張曉宇，劉 柳

（保定三九濟世生物藥業(yè)有限公司，河北定興 072656）

注射用復方骨肽適用于風濕、類風濕性關節(jié)炎、骨質疏松、頸椎病等疾病的癥狀改善，同時用于骨折及骨科手術后愈合，可促進骨愈合和骨新生，為我公司獲批生產的凍干粉針劑，其規(guī)格為30 mg的多肽物質，熱原控制[1]采用家兔法。研究復方骨肽的細菌內毒素檢查法的可行性，分析如下：

1 儀器與試藥

細菌內毒素工作標準品（規(guī)格：5 EU/支，批號：0903140，湛江博康海洋生物有限公司）；鱟試劑（TAL，規(guī)格：0.25 EU/ml，批號：0811040、0902202，湛江博康海洋生物有限公司與湛江安度斯生物有限公司）；細菌內毒素檢查用水（BET水，規(guī)格：5 ml/支，批號：090223，湛江博康海洋生物有限公司）；注射用復方骨肽（規(guī)格：30 mg，批號：091003、091108、091205，保定三九濟世生物藥業(yè)有限公司）；并按照2005年版《中國藥典》二部中方法所用試管、吸管等玻璃儀器準備。

2 方法與結果

2.1 TAL靈敏度復核

采用BET水將細菌內毒素工作標準品稀釋成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 等系列濃度進行試驗。方法根據《中國藥典》2005年版二部附錄細菌內毒素檢查法[2]進行。結果：兩批鱟試劑靈敏度測定值λc均在0.5 λ～2.0 λ范圍內，靈敏度符合規(guī)定。

2.2 細菌內毒素限值（L）的確定

由公式L=K/M計算，說明書中為L=2 EU/mg，本實驗最終限值定為1 EU/mg。

2.3 干擾試驗預試驗

干擾試驗預試驗是在進行干擾試驗之前要進行的試驗，主要目的是排除樣品中內毒素的干擾。由同一批號鱟試劑，對不同稀釋級別做2支供試品管（NPC），2支供試品陽性對照（PPC），同時以BET水建立2支陰性對照（NC）和 2支陽性對照（PC）。實驗結果NC均為陰性，PC均為陽性，結果見表2，由結果可知，樣品最大不干擾濃度為30 mg/ml。

表1 干擾試驗預試驗Tab.1 Pre-experimental interference test

2.4 正式干擾試驗

選擇3批未檢測出熱原的供試品，以供試品溶液將細菌內毒素工作標準品制備成 2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ 系列濃度，同時最終供試品溶液的濃度為30 mg/ml，另外同時以BET水制備上述濃度系列的細菌內毒素溶液。分別以上述供試品及BET水制備的內毒素溶液與兩個廠家的鱟試劑混合進行干擾試驗，并建立兩管相應的供試品及BET水陰性對照。結果見表3。由結果可知，Et均在0.5 ES～2.0 ES范圍內，且 ES 在 0.5 λ～2.0 λ 范圍內，故在 30 mg/ml濃度下，注射用復方骨肽不干擾細菌內毒素與鱟試劑的凝聚反應。

3 討論

細菌內毒素檢查法已經被各國藥典正式收載，作為一種新技術與新方法，已經得到廣泛的應用。細菌內毒素檢查法的優(yōu)點明顯優(yōu)于家兔法，《中國藥典》2000年版新增47種品種采用細菌內毒素檢查法，其中生化藥品占13種。生化類藥品是繼抗生素類藥品之后需要進行熱源檢查的第二大類需檢藥品，而本文針對不同批號的注射用復方骨肽進行細菌內毒素檢查法檢測，證明原液在30 mg/ml濃度的情況下，注射用復方骨肽對于細菌內毒素與鱟試劑的凝聚反應無干擾作用，足以說明對注射用復方骨肽采用細菌內毒素法是可行的，具有重要的參考意義，建議《中國藥典》在鱟試劑的假陽性和特異性方面作一些修訂。筆者認為，有必要加快對以上生化藥品的研究步伐，充分發(fā)揮藥學教育和科研部門的潛力和積極性。相信隨著用鱟試劑檢測藥品細菌內毒素的研究深入，將會有更多品種采用此種方法。

表2 注射用復方骨肽（30 mg/ml）細菌內毒素干擾試驗Tab.2 Compound Ossotide Injection(30 mg/ml)bacterial endotoxin test

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