湯士勇，賈 丹

(滁州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 食品與環(huán)境工程學(xué)院，安徽 滁州 239000)

滁菊是四大藥菊之一，藥食兩用，也是國家地理標(biāo)志產(chǎn)品。[1]黑斑病是滁菊葉部的主要病害，危害嚴(yán)重年份，常造成葉片枯死達(dá)30%～50%，單株花朵減少30%～50%。[2]許高娟、葉琪明等研究表明菊花黑斑病的病原是鏈格孢屬真菌。[3-5]本試驗在前期病原菌的分離鑒定中參考趙喜婷等的方法[6]，分離鑒定出滁菊黑斑病的病原菌也為鏈格孢屬真菌。滁菊無公害生產(chǎn)中，病蟲害防治以預(yù)防為主，在現(xiàn)蕾后一般禁止噴施農(nóng)藥，因此，滁菊葉部病害的藥物防治主要是在苗期進(jìn)行。本研究選取生產(chǎn)中常用的幾種高效、低殘留、低抗藥性的殺菌劑，擬通過對滁菊黑斑病病原菌室內(nèi)抑菌效果的測定，為篩選防治滁菊苗期黑斑病藥劑提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1供試菌株

供試菌株從滁州職業(yè)技術(shù)學(xué)院校內(nèi)滁菊生產(chǎn)實訓(xùn)基地發(fā)病滁菊植株葉片上分離獲得，經(jīng)純化及致病性鑒定并通過形態(tài)學(xué)及分子鑒定確定為鏈格孢(Alternariaalternata)。

1.1.2供試藥劑

病原菌室內(nèi)毒力測定的農(nóng)藥劑型及來源見表1。

表1 供試農(nóng)藥劑型及來源

1.2 方法

1.2.1孢子萌發(fā)率測定

采用孢子萌發(fā)率測定法測定不同殺菌劑對鏈格孢(Alternariaalternata)孢子萌發(fā)抑制作用。用取樣器吸取0.5mL孢子懸液與0.5mL農(nóng)藥母液(濃度梯度為2×0.2、2×1.0、2×5.0、2×25.0、2×125.0μg/mL，含1%葡萄糖)等量混合均勻。加入凹玻片，架放于帶有淺層水的培養(yǎng)皿中加蓋保濕，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后檢測孢子萌發(fā)率，計算孢子萌發(fā)抑制率并進(jìn)行毒力回歸分析，得出EC50。每處理重復(fù)3次，以含1%葡萄糖的蒸餾水作為對照。

孢子萌發(fā)率(%)=萌發(fā)孢子數(shù)/檢查孢子總數(shù)×100。

孢子萌發(fā)抑制率(%)=(對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率)/對照孢子萌發(fā)率×100。

1.2.2菌絲生長速率測定

采用生長速率法測定不同殺菌劑對黑斑病病原鏈格孢(Alternariaalternata)菌絲生長的抑制作用。在含藥PDA平板(藥劑濃度梯度為0.2、1.0、5.0、25.0、125.0μg/mL)上接種直徑5mm的菌餅，25℃恒溫箱中黑暗培養(yǎng)7d，用十字交叉法測量菌落直徑，計算抑菌率并進(jìn)行毒力回歸分析，得出EC50，每處理重復(fù)3次，以不加藥劑的PDA平板為對照。

菌落凈生長量(mm)=平均菌落直徑(mm)-菌餅直徑(mm)。

菌絲生長抑制率(%)=(對照菌落凈生長量-處理菌落凈生長量)/對照菌落凈生長量 ×100。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用Excel整理數(shù)據(jù)并計算、SPSS進(jìn)行方差、概率單位回歸分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 對病原菌孢子萌發(fā)的影響

8種不同殺菌劑對鏈格孢菌孢子萌發(fā)均有較強的抑制作用，同種藥劑孢子萌發(fā)抑制率隨著藥劑濃度的增加而增加；在濃度為125μg/mL時百菌清、多菌靈、咪鮮胺3種藥劑孢子萌發(fā)抑制率>90%；在濃度為0.2μg/mL時甲基硫菌靈、代森錳鋅孢子萌發(fā)抑制率<10%；異菌脲、氟硅唑在25與125μg/mL濃度水平上，丙環(huán)唑在5與25μg/mL濃度水平上孢子萌發(fā)抑制率差異不顯著。見表2。

表2 不同殺菌劑對鏈格孢菌孢子萌發(fā)的抑制效果

不同殺菌劑抑制黑斑病鏈格孢菌孢子萌發(fā)的試驗表明：異菌脲、丙環(huán)唑、氟硅唑的EC50值<1μg/mL，效應(yīng)較強，其中丙環(huán)唑EC50值最小(0.673μg/mL)，效應(yīng)最強；代森錳鋅、多菌靈、甲基硫菌靈的EC50值>5μg/mL，效應(yīng)較弱，其中甲基硫菌靈的EC50值最大(19.452μg/mL)，效應(yīng)最弱，但甲基硫菌靈的回歸方程斜率最大(0.947)表明：甲基硫菌靈的抑制孢子萌發(fā)效果隨濃度變化較大。見表3。

表3 不同殺菌劑對鏈格孢菌孢子萌發(fā)的毒力比較

2.2 對病原菌菌絲生長的影響

8種不同殺菌劑對滁菊葉斑病病原菌的菌絲生長均有抑制作用，且同一藥劑抑菌率基本隨著濃度的增大而增加。代森錳鋅、百菌清、丙環(huán)唑在濃度為0.2與1.0μg/mL處理間抑菌作用差異不顯著；異菌脲、氟硅唑在濃度為25與125μg/mL處理間抑菌作用差異不顯著；多菌靈在濃度為0.2與1.0μg/mL、1.0與5.0μg/mL處理間差異不顯著；甲基硫菌靈在1.0與5.0μg/mL處理間差異不顯著。在濃度為125μg/mL濃度時異菌脲的抑菌作用最強(96.10%)，在濃度為0.2μg/mL時代森錳鋅抑菌率最低(8.62%)，如表4所示。

表4 不同殺菌劑對鏈格孢菌菌絲生長的抑菌效果

不同殺菌劑抑制黑斑病鏈格孢菌菌絲生長的試驗表明：百菌清、異菌脲、多菌靈、氟硅唑的EC50值<1μg/mL，效應(yīng)較強，其中氟硅唑EC50值最小(0.046μg/mL)，效應(yīng)最強；代森錳鋅的EC50值為18.787>5μg/mL，效應(yīng)最弱，但是代森錳鋅的回歸方程斜率最大(0.857)表明代森錳鋅的抑制菌絲生長效應(yīng)隨濃度變化較大。見表5。

表5 不同殺菌劑對鏈格孢菌菌絲生長的毒力比較

3 結(jié)論與討論

綜合抑制孢子萌發(fā)試驗和抑制菌絲生長試驗結(jié)果，異菌脲、氟硅唑兩種藥劑在抑制滁菊黑斑病鏈格孢菌的孢子萌發(fā)和菌絲生長兩方面效應(yīng)均較強，應(yīng)該作為下一步田間防效試驗的優(yōu)先選用藥劑。同時也發(fā)現(xiàn)，同種藥劑對孢子萌發(fā)和菌絲生長的效應(yīng)并不完全一致。因此，在田間試驗中應(yīng)考慮同種藥劑在黑斑病不同發(fā)病期的防效。