徐文華 梁銳 萬希晨 方富 劉衛(wèi)兵 唐尤佳

腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，其侵襲性高、復(fù)發(fā)率、死亡率高，預(yù)后差是其疾病特點(diǎn)。早發(fā)現(xiàn)、早診斷在治療過程中的重要性尤為凸顯，外泌體是一種由細(xì)胞分泌，大小為40～100 nm 的小囊泡，其內(nèi)含有生物活性物質(zhì)，其在腦許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要的角色[1-2]。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于外泌體對(duì)腦膠質(zhì)瘤影響的文獻(xiàn)報(bào)道仍較少，外泌體在腦膠質(zhì)瘤疾病的發(fā)生演變過程中扮演著怎樣的角色，其含量變化同腦膠質(zhì)瘤的演變過程有怎樣的影響，都有待進(jìn)一步研究。本研究通過分析外泌體與膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的相關(guān)性，旨在為臨床上腦膠質(zhì)瘤患者的惡性程度及預(yù)后評(píng)估提供有意義的指導(dǎo)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年10 月-2019 年4 月本院60 例有明確病理診斷的腦膠質(zhì)瘤患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中國(guó)中樞神經(jīng)系統(tǒng)膠質(zhì)瘤診斷與治療指南（2015）腦膠質(zhì)瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]；有明確病理診斷確診；具有住院治療、干預(yù)等完整記錄。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤；合并腦部血管疾??；合并精神疾病。根據(jù)術(shù)后病理診斷分級(jí)將其分為低級(jí)別膠質(zhì)瘤組與高級(jí)別膠質(zhì)瘤組，各30 例。本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 采集兩組腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本，通過超速離心實(shí)現(xiàn)外泌體的提取分離。將純化出的外泌體進(jìn)行定量分析，比較兩組外泌體含量。隨訪1 年，觀察兩組死亡率、致殘率。以生活自理量表（ADL）為殘疾判定標(biāo)準(zhǔn)，共14 項(xiàng)，每項(xiàng)1～4 分，評(píng)分≥22 分判定為殘疾；采用Spearson 秩相關(guān)分析外泌體含量與腦膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的相關(guān)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 20.0 軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（）表示，比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。外泌體含量與腦膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的相關(guān)性用Spearson 秩相關(guān)分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 兩組性別、年齡及病程比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組外泌體含量比較 低級(jí)別膠質(zhì)瘤組外泌體含量為（156.32±5.93）mg/L，低于高級(jí)別膠質(zhì)瘤組的（182.14±4.69）mg/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=18.705，P＜0.001）。

2.3 兩組預(yù)后情況比較 低級(jí)別膠質(zhì)瘤組死亡率與致殘率均低于高級(jí)別膠質(zhì)瘤組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 兩組死亡率與致殘率比較 例（%）

2.4 外泌體含量與膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的相關(guān)性 外泌體含量與膠質(zhì)瘤級(jí)別呈正相關(guān)性，而與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)性（P＜0.05），見表3。

3 討論

腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體不僅可通過腫瘤細(xì)胞表面抗原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)，還可通過誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受、免疫抑制、轉(zhuǎn)移促瘤生長(zhǎng)的蛋白及核酸等方面，促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展；目前多集中在生物標(biāo)記、藥物載體研究，具標(biāo)本易得、檢測(cè)方便、傷害較小、變化較早等特點(diǎn)[4-5]。趙莉娟等[6]發(fā)布了黑色素瘤細(xì)胞可分泌攜帶有αυ 因子受體的外泌體，該外泌體可誘導(dǎo)活化巨噬細(xì)胞，通過檢測(cè)iRGD 因子的表達(dá)，揭示了可利用外泌體特異性對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞起到靶向治療作用。近年大量研究表示，在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中，外泌體起到一定程度的促進(jìn)作用。徐峰等[7]在研究腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)，從腫瘤細(xì)胞上清液中分離出的特異蛋白質(zhì)及遺傳物質(zhì)，通過被鄰近正常細(xì)胞攝取并表達(dá)促血管新生蛋白，達(dá)到促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)、侵襲及免疫逃逸的目的，說明在腦膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)過程中，外泌體可增強(qiáng)腫瘤營(yíng)養(yǎng)攝取能力、提升腫瘤浸潤(rùn)范圍。腫瘤細(xì)胞外泌體通過其特異性內(nèi)含物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的遷移，例如，乳腺癌細(xì)胞分泌的外泌體內(nèi)含蛋白HSP90α，可活化細(xì)胞外蛋白酶；另外外泌體也含有HER 配體分子等生物學(xué)特性，進(jìn)而刺激周圍細(xì)胞轉(zhuǎn)化為相近性質(zhì)，有利于促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移[8-9]。以上可說明，在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中外泌體起到重要促進(jìn)作用。

表3 外泌體含量與膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的Spearson秩相關(guān)分析

腦膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生率占所有顱內(nèi)腫瘤的35.2%～60.1%（平均44.69%），5 年生存率僅為20%～30%[10]。目前腦惡性腫瘤在臨床上分類眾多，包括少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤、少突星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤、髓母細(xì)胞瘤、室管膜瘤等[11]。外泌體是一種有膜小囊泡，直徑40～100 nm，其內(nèi)含有脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA 等生物活性物質(zhì)，通過與靶細(xì)胞受體結(jié)合或水平傳遞生物活性物質(zhì)可發(fā)揮生物學(xué)功能[12]?？捎啥喾N細(xì)胞分泌，如T 細(xì)胞、B 細(xì)胞、樹突細(xì)胞、肥大細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等[13]。目前，外泌體在人類的腦脊液、外周血、尿液、羊水、唾液、腹水、關(guān)節(jié)液等均可被檢測(cè)到[14-15]。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，其具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，一方面不僅可作為生物學(xué)標(biāo)志物，在疾病診斷、治療及預(yù)后預(yù)測(cè)中起著重要作用，另一方面也可以作為治療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治療[16-17]。外泌體作為一種全新的細(xì)胞間信息傳遞物質(zhì)，在機(jī)體免疫監(jiān)測(cè)、炎癥反應(yīng)及腫瘤的發(fā)生發(fā)展等生理和病理過程中，外泌體都發(fā)揮著十分重要的功能[18]。以傳統(tǒng)手術(shù)為主，輔以放化療仍是目前腦膠質(zhì)瘤的最重要的治療模式，腫瘤早期診斷往往癥狀不明顯，容易漏診，但由于膠質(zhì)瘤多為浸潤(rùn)型生長(zhǎng)的特點(diǎn)，很容易復(fù)發(fā)，患者預(yù)后差，復(fù)發(fā)率、死亡率高，且療效不理想[19]。外泌體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，特別是腦膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及免疫逃逸中起著重要作用[20]。因考慮腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展與外泌體促進(jìn)作用相關(guān)，探索外泌體同腦膠質(zhì)瘤的關(guān)系是有前景的診斷和治療方向，本研究嘗試將外泌體含量與腦膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后行相關(guān)性分析。

本研究結(jié)果顯示，低級(jí)別膠質(zhì)瘤組外泌體含量為（156.32±5.93）mg/L，低于高級(jí)別膠質(zhì)瘤組的（182.14±4.69）mg/L（P＜0.05）。說明不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者的確存在外泌體分泌含量差異，考慮原因?yàn)?，腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中，外泌體為保證腫瘤組織內(nèi)養(yǎng)分吸收充足，需增加分泌量以加強(qiáng)腫瘤內(nèi)部新生血管建設(shè)，進(jìn)而提升外泌體含量；特別在對(duì)惡性腫瘤患者放療化療治療期間，腫瘤細(xì)胞可利用外泌體介導(dǎo)藥物排出，以降低腫瘤細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，或腫瘤細(xì)胞通過分泌外泌體以中和胞外蛋白以抵抗腫瘤藥物作用能力，或者受外泌體影響，鐘敏細(xì)胞抗藥敏感性增加，特別對(duì)于級(jí)別較高腫瘤而言，因其腫瘤細(xì)胞較多，外泌體分泌能力相對(duì)增加，可以證實(shí)，不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的確存在外泌體分泌量不同情況[21]。低級(jí)別膠質(zhì)瘤組死亡率6.67%與致死率3.33%均低于高級(jí)別膠質(zhì)瘤組26.67%、20.00%（P＜0.05）。說明不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者的確存在預(yù)后差異，考慮原因?yàn)?，低?jí)別腦膠質(zhì)瘤患者腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)、侵襲、轉(zhuǎn)移范圍較小，治療方法簡(jiǎn)單；高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲明顯，可加重患者神經(jīng)功能損傷，嚴(yán)重影響其生理功能。高衛(wèi)勤等[22]研究表示，不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者圍術(shù)期會(huì)出現(xiàn)顯著免疫水平差異，即高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后細(xì)胞免疫指標(biāo)較低級(jí)別差，且顱內(nèi)感染發(fā)生率較低級(jí)別高。楊建凱等[23]研究報(bào)道小膠質(zhì)細(xì)胞外泌體分泌量化增加可能為增加細(xì)胞炎癥反應(yīng)、增加患者感染風(fēng)險(xiǎn)、影響患者預(yù)后重要因素，可能為增加腦膠質(zhì)瘤患者死亡風(fēng)險(xiǎn)重要因素。本研究結(jié)果顯示外泌體含量與腦膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后的具有一定的相關(guān)性，外泌體含量越高腦膠質(zhì)瘤級(jí)別越高，預(yù)后越差，考慮原因?yàn)槟[瘤數(shù)量多，外泌體分泌量增加，血漿外泌體miRNAs 含量隨之增加，腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、增殖能力增強(qiáng)。說明在腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后判斷中，可通過檢測(cè)外泌體含量判斷患者預(yù)后。馬力等[24]研究報(bào)道外泌體中miR-150 級(jí)miR-29a 可作為放化療治療劑量相關(guān)循環(huán)生物標(biāo)志物，其含量的高低對(duì)預(yù)測(cè)患者預(yù)后、評(píng)價(jià)臨床療效具積極意義，與本研究觀點(diǎn)一致。

綜上所述，不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤患者的確存在外泌體分泌量差異，外泌體含量增加可判斷患者預(yù)后不良。外泌體可用于腦膠質(zhì)瘤級(jí)別、預(yù)后判斷依據(jù)，對(duì)于膠質(zhì)瘤患者的治療具有一定的指導(dǎo)意義。