果較為一致。另外，本研究結(jié)果顯示PR陰性患者PTPRO表達(dá)低于PR陽性患者，提示PTPRO陽性表達(dá)與PR表達(dá)呈明顯正相關(guān)關(guān)系。

本研究中，乳腺癌組織HER2蛋白陽性表達(dá)率(66.67%)高于癌旁正常乳腺組織(3.33%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明乳腺癌組織HER2高表達(dá)。此與Chan 等[15-16]報(bào)道的結(jié)果較為一致。此可能是HER2作為具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，被激活后可經(jīng)系列信號(hào)通路改變細(xì)胞生物學(xué)特性，從而誘發(fā)乳腺癌。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中HER2陽性表達(dá)率情況中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者、PR陰性患者高于PR陽性患者，年齡≥60歲的患者高于年齡<60歲的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HER2陽性表達(dá)與乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PR水平及年齡有關(guān)。本結(jié)果與白煥煥[17]報(bào)道的青年(年齡<35歲)乳腺癌患者預(yù)后不良，老年乳腺癌患者(年齡>65歲)預(yù)后相對(duì)良好的結(jié)果有差異，可能是由于本研究樣本量較小所致。同時(shí)，本研究顯示，PTPRO表達(dá)與HER2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.392)，提示兩者聯(lián)合檢測(cè)可能更有利于乳腺癌的早期診斷與預(yù)后評(píng)估。

綜上所述，乳腺癌組織中PTPRO表達(dá)低于癌旁正常乳腺組織，HER2表達(dá)水平高于癌旁正常乳腺組織。HER2、PTPRO表達(dá)水平可能與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及PR表達(dá)相關(guān)，PTPRO與HER2呈負(fù)相關(guān)。