馬明茹

山東省棗莊市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所 山東棗莊 277100

在《檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)通用要求》標(biāo)準(zhǔn)中在對檢測方法的控制要求中提出 “方法驗(yàn)證” 的概念，檢驗(yàn)方法驗(yàn)證這一程序在實(shí)驗(yàn)室體系建設(shè)中非常重要，在檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)化學(xué)檢測領(lǐng)域?qū)嶒?yàn)室中，對于一些方法，檢測人員很難做到很好的理解，同時(shí)也很難取進(jìn)行驗(yàn)證，以致于在掌握檢測標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)能力方面存在很大的不確定度，本文從方法驗(yàn)證的不同視角分析闡述，以達(dá)到保證檢測結(jié)果準(zhǔn)確、有效的目的。

1 方法驗(yàn)證是檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)

方法驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室通過核查，提供客觀有效證據(jù)證明滿足檢測方法規(guī)定的要求。在ISO/IEC 17025《檢測和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力通用要求》條款中規(guī)定 “在引入檢測或校準(zhǔn)之前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法”。通用要求中條款的規(guī)定就意味著實(shí)驗(yàn)室在使用標(biāo)準(zhǔn)方法之前，應(yīng)經(jīng)過方法驗(yàn)證或證實(shí)，并且根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的使用標(biāo)準(zhǔn)，在按照該方法檢測之前要對其實(shí)際的使用標(biāo)準(zhǔn)方法的水平進(jìn)行測試，來驗(yàn)證其是否達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)方法所需要的技術(shù)能力和水平。實(shí)驗(yàn)室將這一過程程序化是保障方法能夠科學(xué)合理進(jìn)行選擇的重要路徑，并確保組織實(shí)施驗(yàn)證可以有序進(jìn)行。

2 明確方法驗(yàn)證的重要部分

根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求規(guī)定，檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)在新檢測標(biāo)準(zhǔn)投入使用前要進(jìn)行方法驗(yàn)證，驗(yàn)證時(shí)首先需要評估實(shí)驗(yàn)室所擁有的人員、設(shè)備、方法、試劑材料和檢測環(huán)境等資源條件是否滿足檢測標(biāo)準(zhǔn)要求，可以稱為環(huán)境資源驗(yàn)證。其后還需要驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室是否已經(jīng)具備準(zhǔn)確執(zhí)行該檢測標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)能力，可以稱為技術(shù)能力驗(yàn)證。我們將環(huán)境資源驗(yàn)證和技術(shù)能力驗(yàn)證并列為方法驗(yàn)證的左膀右臂。

對化學(xué)檢測實(shí)驗(yàn)室而言技術(shù)能力驗(yàn)證，而技術(shù)能力驗(yàn)證首先需要完成技術(shù)實(shí)驗(yàn)，并且借助技術(shù)實(shí)驗(yàn)才能證實(shí)相關(guān)檢測人員完成方法的各項(xiàng)指標(biāo)是否達(dá)標(biāo)，而這些指標(biāo)包括方法標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限、回收率和精密度等。

而一旦實(shí)際使用當(dāng)中的檢測標(biāo)準(zhǔn)改變，那么檢測人員的首要任務(wù)就是對其進(jìn)行針對性的評估，隨后尋找其中具體發(fā)生改動的地方，如果整體的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)路線沒有發(fā)生變化，而僅是名稱、年號等發(fā)生變化，那么不需要進(jìn)行其他評判就可以直接通過技術(shù)評審，投入使用，隨后只需要在第一時(shí)間向?qū)嶒?yàn)室提交申請，隨后實(shí)驗(yàn)室決定是否認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)的改變，而如果發(fā)生新標(biāo)準(zhǔn)路線改變的情況下，那則需要對實(shí)驗(yàn)室的評審人員，以及其內(nèi)部設(shè)備，檢測方法以及環(huán)境，和試劑材料重新審核，并且重新借助試驗(yàn)相關(guān)技術(shù)參數(shù)來研究實(shí)驗(yàn)室是否仍然具備準(zhǔn)確執(zhí)行該新的檢測標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)能力。

其中定量分析方法是測定被分析物的質(zhì)量或質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法，可用適當(dāng)?shù)膯挝粩?shù)值表示。定性分析方法是根據(jù)物質(zhì)的化學(xué)、生物或物理性質(zhì)對其進(jìn)行鑒定的分析方法。

3 方法驗(yàn)證中的技術(shù)參數(shù)

實(shí)驗(yàn)室化學(xué)檢測的對象按性質(zhì)可分為不得檢出的物質(zhì) ( 禁用物質(zhì)) 、無限制使用物質(zhì)、限制使用的物質(zhì) ( 已制定最高允許殘留限量物質(zhì)) 三類。最終分析實(shí)驗(yàn)方案以及結(jié)果的時(shí)候，也需要針對三類物質(zhì)其自身的特性來執(zhí)行，而國際部分的組織在執(zhí)行這方面的驗(yàn)證工作的時(shí)候都對其有著較高的技術(shù)要求或可參考的技術(shù)參數(shù)。

如果從論證的有效性看，或者說從方法驗(yàn)證參數(shù)的科學(xué)程度來看，化學(xué)檢測的方法以及技術(shù)指標(biāo)都可以分為多種，其中包括從校準(zhǔn)曲線、回收率、精密度、準(zhǔn)確度 ( 正確度) 試驗(yàn)等。

在檢測中如對不同的樣品基質(zhì)，兩個(gè)重復(fù)樣品在三個(gè)含量水平上加以分析。建議的含量水平為空白（無分析物）、低濃度（接近方法的最低適用濃度）和高濃度（接近方法的最高適用濃度），可用標(biāo)準(zhǔn)加入法得到適當(dāng)?shù)纳疃?，可理解為按照同一個(gè)方法實(shí)施檢測時(shí)，將測試樣品分成兩個(gè)或更多部分。一部分進(jìn)行常規(guī)分析，其他部分在分析前加入已知量的標(biāo)準(zhǔn)分析物。而這些標(biāo)準(zhǔn)分析物的量也應(yīng)該有著一定的范圍，一般為樣品中分析物大致含量的兩倍到五倍，當(dāng)然也可以按照既定方法定量限，或是容許限等等均可以來以此計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)分析物的量。而如果想要衡量方法的回收率，那么可以采用標(biāo)準(zhǔn)添加法，不過這可以受限于樣品內(nèi)部的基質(zhì)以及分析物的實(shí)際含量，當(dāng)然這種方法也可以用于其他方面的評估，例如在定量限、容許限等水平上的正確度。

（1）方法的校準(zhǔn)曲線。實(shí)驗(yàn)室首先要找準(zhǔn)檢測方法校準(zhǔn)曲線的數(shù)學(xué)方程，并且劃分好校準(zhǔn)曲線的工作范圍，這樣才能使得其濃度有一個(gè)合適的范圍，使得濃度在一個(gè)數(shù)量級內(nèi)，至少作5 個(gè)點(diǎn) ( 不包括空白)。對于篩選方法 ( 即指定性方法或半定量方法)，方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0．98，對于確證方法( 即能準(zhǔn)確定量的方法)，方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0．99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。

（2）方法的回收率。被測物的濃度水平實(shí)際上是會影響到回收率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的，有可能會導(dǎo)致結(jié)果偏高，或是偏低，這就要求在實(shí)際的方法回收驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)時(shí)，一些禁用的物質(zhì)，以及回收率的方法測定應(yīng)當(dāng)分三水平，分別是低限 (LOD)、兩倍方法測定低限和十倍方法測定；而后針對已制定最高殘留限量MRL 的最大化學(xué)殘留量，回收率應(yīng)在方法LOD、MRL、選一合適點(diǎn)進(jìn)行三水平試驗(yàn)；對于未制定MRL 的，回收率應(yīng)在方法LOD、常見限量指標(biāo)、選一合適點(diǎn)進(jìn)行三水平試驗(yàn)。每一水平做雙平行。

（3）方法的精密度。方法的精密度于測試人員的穩(wěn)定水平相掛鉤，這也是其在實(shí)際測試過程當(dāng)中所能獲得測試結(jié)果的一種體現(xiàn)，在實(shí)際的測試以及驗(yàn)證過程當(dāng)中，對于禁用物質(zhì)，精密度試驗(yàn)也應(yīng)該分為三個(gè)量級，分別是LOD、兩倍LOD 和十倍LOD；對于已制定MRL 的，精密度試驗(yàn)的范圍為LOD、MRL，還有選一適合的點(diǎn)進(jìn)行測試，而針對部分沒有制定MRL 的，精密度試驗(yàn)發(fā)范圍應(yīng)該為LOD、常見限量指標(biāo)、選一合適點(diǎn)三個(gè)水平進(jìn)行。每一濃度水平的重復(fù)測定次數(shù)＞6。精密度測試的結(jié)果可通過實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的變異系數(shù)（CV= 標(biāo)準(zhǔn)偏差/ 平均值）來表達(dá)，標(biāo)準(zhǔn)偏差s 可通過貝塞爾Bessel 公式計(jì)算得到，并可參考實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)表給出的數(shù)據(jù)進(jìn)行精密度結(jié)果的評價(jià)。

（4）方法的準(zhǔn)確度。方這個(gè)準(zhǔn)確度同時(shí)也叫做準(zhǔn)確度，其代表的是對于視線樣品進(jìn)行重復(fù)的分析研究，來測定其含量，并且最終借助校正來得出測定值于實(shí)際值之間的差距。