段秀俊，劉 培，楊 超，張 娜，閉梅森，段青青，樸晉華

（1. 山西中醫(yī)藥大學中藥與食品工程學院 榆次 030619；2. 上海中醫(yī)藥大學中藥學院 上海 201203；3. 山西省食品藥品檢驗所 太原 030006）

雀腦為文鳥科動物麻雀（Passer montanus saturatus Stejneger）的新鮮腦組織經(jīng)加工炮制而成，始載于《名醫(yī)別錄》，并且《本草綱目》《食療本草》《動物本草》《滇南本草》《現(xiàn)代養(yǎng)生保健中藥辭典》《中國動物志》《中國動物藥志》《中藥大辭典》《肉禽蛋奶養(yǎng)生》《中華本草》等均有記載[1-8]。雀腦味甘，性平，歸腎經(jīng)，具有補腎興陽，潤膚生肌的作用，主治腎虛陽痿，耳聾，聤耳，凍瘡等[8]?！度彘T事親》曰：“臘月雀腦子，燒灰研細，小油調，涂凍瘡口上”，記載了雀腦治療凍瘡的功效；宋朝趙信《圣濟總錄》載：“取鮮雀腦如粟粒大，將耳道清洗干凈，直接將雀腦置于耳內，外以藥棉塞。每日換藥1 次，換藥時要清洗耳道，否則會有臭味，7日為1 療程”，記載了雀腦治療耳聾的功效。中醫(yī)認為，腎生骨髓，髓又充腦，故雀腦當有補腎之作用，故《滇南本草》謂本品：“入腎興陽澀精”?？梢娖湟灾文I與腦之虛證為主功效，對手足皸裂、凍瘡等癥可外涂患處；腎虛則應內服之?，F(xiàn)代研究認為，雀腦含維生素B1、B2、煙酸、維生素C、膽固醇及鈣、磷、鐵等礦物質[6]。

雀腦在國內屬冷背藥材，多民間習用，目前只有山西廣譽遠國藥有限公司養(yǎng)生國寶龜齡集將其作為組成藥味入成方制劑，且只有《山西省中藥材標準》1987 版附錄簡單收載該品種的來源與制法[9]。為規(guī)范山西省地方用藥，提高山西省地方用藥標準，山西省食品藥品監(jiān)督管理局于2011 年啟動地方標準修訂工作時，將雀腦列為首批研究品種之一。本課題組對雀腦的來源、名稱、別名、動物形態(tài)、采收加工、性味歸經(jīng)、功能主治、用法用法等的歷代古文獻記載情況進行了系統(tǒng)梳理，并對其化學成分、藥理作用、毒理等現(xiàn)代的研究報道進行了分析，更對其質量標準相關內容進行了較為系統(tǒng)的研究，重點包括鑒別、檢查、含量測定，這也是首次對該藥材進行質量控制研究，具體內容如下。

1 儀器和材料

1.1 儀器

日立L-8900 氨基酸自動分析儀（HITACHI NO.852-0062）；FB223 自動內校電子分析天平（上海舜宇恒平科學儀器有限公司）；DHG-9075A 型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科技有限公司）；FA2140型電子分析天平（上海精密科學儀器有限公司）；KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BX53正置熒光顯微鏡（Olympus Corporation,Japan）；SX2-4-10 馬弗爐（爐南電爐烘箱廠，上海亞明熱處理設備有限公司）；KDN-04C凱氏定氮儀（浙江托普儀器有限公司）；AUW120D 電子天平（島津）；SHB 循環(huán)水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；SY-2000 旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；HH-2 數(shù)顯恒溫水浴鍋（金壇市杰瑞爾電器有限公司），ZNHW-II 智能恒溫電熱套（鞏義市予華儀器有限責任公司），5 mL 容量瓶，10 mL 容量瓶，25 mL 容量瓶，50 mL 容量瓶，50 mL 圓底燒瓶，100 mL 圓底燒瓶，量筒，試管夾，球形冷凝管，鐵架臺，橡膠管，鐵夾，雙頂絲，移液管，吸耳球，膠頭滴管，燒杯。

1.2 材料

丙氨酸對照品（中國藥品生物制品檢定院，含量測定用，批號：140680-201002）；氨基酸混合物對照品（日本W(wǎng)ako 公司，批號：KPP5222，每種氨基酸濃度為2.5 μmol·mL-1，含天門冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、精氨酸等17 種常規(guī)蛋白水解液層析純氨基酸）；茚三酮溶液（批號KQF6365）、茚三酮緩沖液（批號KQF6365）；流動相溶液[PH-1（批號 A5259H1）、PH-2（批號A5259H2）、PH-3（批 號 A5259H3）、PH-4（批 號A5259H4）、PH-RG（批號A5259HRG）]為色譜純（日本W(wǎng)ako 公司）；水為娃哈哈純凈水；其余試劑均為分析純。雀腦3批（因麻雀屬于國家二級保護動物，故實驗只研究了3 批藥材，廣譽遠提供了2 批，自己收購麻雀取腦1批），經(jīng)山西中醫(yī)藥大學裴香萍副教授鑒定為文鳥科動物麻雀的新鮮腦組織。

2 方法與結果

2.1 鑒別

2.1.1 性狀鑒別

本品為淺黃棕色的粉末及碎片；氣腥，味淡，生雀腦為深黃褐色粉末；氣腥，味淡（見圖1）。

2.1.2 顯微鑒別

實驗于400 倍顯微鏡下觀察到樹突碎節(jié)，長者形如樹杈狀分叉,短者為短圓柱體形，橫斷面類圓形。于1 000 倍油鏡下，觀察到分叉狀明顯的樹突碎節(jié)外，且觀察到神經(jīng)纖維、其髄鞘及神經(jīng)膜呈鞘狀分節(jié)段包裹在軸突周圍，形似藕節(jié)，其間斷部位，軸膜裸露，俗稱郎飛結（見圖2）。

2.1.3 薄層鑒別

取本品粉末0.2 g，加70%乙醇5 mL，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另隨機取20111001 批雀腦藥材作為對照藥材，同法制備對照藥材溶液。再取丙氨酸對照品，加70%乙醇制成每1 mL含0.5 mg 的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中華人民共和國藥典》2015年版四部0502薄層色譜法）試驗，吸取供試品溶液及對照藥材溶液各2 μL、對照品溶液1 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%茚三酮丙酮溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點（見圖3）。

圖1 雀腦性狀特征

圖2 雀腦顯微特征

2.2 檢查

2.2.1 水分

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 年版四部0832水分測定法之第二法（烘干法）進行檢查，3 批雀腦的測定結果見表1，水分介于5.57%-5.83%之間。

2.2.2 總灰分

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 年版四部2302灰分測定法之總灰分測定法進行檢查。3批雀腦的總灰分測定結果見表2，總灰分介于4.40%-4.70%之間。

圖3 雀腦薄層色譜圖

表1 雀腦水分測定結果（n=2）

2.2.3 酸不溶性灰分

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 年版四部2302灰分測定法之酸不溶性灰分測定法進行檢查。3批雀腦的酸不溶性灰分的測定結果見表3，酸不溶性總灰分介于0.28%-0.38%之間。

2.3 含量測定

2.3.1 總氮量

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 年版四部0704氮測定法之第三法定氮儀進行檢查。3 批雀腦的總氮量測定結果見表4，總氮量介于6.49%-7.04%之間。

2.3.2 17種氨基酸的測定

2.3.2.1 色譜條件[10-21]

分離柱：離子交換樹脂2622 柱（4.6 mm×60 mm）；反應柱：離子交換樹脂2619 柱（4.6 mm×60 mm）；除氨柱：離子交換樹脂2650 柱（4.6 mm×40 mm）；流動相：分兩部分 B1-B6 和 R1-R3，B1-B4 分別為 PH1、PH2、PH3、PH4的檸檬酸鈉緩沖液，B5為純水，B6為PH-RG，R1-R3分別為茚三酮溶液、茚三酮緩沖液，洗脫程序見表5；柱溫：分離柱57℃，反應柱135℃；流速：分離柱0.400 mL·min-1，反應柱0.350 mL·min-1；檢測波長：440 nm及570 nm；進樣量20 μL。此條件下，各氨基酸的分離度良好（見圖4）。

表2 雀腦總灰分測定結果（n=2）

表3 雀腦酸不溶性灰分測定結果（n=2）

表4 雀腦總氮量測定結果（n=2）

2.3.2.2 氨基酸對照品溶液的配制

精密吸取40 μL 的氨基酸混合物標準品母液，用0.02 mol·L-1鹽酸溶液定容到 1 000 μL，混勻，做為對照品溶液（濃度0.1 nmol·μL-1）。

2.3.2.3 供試品溶液的制備

取雀腦藥粉（過5 號篩）約0.04 g，精密稱定，置25 mL 水解管中，加入 6 mol·L-1鹽酸溶液 10 mL，氮氣保護下封管，110 ℃水解24 h。取出，冷卻，濾過，精密吸取水解液 5 mL 于 25 mL 容量瓶中，用 6 mol·L-1氫氧化鈉溶液調pH 至7.0，純水定容至刻度。再精密吸取2.5 mL于5 mL容量瓶中，用0.02 mol·L-1鹽酸溶液定容至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過。

2.3.2.4 線性關系考察

精密吸取“2.3.2.2”項下對照品溶液80 μL，加入920 μL濃度為0.02 mol·L-1的鹽酸溶液混勻，按2倍稀釋的方法配制濃度分別為 0.2 μmol·mL-1、0.1 μmol·mL-1、0.05 μmol·mL-1、0.025 μmol·mL-1、0.0125 μmol·mL-1的混合對照品溶液。分別吸取上述各溶液20 μL，注入氨基酸分析儀，測定17 種氨基酸的峰面積值，以對照品濃度為橫坐標，峰面積值為縱坐標，分別進行線性回歸，17 種氨基酸的回歸方程及相關系數(shù)結果見表6。17 種氨基酸在 0.0125-0.2 μmol·mL-1范圍內均呈良好的線性關系。

表5 梯度洗脫程序

圖4 雀腦氨基酸測定色譜圖

2.3.2.5 精密度實驗

吸取濃度為0.1 μmol/mL 的氨基酸混合標準溶液20 μL，注入氨基酸自動分析儀，連續(xù)重復進樣6次，分別測定17種氨基酸的峰面積并計算各自RSD值，結果見表6，表明該方法精密度良好。

2.3.2.6 穩(wěn)定性實驗

取同一供試品溶液（20111001 批），分別于0、2、4、6、8、10 h 注入氨基酸分析儀，依法測定17 種氨基酸的峰面積值并計算各自RSD 值，結果見表6，表明供試品溶液在10 h內穩(wěn)定性良好。

2.3.2.7 重復性實驗

取 20111001 批雀腦藥材 6 份，每份約 0.04 g，精密稱定，分別按2.3.2.3 項下方法制備供試品溶液，按2.3.2.1 項下色譜條件測定，計算17 種氨基酸的含量并計算其RSD 值，結果見表6，表明該方法重復性良好。

2.3.2.8 加樣回收率試驗

取已測知17 種氨基酸含量的20111001 批雀腦藥材6份，每份約0.02 g，分別精密稱定，根據(jù)所測氨基酸濃度各加入適量的混合對照品溶液，按“2.3.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.2.1”項下色譜條件測定，計算17 種氨基酸回收率，結果見表6，17 種氨基酸的回歸率介于97.38%-102.19%，相對標準偏差（RSD）介于1.24%-2.47%，表明該方法準確性良好。

2.3.2.9 樣品含量測定

取3 批雀腦藥材，每批2 份，每份約0.04 g，分別精密稱定，按2.3.2.3 項下方法制備供試品溶液，2.3.2.1 項下色譜條件測定，計算17 種氨基酸含量，結果見表7。

表6 方法學考察試驗結果

表7 氨基酸含量測定結果（n=2）

3 討論

雀腦作為一味補益腎陽，潤膚生肌作用明顯的傳統(tǒng)中藥，目前尚無關于其有效質量控制研究的文獻記載及相關報道，本研究遵循中藥材質量標準制訂的規(guī)范要求，重點對質量標準研究的關鍵內容鑒別、檢查、含量測定進行報道，對于制訂該藥材的質量標準具有明顯的參考價值，對于規(guī)范該藥材的采收加工、市場流通、臨床用藥及涉及的相應制劑的質量控制具有積極意義。

雀腦為動物的神經(jīng)組織，以神經(jīng)細胞與神經(jīng)膠質細胞為主，但由于新鮮雀腦含水量可達75%，干燥后組織基本破碎，顯微鏡下難以觀察到完整的細胞結構，而目前又未有關于動物干燥腦組織的顯微鑒別報道，經(jīng)與組胚學及病理學專家研討，并參考人體解剖學對神經(jīng)系統(tǒng)特征的描述，實驗最終找到了雀腦的特征顯微組織，即破碎樹突與神經(jīng)纖維碎節(jié)，這也是首次對動物干燥腦組織的顯微特征進行研究與報道，為以后此類動物藥的顯微鑒別提供了實驗參考，也為動物特定組織的藥用部位顯微鑒別提供了思路。

實驗曾選擇多種氨基酸為對照，研究雀腦的薄層鑒別行為，結果以丙氨酸斑點最為清晰，且重現(xiàn)性好，故選定丙氨酸為對照品。同時，實驗對薄層鑒別的重現(xiàn)性和耐用性進行了研究，考察了雀腦在兩個廠牌（青島海洋化工廠與煙臺市江友硅膠開發(fā)有限公司之芝罘黃務硅膠開發(fā)實驗廠）的硅膠G 預制板及自制硅膠G 板上的薄層層析行為，并考察了雀腦在三個不同展開系統(tǒng)[正丁醇-冰醋酸-水（3∶1∶1）、正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1）、正丁醇-冰醋酸-水（8∶3∶1）]下的薄層層析行為，結果雀腦藥材均主斑點清晰。這也是雀腦藥材的首次薄層鑒別研究報道。

文獻記載，雀腦藥用部位均為腦髓，應包括腦組織與髓，但實際藥用只用腦而不用髓，故項目組將雀腦的用藥部位規(guī)范為腦組織，同時，將文獻記載的采收加工中的腦殼規(guī)范為顱骨。本課題組的實驗首次采用一測多評法對藥材中的17 種氨基酸進行了定量分析，實驗結果顯示不同批次雀腦中17種氨基酸含量各不相同，且總氨基酸含量及必需氨基酸含量也差異較大，提示雀腦藥材的氨基酸含量受采收季節(jié)、雀齡、地區(qū)等的影響較為明顯。