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        亞麻籽餅粕蛋白提取工藝優(yōu)化及其水解物抑制α-淀粉酶活性研究

        2020-11-24 06:25:46周浩純李赫趙迪張文敏張健劉憲勇劉新旗
        食品研究與開(kāi)發(fā) 2020年21期

        周浩純,李赫,趙迪,張文敏,張健,劉憲勇,劉新旗

        (1.北京工商大學(xué)北京食品營(yíng)養(yǎng)與人類(lèi)健康高精尖創(chuàng)新中心,北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心,北京100048;2.青州市荷官鎮(zhèn)人民政府,山東濰坊262500;3.武警山東總隊(duì)醫(yī)院,山東濟(jì)南250014)

        亞麻籽是我國(guó)西北地區(qū)常見(jiàn)的油料作物之一,亞麻籽經(jīng)過(guò)壓榨取油后的副產(chǎn)物為亞麻籽餅粕,亞麻籽餅粕中蛋白含量在32%~49%之間,亞麻籽餅粕蛋白具有與大豆分離蛋白相似的氨基酸模式,含有人體所必需的8種氨基酸,是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)來(lái)源[1-3]。然而亞麻籽餅粕通常被作為動(dòng)物飼料、肥料或者廢料處理,這造成了資源的極大浪費(fèi)。因此從亞麻籽餅粕中提取蛋白對(duì)于開(kāi)發(fā)利用亞麻籽餅粕的潛在價(jià)值具有現(xiàn)實(shí)意義。亞麻籽蛋白中球蛋白(11 s、2 s)含量為56%~73.4%,其分子量分別約為 252 kDa~298 kDa、10 kDa~50 kDa,白蛋白(1.6 s、2 s)含量為 20%~42%,分子量為10、16 kDa~17 kDa[4-6]。植物分離蛋白具有一定的生理活性如抗氧化[7]、降血壓[8]、免疫調(diào)節(jié)[9]、調(diào)節(jié)血糖[10]。

        體外酶解蛋白質(zhì)獲得小分子肽是對(duì)蛋白進(jìn)行深層次利用的方法之一,蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)體外酶解后得到小分子肽,暴露出更多的活性部位。α-淀粉酶是一種糖苷水解酶,通過(guò)水解淀粉內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵將淀粉水解為糊精、低聚糖和單糖,促進(jìn)淀粉的消化吸收。α-淀粉酶抑制劑通過(guò)抑制唾液及腸道中淀粉酶的活性從而阻礙碳水化合物的消化吸收,降低血糖水平[11]。Vilcacundo等[12]通過(guò)體外模擬消化制備藜麥降血糖活性肽發(fā)現(xiàn)經(jīng)十二指腸消化階段后的酶解產(chǎn)物具有更高的α-淀粉酶抑制活性,張一帆等[13]酶解楊梅蛋白制得的多肽產(chǎn)物顯示出α-糖苷酶抑制活性從而起到降血糖功能。亞麻籽蛋白經(jīng)過(guò)酶解之后可提高生物活性,但是目前關(guān)于亞麻籽α-淀粉酶抑制活性肽的研究較少。

        本文以亞麻籽餅粕為原料,利用Design-Expert V8.0.6軟件中心組合設(shè)計(jì),對(duì)5個(gè)主要工藝參數(shù),即料液比、pH值、浸提溫度、一次浸提時(shí)間及二次浸提時(shí)間進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)試驗(yàn),以獲取最佳提取條件。并測(cè)定了亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)及不同蛋白酶酶解產(chǎn)物的α-淀粉酶抑制活性,為副產(chǎn)物亞麻籽餅粕蛋白的提取及α-淀粉酶抑制活性肽的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        亞麻籽餅粕:榮海生物科技有限公司;豬胰α-淀粉酶(13 U/mg)、3,5-二硝基水楊酸(3,5-dinitro salicylic acid,DNS)、可溶性淀粉、堿性蛋白酶(300 U/mg)、中性蛋白酶(100 U/mg)、胰蛋白酶(250 U/mg):上海源葉生物有限公司,其他所用試劑均為分析純。

        1.2 儀器與設(shè)備

        Milli-Q Integral 5型純水儀:德國(guó)默克密理博公司;KJELTEC 8000型全自動(dòng)凱式定氮儀:丹麥FOSS集團(tuán)公司;THZ-92B型漩渦振蕩器、HH.S11-4型電熱恒溫水浴鍋:上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;C-MAG HS 7型磁力攪拌器:德國(guó)IKA公司;X-30R型臺(tái)式高速離心機(jī):美國(guó)Beckman Coulter有限公司;Cary 60 UV-Vis型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):安捷倫科技有限公司;AKTA pure型蛋白純化儀:美國(guó)通用電氣公司。

        1.3 方法

        1.3.1 堿提酸沉法提取亞麻籽餅粕蛋白工藝流程

        方法參考文獻(xiàn)[14-15]并略做修改,對(duì)亞麻籽餅粕蛋白的提取方法見(jiàn)圖1。

        圖1 堿提酸沉法提取亞麻籽餅粕蛋白工藝流程Fig.1 Process for extracting flaxseed cake protein by alkali extraction and acid precipitation

        1.3.2 亞麻籽餅粕蛋白含量的測(cè)定

        利用凱氏定氮法測(cè)定亞麻籽餅粕蛋白含量,方法參考國(guó)標(biāo)GB 5009.5-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》,轉(zhuǎn)換系數(shù)設(shè)置6.25。按照式(1)計(jì)算亞麻籽餅粕蛋白的提取率。

        1.3.3 亞麻籽餅粕蛋白提取的單因素試驗(yàn)

        影響蛋白提取率的因素主要有料液比、浸提溫度、pH值、一次浸提時(shí)間以及二次浸提時(shí)間。準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的亞麻籽餅粕樣品,按照以上5個(gè)因素選取不同的水平做單因素試驗(yàn),提取步驟按本文1.3.1。利用凱氏定氮法測(cè)定亞麻籽餅粕蛋白含量,按照公式(1)計(jì)算蛋白的提取率。

        1.3.3.1 料液比對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g亞麻籽餅粕,設(shè)置料液比為1 ∶10、1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25、1 ∶30、1 ∶35(g/mL),50 ℃條件下,堿液(pH 9.5)一次浸提2 h,二次浸提 1 h,考察液料比對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取的影響。

        1.3.3.2 浸提溫度對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g亞麻籽餅粕,設(shè)置浸提溫度為30、40、50、60、70、80 ℃,料液比 1 ∶20(g/mL)條件下,堿液(pH 9.5)一次浸提2 h,二次浸提1 h,考察浸提溫度對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取的影響。

        1.3.3.3 pH值對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g亞麻籽餅粕,設(shè)置pH值為8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5,在料液比為 1 ∶20(g/mL)、浸提溫度為50℃的條件下,堿液一次浸提2 h,二次浸提1 h,考察pH值對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取的影響。

        1.3.3.4 一次浸提時(shí)間對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g亞麻籽餅粕,設(shè)置一次浸提時(shí)間為60、80、100、120、140、160 min,在料液比為 1 ∶20(g/mL)、浸提溫度為50℃的條件下,堿液(pH9.5)二次浸提1 h,考察一次浸提時(shí)間對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取的影響。

        1.3.3.5 二次浸提時(shí)間對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5.000 g亞麻籽餅粕,設(shè)置二次浸提時(shí)間為 0、30、60、90、120、150 min,在料液比為 1 ∶20(g/mL)、浸提溫度為50℃的條件下,堿液(pH 9.5)一次浸提2 h,考察二次浸提時(shí)間對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取的影響。

        1.3.4 響應(yīng)面法優(yōu)化亞麻籽餅粕蛋白提取工藝試驗(yàn)

        在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,根據(jù)中心組合設(shè)計(jì)(Box-Behnken),采用軟件Design Expert V8.0.6建立五因素三水平的試驗(yàn),確定亞麻籽餅粕蛋白提取的最佳工藝條件。以Y蛋白提取率為考察指標(biāo),液料比(A)、一次浸提時(shí)間(B)、溫度(C)、二次浸提時(shí)間(D)以及pH值(E)為自變量,用+1、0、-1分別代表自變量的水平,亞麻籽餅粕蛋白提取率為響應(yīng)值,因素水平編碼見(jiàn)表1。

        表1 響應(yīng)面設(shè)計(jì)因素水平編碼表Table 1 Response surface design factor level coding table

        1.3.5 亞麻籽蛋白酶解產(chǎn)物制備

        采用堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、復(fù)合酶1(堿性蛋白酶 ∶胰蛋白酶=1 ∶1,酶活比)、復(fù)合酶 2(胰蛋白酶∶中性蛋白酶=1∶1,酶活比)和復(fù)合酶3(堿性蛋白酶∶中性蛋白酶=1∶1,酶活比)對(duì)亞麻籽提取蛋白進(jìn)行液態(tài)酶解,料液比為1∶20(g/mL),蛋白酶用量為4 500 U/g蛋白,分別在蛋白酶的最適溫度和pH值條件下酶解6 h,并在酶解過(guò)程中調(diào)整pH值,酶解結(jié)束后85℃加熱15 min滅酶,并將酶解液4 500 r/min離心30 min取上清,冷凍干燥,制得亞麻籽蛋白酶解產(chǎn)物。亞麻籽蛋白酶解用酶見(jiàn)表2。

        表2 亞麻籽蛋白酶解用酶Table 2 Enzymes for the hydrolysis of flaxseed protease

        1.3.6 α-淀粉酶抑制活性

        參照參考文獻(xiàn)[16]的方法分別測(cè)定亞麻籽餅粕蛋白和酶解產(chǎn)物α-淀粉酶的抑制活性,將0.25 mL抑制劑和0.25 mL α-淀粉酶液加入到0.5 mL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)(pH 6.9) 溶液中,37 ℃水浴10 min后,加入0.5 mL 1%的可溶性淀粉,精確反應(yīng)5 min后加入1 mL DNS試劑,100℃水浴10 min后迅速冷卻,加入5 mL超純水,在540 nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度,測(cè)定過(guò)程中設(shè)置空白對(duì)照管、抑制對(duì)照管和空白管。按照式(2)計(jì)算α-淀粉酶抑制率。

        式中:A1、A2、A3和 A4分別為空白管、空白對(duì)照管、抑制管和抑制對(duì)照管在540 nm下的吸光度值。

        1.3.7 酶解產(chǎn)物分子量分布

        凝膠色譜法測(cè)定酶解產(chǎn)物的分子量分布,采用儀器為GE AKTA pure蛋白純化系統(tǒng),色譜柱型號(hào)為SuperdexTM30increase10/300GL,流動(dòng)相:50 mmol/L 磷酸鹽緩沖液pH6.8,流速:0.5 mL/min,等度洗脫,檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm。標(biāo)準(zhǔn)品分子量分別為 75、43、29、13.7、6.5 kDa,酶解產(chǎn)物的上樣濃度為10 mg/mL,上樣體積設(shè)置為100 μL。

        1.4 數(shù)據(jù)分析

        采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(通過(guò)3次平行試驗(yàn)),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 亞麻籽餅粕蛋白提取的單因素試驗(yàn)結(jié)果

        試驗(yàn)研究了亞麻籽餅粕粉料液比、浸提溫度、pH值、一次浸提時(shí)間和二次浸提時(shí)間對(duì)堿提-酸沉法提取亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)的影響,結(jié)果如圖2~圖4所示。

        圖2 料液比對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響Fig.2 Relationship between ratio of flaxseed cake to solution and extraction rate of flaxseed cake protein

        圖3 溫度和pH值對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響Fig.3 Effects of temperature and pH on protein extraction rate of flaxseed cake

        圖4 浸提時(shí)間對(duì)亞麻籽餅粕蛋白提取率的影響Fig.4 Effect of extraction time on protein extraction rate of flaxseed cake

        如圖2所示,亞麻籽餅粕蛋白提取率隨著溶劑體積的增大而逐漸增加。在料液比為1∶10(g/mL)時(shí),由于溶液的黏度較大,分子擴(kuò)散速率較低,體系分散不均勻,導(dǎo)致體系pH值不均勻,影響了蛋白質(zhì)的溶出,因此,蛋白的提取率較低[17]。當(dāng)料液比為 1∶20(g/mL)時(shí)蛋白的提取率達(dá)到最大值,此后隨著溶劑體積的增大蛋白的提取率已逐漸降低。因此,最佳料液比確定為1 ∶20(g/mL)。

        由圖3可知,浸提溫度對(duì)亞麻籽餅粕蛋白的提取率有較大的影響。在30℃~50℃之間,亞麻籽餅粕蛋白的提取率隨著浸提溫度的增加而增加,當(dāng)浸提溫度達(dá)到50℃時(shí),蛋白的提取率最大;當(dāng)溫度繼續(xù)升高時(shí),蛋白的提取率反而逐漸下降,這可能是隨著浸提溫度的升高,有些蛋白的空間構(gòu)象發(fā)生了變化而致其變性,蛋白的提取率降低。因此,最佳浸提溫度確定為50℃。pH值對(duì)亞麻籽餅粕蛋白的提取率的影響呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)。在pH 9.5時(shí),蛋白的提取率達(dá)到最大值。當(dāng)pH值繼續(xù)增加時(shí),蛋白質(zhì)的提取率反而會(huì)下降,這可能是由于過(guò)高的pH值導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)發(fā)生變性,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)的提取率下降。因此,最佳pH值確定為9.5。

        由圖4可知,隨著提取時(shí)間增長(zhǎng)蛋白質(zhì)的提取率逐漸增加,一次浸提時(shí)間在120 min,二次浸提時(shí)間在60 min時(shí),繼續(xù)延長(zhǎng)提取時(shí)間,蛋白質(zhì)的提取率增幅變化較小,因此確定一次浸提時(shí)間為120 min,二次浸提時(shí)間為60 min。

        2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取工藝試驗(yàn)結(jié)果

        2.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果

        采用五因素三水平的響應(yīng)面法對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,響應(yīng)面的設(shè)計(jì)及結(jié)果如表3所示。

        表3 響應(yīng)面法試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Respond surface experimental design and results

        2.2.2 模型回歸方程的建立及各因素對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取率的影響

        利用Design-Expert V8.0.6軟件進(jìn)行多元回歸擬合,得到回歸模型方程:Y/%=85.93-0.37A+2.31B+0.45C+0.68D+2.57E-0.90AB+0.45AC+1.24AD-0.68AE+6.43BC+3.61BD-4.63BE+0.45CD-1.47CE-0.56DE-4.62A2-7.06B2-8.26C2-5.56D2-6.87E2。

        對(duì)該模型進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)以及模型回歸方程的方差分析結(jié)果見(jiàn)表4。

        表4 模型回歸方程方差分析Table 4 Variance analysis of model regression equation

        用各因素的F值評(píng)價(jià)該因素對(duì)試驗(yàn)指標(biāo)的影響,F(xiàn)值越大,表明該因素的影響越顯著,5個(gè)因素對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取率的影響為:E>B>D>C>A?;貧w模型的 F 值為 4.94,P 值(0.000 1)小于 0.001,表明所得模型是極顯著的。模擬誤差失擬項(xiàng)中P值大于0.05,該模型失擬不顯著,說(shuō)明該方程對(duì)試驗(yàn)擬合度較好,可靠性較高。應(yīng)用該回歸模型能夠?qū)喡樽扬炂傻鞍踪|(zhì)提取效果進(jìn)行比較好的分析預(yù)測(cè)。

        2.2.3 響應(yīng)面數(shù)據(jù)分析及最優(yōu)條件的確定

        響應(yīng)曲面的坡度可以反應(yīng)該因素對(duì)蛋白質(zhì)提取率的相關(guān)條件的敏感度高低[18]。等高線反映了各因素之間交互作用的強(qiáng)弱[19],橢圓形等高線表明兩因素之間的交互作用比較顯著,而圓形等高線則表示兩因素之間交互作用不顯著[20]。不同考察因素對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取率交互影響的響應(yīng)曲面和等高線見(jiàn)圖5。

        圖5 不同考察因素對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取率交互影響的響應(yīng)曲面和等高線Fig.5 Response surfaces and contours of the interaction effects of different investigation factors on the extraction rate of flaxseed cake

        由圖5可知,一次浸提時(shí)間和pH值之間以及一次浸提時(shí)間和溫度之間均存在顯著的交互作用。

        堿提-酸沉法是提取蛋白質(zhì)的常用方法,該方法操作過(guò)程簡(jiǎn)單,蛋白質(zhì)提取率高,能夠除去餅粕中水溶性糖分、纖維素、淀粉這些主要雜質(zhì),有研究[21]表明通過(guò)堿提-酸沉可同時(shí)除去亞麻籽餅粕中生氰糖苷和植酸等含量較低的抗?fàn)I養(yǎng)因子,脫除率分別可達(dá)92.30%和82.49%。因此采用堿提-酸沉法可制備得到低氰苷和低植酸的亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)。

        通過(guò)Design-Expert 8.0.6軟件優(yōu)化得到亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)的最佳提取條件:料液比為1∶19.77(g/mL),一次浸提時(shí)間為124.23 min,溫度為51.03℃,二次浸提時(shí)間為62.48 min,pH 9.55。在此試驗(yàn)條件下,提取率為86.38%。按照試驗(yàn)的可操作性,將最佳試驗(yàn)條件調(diào)整為料液比為1∶20(g/mL),一次浸提時(shí)間為120 min,溫度為50℃,二次浸提時(shí)間為60 min,pH 9.5。通過(guò)3次平行試驗(yàn),測(cè)得最佳試驗(yàn)條件下亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)的提取率為(83.27±3.00)%。另外,與許光映等[22]的研究結(jié)果(51.65%)相比,明顯提高了蛋白質(zhì)的提取率,說(shuō)明該提取工藝條件具有相對(duì)優(yōu)勢(shì)。因此,可以得知通過(guò)響應(yīng)面法優(yōu)化得到的模型回歸方程及最佳試驗(yàn)條件可靠。

        目前提取亞麻籽蛋白質(zhì)的方法通常是對(duì)亞麻籽進(jìn)行脫膠和脫脂的前處理后提取蛋白質(zhì),前處理過(guò)程不僅造成了能源消耗并且提取的蛋白質(zhì)含量?jī)H在30%左右,提取率較低[23]。本試驗(yàn)采用油脂加工副產(chǎn)物餅粕為原料提取其蛋白質(zhì),提取率達(dá)到83.27%,極大的提高了亞麻籽蛋白質(zhì)的提取率,增加了工業(yè)副產(chǎn)物-亞麻籽餅粕的附加價(jià)值。

        2.3 α-淀粉酶抑制活性

        蛋白質(zhì)作為淀粉酶的抑制劑時(shí)通常作為淀粉模擬物[24]或與α-淀粉酶結(jié)合產(chǎn)生特殊結(jié)構(gòu)[25]造成酶失活,此類(lèi)α-淀粉酶抑制劑多發(fā)現(xiàn)于蕓豆、小麥以及高粱中,在亞麻籽中鮮有報(bào)道。亞麻籽蛋白質(zhì)及不同酶的酶解物對(duì)α-淀粉酶抑制活性見(jiàn)圖6。

        由圖6可知,亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)具有α-淀粉酶抑制活性,當(dāng)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)酶解后,其酶解產(chǎn)物的α-淀粉酶抑制活性顯著提高。采用單酶及復(fù)合酶對(duì)亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解后發(fā)現(xiàn),堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物的α-淀粉酶抑制活性較高,復(fù)合酶與堿性蛋白酶相比并無(wú)顯著增加效果。堿性蛋白酶為內(nèi)肽酶,亞麻籽蛋白質(zhì)經(jīng)堿性蛋白酶酶解后能夠生成相對(duì)分子量較小的肽,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)部疏水基團(tuán)暴露,這些疏水性基團(tuán)更容易與酶的活性部位結(jié)合,表現(xiàn)出生物活性。

        不同酶解產(chǎn)物分子量分布見(jiàn)圖7。

        圖6 亞麻籽蛋白質(zhì)及不同酶的酶解物對(duì)α-淀粉酶抑制活性Fig.6 Inhibition of α-amylase of flaxseed cake protein and enzymatic hydrolysate

        圖7 不同酶解產(chǎn)物分子量分布Fig.7 Molecular weight distribution of different enzymatic hydrolysis products

        由堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶的酶解產(chǎn)物分子量分布試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物中低分子量(<6.5 kDa)肽含量最高,達(dá) 83.4%。Vilcacundo等[26]通過(guò)體外模擬消化藜麥蛋白質(zhì)發(fā)現(xiàn)分子量小于5 kDa的多肽與藜麥蛋白質(zhì)相比具有更高的α-淀粉酶抑制活性。亞麻籽蛋白質(zhì)堿性蛋白酶酶解產(chǎn)物的高比例低分子量肽與其較強(qiáng)的α-淀粉酶抑制活性有關(guān)[27]。

        3 結(jié)論

        本試驗(yàn)以油脂加工副產(chǎn)物亞麻籽餅粕為原料,利用堿提-酸沉法提取亞麻籽餅粕蛋白質(zhì),在一次浸提的基礎(chǔ)上,添加了二次浸提,明顯提高了蛋白質(zhì)的提取率。利用響應(yīng)面法建立了提取工藝條件的二次項(xiàng)模型,通過(guò)方差分析,得知該模型顯著,所得回歸方程擬合度較好。影響亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)提取率的各因素順序大小為pH值>一次浸提時(shí)間>二次浸提時(shí)間>溫度>料液比。最佳提取工藝條件是:pH 9.5,料液比1∶20(g/mL),溫度50℃,一次浸提時(shí)間120 min以及二次浸提時(shí)間60 min。在此試驗(yàn)條件下,測(cè)得亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)的提取率為83.27%,說(shuō)明通過(guò)響應(yīng)曲面法得到的模型回歸方程可以較好的預(yù)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果。亞麻籽蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)堿性蛋白酶酶解得到的產(chǎn)物具有α-淀粉酶抑制活性,提高了亞麻籽餅粕蛋白質(zhì)及其酶解物的附加價(jià)值。

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