饒展鵬　黃麗好.暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院胸外科,廣東深圳　5800 ;.深圳市中醫(yī)院綜合病區(qū),廣東深圳　5800

HOX基因?qū)υ缙谑彻馨┑脑\斷及預(yù)后的指導(dǎo)意義分析

饒展鵬1黃麗好2
1.暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院深圳市人民醫(yī)院胸外科,廣東深圳518020 ;2.深圳市中醫(yī)院綜合病區(qū),廣東深圳518020

目的 探析HOX基因?qū)υ缙谑彻馨┑脑\斷及預(yù)后的指導(dǎo)意義。 方法 入選該院2008年2月—2009年2月食管癌患者80例為實(shí)驗(yàn)組，同期入選體檢健康者80名為研究對照，比較人食管癌細(xì)胞系及正常細(xì)胞系CAES及EC109中表達(dá)HOX基因情況， 評估食管癌患者的HOX基因表達(dá)陽性組及陰性組的術(shù)后生存率情況。結(jié)果 人食管癌細(xì)胞系CAES及EC109中HOX基因表達(dá)陽性情況顯著高于正常細(xì)胞系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）； 食管癌患者HOX基因表達(dá)陽性組1、3、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 食管癌患者細(xì)胞系表達(dá)HOX基因陽性率較高，HOX基因表達(dá)陽性食管癌患者生存率較低，HOX對評估早期食管癌診斷及預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。

臨床意義；細(xì)胞系；食管癌；HOX基因

食管癌在我國的發(fā)病率較高，早期無特異性癥狀不易被發(fā)現(xiàn)，而食管癌的臨床治療效果不甚理想,5年生存率仍較低，預(yù)后較差[1]。有研究指出，食管癌患者Homeobox（HOX）基因陽性表達(dá)率較高，HOX基因可作為早期食管癌的診斷及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)[2]。探析HOX基因?qū)υ缙谑彻馨┑脑\斷及預(yù)后的指導(dǎo)意義十分關(guān)鍵，故該院探析2008年2月—2009年2月人食管癌細(xì)胞系CAES及EC109表達(dá)HOX基因情況，效果滿意，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

隨機(jī)抽取該院2008年2月—2009年2月80例食管癌患者，經(jīng)手術(shù)及病理檢查結(jié)果證實(shí)。其中男43例，女37例，年齡32～50歲，平均年齡（45.3±2.1）歲。病理分期：Ⅰ期52例，Ⅱa期28例；同期入選體檢健康者80名為研究對照，其中男42例，女38例，年齡32～50歲，平均年齡（45.2±1.2）歲，兩組研究對象的性別、平均年齡等基本情況大體一致。北京市腫瘤防治研究所遺傳室保存人食管癌細(xì)胞系CAES及EC109，Gibico公司提供DMEM培養(yǎng)基。

1.2方法

細(xì)胞培養(yǎng)：將滅活胎牛血清10%加入培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中加入5%CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)予以培養(yǎng)細(xì)胞。提取RNA：細(xì)胞總RNA進(jìn)行TRlzol法提取，采集對數(shù)生長期細(xì)胞，將TRIzol加入貼壁細(xì)胞，1 mL/10 cm2，置于室溫下5 min后放置1.5mL離心管內(nèi)，對入氯仿0.2 mL，震蕩15 s混勻，置入室溫2 min，4℃12000×g，離心15 min，采集上清液，將異丙醇0.5ml加入，混勻，置于室溫10 min，4°C12000×g，離心10 min，除去上清液，對入75%乙醇1 mL洗滌，干燥。應(yīng)用適宜DEPC水溶解，應(yīng)用甲醛變性膠電泳鑒定產(chǎn)物2～4 μ L。應(yīng)用RNase-free DNase處理RNA樣品，37 ℃1 h，2 μ L（1 μ g/μ L）總RNA加入1 μ L（10 mmol/L）dNTP、1 μ L（0.5 μ g/μ L）Oligo，對入DEPC水到13 μ L，65℃下5 min變性，置于冰上≥1 min，加入1 μ L SuperscriptⅢ反轉(zhuǎn)錄酶、2μ L DTT（0.1 mol/L）、1 μ LRNasin（40 U/μ L）、4μ l PCR緩沖液。50℃1 h，70℃15 min，即刻置于冰上，加入80 μ lDEPC水，稀釋5倍cDNA產(chǎn)物，25 μ L體系內(nèi)加入cDNA1 μ L予以PCR,95 ℃熱啟動(dòng)5 min，94 ℃變性45 s、適宜溫度45 s、72 ℃合成45 s，循環(huán)38次后72 ℃后延伸7 min。

表1　CAES及EC109中HOX基因表達(dá)陽性情況[n(%)]

1.3儀器與試劑

Ambion公司生產(chǎn)的DNA-freeTM試劑盒。

1.4評估標(biāo)準(zhǔn)

將1%甲醛變性膠電泳加入8μ L反應(yīng)產(chǎn)物中，溴化乙腚染色，紫外線下觀察，陽性表達(dá)：出現(xiàn)大小相應(yīng)條帶[3]。

1.5統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0軟件系統(tǒng)分析所有數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以百分比描述，發(fā)生率的比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1CAES及EC109中表達(dá)HOX基因情況

人食管癌細(xì)胞系CAES及EC109中HOX基因表達(dá)陽性情況顯著高于正常細(xì)胞系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2食管癌患者的HOX基因表達(dá)陽性組及陰性組的術(shù)后生存率情況

食管癌患者HOX基因表達(dá)陽性組1、3、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2　食管癌患者的HOX基因表達(dá)陽性組及陰性組術(shù)后生存率情況[n(%)]

3　討論

食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2%，以進(jìn)行性吞咽困難為典型癥狀，臨床多見于40歲以上男性[4]。我國是食管癌高發(fā)國家，食管癌早期無顯著癥狀，可有吞咽梗噎感，臨床多進(jìn)行手術(shù)治療。而食管癌的臨床治療效果不甚理想，術(shù)后生存率較低。食管癌的早期診療對預(yù)后具有重要的臨床意義[5]。目前，對于食管癌HOX基因表達(dá)已成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)學(xué)者的重要研究課題[6]。

該研究探析HOX基因?qū)υ缙谑彻馨┑脑\斷及預(yù)后的臨床意義，結(jié)果顯示：人食管癌細(xì)胞系CAES及EC109中HOX基因表達(dá)陽性情況顯著高于正常細(xì)胞系，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；食管癌患者HOX基因表達(dá)陽性組1年生存率、3年生存率、5年生存率顯著低于食管癌HOX基因表達(dá)陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與韓楊等[7]的研究結(jié)果大體一致，多種基因調(diào)控的共同完成胚胎發(fā)育過程，胚胎調(diào)控失調(diào)可產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞,HOX基因主要有兩類,I類共39個(gè)基因，為成簇排列，分為HOXA、HOXB、HOXC、HOXD四簇，II類散在分布。HOXI類基因編碼蛋白為主要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，對胚胎的生長分化及發(fā)育產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。HOX基因在多種腫瘤中表達(dá)水平較高，而在正常細(xì)胞中缺失表達(dá)或低表達(dá)，腫瘤細(xì)胞HOX基因陽性表達(dá)組的生存率更低，有助于判斷預(yù)后[8]。而HOX基因在癌細(xì)胞中的具體作用機(jī)制尚在研究中。綜上所述，食管癌患者細(xì)胞系表達(dá)HOX基因陽性率較高，HOX基因表達(dá)陽性食管癌患者生存率較低，HOX對評估早期食管癌診斷及預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。

[1]張玉雪,吳海燕,李慧巖.中國食管癌患者p53基因改變與吸煙、飲酒的Meta分析[J].實(shí)用腫瘤學(xué)雜志,2011,25(4):50-51.

[2]劉亮,左連富,郭建文.食管鱗癌中MDR1基因的表達(dá)與多藥耐藥的關(guān)系[J].中國老年學(xué)雜志,2014(16):702-703.

[3]李朝陽,徐致祥,譚家駒,等.p16基因甲基化與食管癌相關(guān)研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2012,41(1):157-161.

[4]常愛敏,劉春霞,陳云昭,等.食管癌比較基因組雜交研究進(jìn)展[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2011,27(11):1225-1228.

[5]王凱,馬偉,程玉峰,等.食管癌放射敏感性與相關(guān)基因的表達(dá)[J].國際腫瘤學(xué)雜志,2011,38(8):608-611.

[6]申潞艷,陳克能.同源盒基因在惡性腫瘤研究中的進(jìn)展[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2013,30(1):191-192.

[7]韓楊,周崇治.同源框基因在消化道腫瘤中的異常表達(dá)及相關(guān)機(jī)制研究[J].國際外科學(xué)雜志,2012,39(6):73-74.

[8]牛苗苗,戰(zhàn)軍,張宏權(quán),等.HOX 基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用[J].解剖學(xué)報(bào),2014(3):430-436.

Diagnostic and Prognostic Significance of HOX Gene for Early Esophageal Cancer

RAO Zhanpeng1HUANGLihao2
1.The Second Clinical Medical College of Jinan University Department of thoracic surgery of Shenzhen People's Hospital,Shenzhen 518020,China;2.Comprehensive Ward of Shenzhen Chinese Traditional Medical Hospital,Guangdong 518020,China

ObjectiveTo explore and analyze the diagnostic and prognostic significance of HOX gene for early esophageal cancer. Methods80 cases of patients with esophageal cancer from February 2008 to February 2009 in our hospital were selected as experiment group, while 80 cases of healthy subjects were selected as control group. HOX gene expression of esophageal cancer cell and normal gene, CAES and EC109 were compared. Postoperative survival rate of positive and negative HOX gene expression of patients with esophageal cancer were evaluated. ResultsHOX gene expression of esophageal cancer cell line CAES and EC109 was significantly higher than normal cells. The difference was statistically significant (P <0.05);The 1-year, 3-year, and 5-year survival rate of positive expression of of patients with esophageal cancer were significantly lower than HOX gene expression negative group. The difference was statistically significant (P <0.05). ConclusionHOX gene expression positive rate of patients with esophageal cancer is high, while survival rate of HOX gene expression positive patients is low. HOX has important clinical value in evaluate early esophageal cancer diagnosis and prognosis.

Clinical significance; Cell line; Esophageal cancer; HOX gene

R735.1

A

1674-0742(2015)03(c)-0095-02

2014深圳市科技計(jì)劃項(xiàng)目(JCYJ201404161 22811966)。

饒展鵬(1981.6-)，男，廣東人，學(xué)士，主治醫(yī)師，從事胸外科方向的研究 。

2014-12-25)