蒙秋艷，黃靖洲，梁艷玲，滕艷芳，伍彥華

（廣西輕工業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院有限公司，廣西南寧530001）

粉葛為豆科植物甘葛藤Pueraria thomsonii Benth.的干燥根，野葛即葛根，為豆科植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的干燥根[1]。在 2005 年之前，野葛和粉葛均視為葛根藥材，自《中國(guó)藥典》2005年版起，為了用藥的準(zhǔn)確性，將二者按照藥材來源進(jìn)行區(qū)分，列為葛根和粉葛2個(gè)品種[1-2]。目前為止，民間用藥仍習(xí)慣將二者都作為葛根藥材進(jìn)行使用，同時(shí)粉葛常作為普通食品食用。粉葛和野葛是我國(guó)最主要的葛屬植物，產(chǎn)于我國(guó)西南部、中南部至東南部，除新疆、青海及西藏外，幾乎遍布全國(guó)[3]。其中粉葛以人工種植為主，主要產(chǎn)地為兩廣、云南一帶[4]。我國(guó)的葛根類年資源總量在150萬噸以上，小部分用以制作中藥材、淀粉加工、食品加工，而仍有很多葛根資源沒有被很好地開發(fā)和利用[5]。

近年來，國(guó)內(nèi)外研究人員針對(duì)葛根的多糖類、異黃酮類成分的研究投入了大量工作。其中，Zhou Dong等[6]從葛根中分離得到一種分子量為12.3 kDa的新型多糖，并分析其結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)該多糖的主要連接類型是1，4-α-D-Glcp 和 1，3，6-α-D-Glcp，藥理研究表明此新型多糖具有免疫調(diào)節(jié)活性。Wang Xin等[7]從野葛中分離并鑒定了3種異黃酮葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶，分別含有野葛葡糖基轉(zhuǎn)移酶基因PlUGT4、PlUGT15和PlUGT57，發(fā)現(xiàn)其能在體外將金雀異黃素和大豆苷元的7-羥基糖基化，其中PlUGT15對(duì)染料木素和大豆苷元的催化效率高于黃酮醇7-O-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶。Sun Yingjie等[8]從野葛中分離得到2種新的異黃酮苷類化合物，分別為3'-甲氧基新鳥苷A和3'-甲氧基新鳥苷B，活性評(píng)價(jià)顯示其對(duì)HepG2細(xì)胞具有保護(hù)作用，表明其具備一定的保肝活性。對(duì)于葛根的生物活性研究，也有新發(fā)現(xiàn)。Wang Xiaoke等[9]使用改良的熱解方法合成了一種具有治療痛風(fēng)的臨床應(yīng)用前景的新型水溶性碳點(diǎn)，命名為Puerariae lobatae Radix CDs，藥效試驗(yàn)研究表明其具有良好的生物相容性和抗痛風(fēng)的生物活性。

傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)理論中，粉葛和野葛具有發(fā)表解肌、解熱生津、透疹、升陽止瀉、解酒的功效[10]，現(xiàn)代藥理研究表明葛根具有改善心腦血管[11-12]、降糖[13-14]、降脂[14-15]、降壓[16]、保肝[8，17-18]的作用，以上作用功效在臨床研究中也得到驗(yàn)證[19-21]。野葛和粉葛被衛(wèi)生部先后加入藥食同源目錄中，我國(guó)對(duì)于葛根的開發(fā)利用將會(huì)越來越深入。廣西地區(qū)的葛根原料產(chǎn)量大，多以新鮮原料或葛粉的形式以批發(fā)或零售的方式進(jìn)行銷售，處于農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)鏈底端，對(duì)葛根的開發(fā)利用仍處在低層次的粗加工階段，大大制約了廣西農(nóng)產(chǎn)品升值，這一現(xiàn)狀亟待改變。本研究通過對(duì)廣西不同產(chǎn)地的粉葛、野葛原料的多糖、異黃酮進(jìn)行含量測(cè)定，對(duì)其品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，作為廣西所產(chǎn)葛根進(jìn)一步綜合開發(fā)利用的數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

粉葛、野葛：收集自廣西各地，詳見表1；三氯化鋁、無水乙醇、硫酸（均為分析純）：西隴科學(xué)股份有限公司；乙酸鉀、苯酚（均為分析純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；D-無水葡萄糖對(duì)照品（純度≥99.9%）、蘆丁、大豆苷（純度均≥95%）：中國(guó)食品藥品檢定研究院；葛根素（純度≥95%）：上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；甲醇（色譜純）：德國(guó)默克公司；純化水：廣西輕工院有限公司科技中心實(shí)驗(yàn)室自制，符合GB/T 6682-2008《分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》規(guī)定的一級(jí)水。

表1 粉葛、葛根原料來源一覽表Table 1 List of raw materials of Pueraria thomsonii and Pueraria lobata

1.2 儀器與設(shè)備

N4S紫外分光光度儀：上海儀電分析儀器有限公司；202-2電熱恒溫干燥箱：北京科偉永興儀器有限公司；XO-SM300超聲波微波協(xié)同反應(yīng)工作站：南京先歐儀器制造有限公司；AUW220電子天平：島津（上海）實(shí)驗(yàn)器材有限公司；Genex Beta 移液槍（10 μL～1 000 μL）：賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；Waters2489高效液相色譜儀：沃特世科技（上海）有限公司；ODS C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）：安捷倫科技（中國(guó)）有限公司；針式過濾器有機(jī)濾頭（0.22、0.45 μm）：天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；LHP-60-H實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)：重慶力德高端水處理設(shè)備研發(fā)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 水分含量的測(cè)定

分別稱取不同產(chǎn)地的粉葛、野葛粉末（過40目篩）約5 g，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部中“0832水分測(cè)定法”第二法（烘干法）規(guī)定的方法，分別測(cè)定廣西9個(gè)產(chǎn)地粉葛和野葛的水分含量。

1.3.2 多糖含量的測(cè)定

粉葛、野葛中多糖的含量使用苯酚-硫酸法[22]進(jìn)行測(cè)定。

1.3.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

稱取葡萄糖對(duì)照品，制成含量為107mg/mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液。準(zhǔn)確移取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，按照苯酚-硫酸法進(jìn)行操作，在λ=490 nm下測(cè)量吸光度，以葡萄糖質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=0.0093x+0.0307，r2=0.999 1，該曲線在葡萄糖質(zhì)量濃度為21.40 mg/mL～107.00 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.2.2 粉葛、野葛多糖待測(cè)樣品的制備

準(zhǔn)確稱取1.0 g各產(chǎn)地粉葛、野葛樣品粉末（40目），在液料比40∶1（mL/g）條件下，以一定溫度水浴條件下熱水浸提一定時(shí)間，過濾，濾渣用熱水洗滌3次，再以同等條件進(jìn)行第二次提取，合并兩次提取液；提取液減壓濃縮后按照體積比1∶3加入體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇溶液，低溫靜置24 h，離心取沉淀，加水復(fù)溶后定容至50 mL，再準(zhǔn)確移取0.5 mL定容到50 mL，即得多糖待測(cè)樣品。

1.3.2.3 粉葛、野葛樣品的多糖含量測(cè)定

移取1.3.2.2所制得待測(cè)樣品2.0 mL于具塞試管中，加入苯酚1.0 mL和濃硫酸5.0 mL，在λ=490 nm下測(cè)量吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算樣品溶液中葡萄糖的質(zhì)量濃度。

樣品中多糖含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以g/100 g表示，按公式（1）計(jì)算。

式中：m1為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得樣品測(cè)定液中含糖量，μg；V1為樣品定容體積，mL；m2為樣品質(zhì)量，g；V2為比色測(cè)定時(shí)所移取樣品測(cè)定液的體積，mL；0.9為葡萄糖換算成葡聚糖的校正系數(shù)。

1.3.3 總異黃酮含量的測(cè)定

1.3.3.1 供試樣品的制備

取9個(gè)不同產(chǎn)地供試樣品粉末（40目），準(zhǔn)確稱取0.1 g，加入體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液50 mL，水浴回流提取30 min。冷卻至室溫（25℃）后補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，過濾取續(xù)濾液，即得總黃酮供試品溶液。每個(gè)產(chǎn)地的供試品溶液平行制作3份。

1.3.3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，用70%甲醇溶解后定容至1 000 mL，配置成0.057 3 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別準(zhǔn)確移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 mL于10 mL容量瓶中，加入2 mL三氯化鋁溶液（0.1 mol/L）和 3 mL乙酸鉀溶液（1 mol/L），并用70%甲醇定容至刻度，搖勻后靜置30 min。同時(shí)做空白樣。使用紫外可見分光光度儀，在波長(zhǎng)為420 nm條件下檢測(cè)，記錄吸光度，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為y=4.112 0x-6.590 0，r2=0.999 6，該曲線在蘆丁濃度為0.001 4 mg/mL～0.022 9mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.3.3 供試樣品中總異黃酮含量的測(cè)定

分別準(zhǔn)確移取1.3.3.2所制備的供試樣品溶液1.0 mL，加入2 mL三氯化鋁溶液（0.1 mol/L）和3 mL乙酸鉀溶液（1 mol/L），并用70%甲醇定容至10 mL，搖勻后于室溫（25℃）靜置30 min，用0.45 μm濾膜過濾，于波長(zhǎng)420 nm處測(cè)定吸光度值，計(jì)算總異黃酮的濃度。

樣品中總黃酮含量以蘆丁的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω總異黃酮計(jì)，單位以g/100 g表示，按照公式（2）計(jì)算。

式中：C為從蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線查得供試樣品中總黃酮濃度，mg/mL；V為提取樣品溶液體積，mL；d為供試樣品的總稀釋倍數(shù)；m為取樣量，g；F為原料的水分含量，%。

1.3.4 葛根素和大豆苷的含量測(cè)定

1.3.4.1 色譜條件

ODS C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇∶水=26∶74，等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為250 nm；洗脫流速為1 mL/min；進(jìn)樣量10 μL。

1.3.4.2 對(duì)照品溶液的配置

將20 mg葛根素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品用甲醇完全溶解，定容于25 mL容量瓶中，作為葛根素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照儲(chǔ)備液；將20 mg大豆苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品用甲醇完全溶解，定容于25 mL容量瓶中，作為大豆苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照儲(chǔ)備液。

分別吸取1.00 mL葛根素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照儲(chǔ)備液和770.00 μL大豆苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照儲(chǔ)備液，定容到100 mL容量瓶中，配制成含0.008 0 mg/mL葛根素和0.006 2 mg/mL大豆苷混合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液，用0.22 μm濾膜過濾，即得對(duì)照品溶液。

1.3.4.3 供試樣品的制備

取9個(gè)不同產(chǎn)地供試樣品粉末，準(zhǔn)確稱取1 g，各稱3份，加入適量體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液，使液料比為40∶1（mL/g），在50℃溫度條件下提取60 min。過濾，準(zhǔn)確吸取續(xù)濾液50 μL定容至5 mL，然后用0.22 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

1.3.4.4 供試樣品的檢測(cè)與計(jì)算

將1.3.4.2和1.3.4.3所制備的對(duì)照品溶液和供試品溶液使用高效液相色譜法進(jìn)樣檢測(cè)，檢測(cè)方法如1.3.4.1所示。以對(duì)照品溶液中葛根素、大豆苷的保留時(shí)間為參考，確定供試品的葛根素和大豆苷色譜峰，記錄其峰面積并進(jìn)行計(jì)算。

樣品中葛根素、大豆苷含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω葛、ω苷計(jì)，單位以 mg/g表示，按公式（3）、（4）計(jì)算。

式中：C葛為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得供試樣品中葛根素濃度，mg/mL；V 為提取樣品溶液體積，mL；m'為取樣量，g；C苷為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得供試樣品中大豆苷濃度，mg/mL；F為原料的水分含量，%。

1.3.4.5 線性關(guān)系考察

從1.3.4.2所配置的葛根素、大豆苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照儲(chǔ)備液中吸取適量溶液，制成含量分別為0.001 6、0.003 2、0.004 8、0.006 4、0.008 0、0.009 6 mg/mL 的葛根素標(biāo)準(zhǔn)溶液，以及含量分別為 0.001 2、0.002 5、0.003 7、0.005 0、0.006 2、0.007 4 mg/mL的大豆苷標(biāo)準(zhǔn)溶液。對(duì)以上不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法如1.3.4.1所述，以峰面積為縱坐標(biāo)，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=4.31×10-7X－2.02×10-3，其 r2=0.999 9，說明葛根素標(biāo)準(zhǔn)曲線在葛根素含量為0.001 6 mg/mL～0.009 6 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；大豆苷標(biāo)準(zhǔn)曲線公式為Y=4.46×10-7X+1.51×10-3，其r2=0.999 9，大豆苷標(biāo)準(zhǔn)曲線在大豆苷含量0.001 2 mg/mL～0.007 4 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.4.6 精密度考察

取1.3.4.2制得的對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6次，用1.3.4.1方法檢測(cè)，測(cè)得葛根素、大豆苷的峰面積，計(jì)算其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD），考察精密度。

1.3.4.7 重復(fù)性考察

選取9號(hào)產(chǎn)地（廣西桂林市）粉葛進(jìn)行試驗(yàn)，準(zhǔn)確稱取1 g粉末，稱6份，按照1.3.4.3的提取方法制備，即制得重復(fù)性試驗(yàn)供試液。用1.3.4.1方法檢測(cè)，記錄葛根素、大豆苷的峰面積，計(jì)算其RSD值，考察其重復(fù)性。

1.3.4.8 穩(wěn)定性考察

取1.3.4.3所制備的供試樣品溶液1份，相隔0、2、4、6、8、10 h 進(jìn)樣，進(jìn)行穩(wěn)定性考察，記錄葛根素、大豆苷的峰面積，計(jì)算其RSD值。

1.3.4.9 加樣回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取9號(hào)產(chǎn)地粉葛粉末6份，每份0.5 g，每份加入1 mL混合對(duì)照品溶液（含葛根素4.648 5 mg/mL和大豆苷0.675 1 mg/mL），按照1.3.4.3方法制備，即制得加樣回收試驗(yàn)供試液。測(cè)定并計(jì)算葛根素、大豆苷的平均回收率和RSD值。

1.3.5 單因素試驗(yàn)

1.3.5.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)

準(zhǔn)確稱取9號(hào)產(chǎn)地粉葛粉末1 g，分別加入體積分?jǐn)?shù)為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%的乙醇溶液，液料比控制為50∶1（mL/g），提取溫度控制在40℃，超聲波輔助提取30min。過濾，準(zhǔn)確移取續(xù)濾液50 μL定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，按照1.3.4.1所示方法進(jìn)行檢測(cè)，記錄葛根素、大豆苷峰面積，計(jì)算其提取率。

1.3.5.2 液料比

準(zhǔn)確稱取9號(hào)產(chǎn)地粉葛粉末1 g，加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液，提取溫度控制40℃，于液料比分別為 5 ∶1、10 ∶1、15 ∶1、20 ∶1、25 ∶1、30 ∶1、35 ∶1、40 ∶1、45 ∶1、50 ∶1（mL/g）條件下超聲波輔助提取 30 min。過濾，準(zhǔn)確移取續(xù)濾液50 μL定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，按照1.3.4.1所示方法進(jìn)行檢測(cè)，記錄葛根素、大豆苷峰面積，計(jì)算其提取率。

1.3.5.3 提取時(shí)間

準(zhǔn)確稱取9號(hào)產(chǎn)地粉葛粉末1 g，加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液，液料比為50∶1（mL/g），提取溫度控制 40 ℃，以提取時(shí)間分別為 10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min進(jìn)行超聲波輔助提取。過濾，準(zhǔn)確移取續(xù)濾液50 μL定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，檢測(cè)并記錄葛根素、大豆苷峰面積，計(jì)算其提取率。

1.3.5.4 提取溫度

準(zhǔn)確稱取9號(hào)產(chǎn)地粉葛粉末1 g，加入體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液，液料比為50∶1（mL/g），在提取溫度分別為 25、30、35、40、45、50、55、60 ℃，進(jìn)行超聲波輔助提取30min。過濾，準(zhǔn)確移取續(xù)濾液50 μL定容至5 mL，用0.22 μm濾膜過濾，檢測(cè)并記錄葛根素、大豆苷峰面積，計(jì)算其提取率。

1.3.6 正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，考察乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比、提取時(shí)間、提取溫度對(duì)葛根素和大豆苷的提取率的影響，設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)，正交試驗(yàn)因素水平表見表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 廣西不同產(chǎn)地粉葛、野葛的水分、總多糖和總異黃酮含量

9個(gè)不同產(chǎn)地的粉葛、野葛的水分含量、總多糖和總異黃酮含量的測(cè)定結(jié)果見表3。

表2 正交試驗(yàn)因素水平表Table 2 Factors and levels of orthogonal experiment

表3 廣西不同產(chǎn)地粉葛和野葛的水分、總多糖和總異黃酮的含量（n=3）Table 3 Contents of moisture，total polysaccharides and total isoflavones of Pueraria thomsonii and Pueraria lobata from different origins of Guangxi（n=3）

各個(gè)產(chǎn)地的粉葛、野葛的水分含量均低于14%，符合《中國(guó)藥典》對(duì)于葛根、粉葛藥材飲片的水分含量規(guī)定，其中廣西桂林市的粉葛的水分含量最低，為7.13%；各產(chǎn)地粉葛、野葛之間的多糖和總異黃酮含量均存在較大差異，產(chǎn)于廣西玉林市的野葛多糖含量和總異黃酮含量最高，為1.106 0 g/100 g和5.163 0 g/100 g。

2.2 方法學(xué)考察

精密度考察結(jié)果顯示，葛根素和大豆苷的RSD值分別為0.25%、0.64%，說明精密度良好；穩(wěn)定性考察，葛根素和大豆苷成分的RSD值分別為0.39%、0.65%，表明樣品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好；重復(fù)性考察，葛根素和大豆苷兩種成分的RSD值分別為0.50%、0.87%，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Table 4 Results of adding standard recovery（n=6）

葛根素和大豆苷兩種成分的加樣回收率分別為97.37%、95.57%，其RSD值分別為0.49%、1.84%，結(jié)果表明，所建立的方法適用于粉葛、野葛中葛根素和大豆苷的含量測(cè)定。

2.3 單因素試驗(yàn)

不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)9號(hào)產(chǎn)地（廣西桂林）粉葛的異黃酮提取效果見圖1。

圖1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)葛根素和大豆苷提取效果的影響Fig.1 The effect of content of ethanol on extraction effect of puerarin and daidzein

葛根素的提取曲線在乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)達(dá)到峰值，但曲線趨勢(shì)較緩，而大豆苷曲線在乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)為峰值并在高于50%時(shí)呈急劇下降趨勢(shì)，綜合考慮，認(rèn)為當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí)，異黃酮的提取效果最佳。

不同液料比對(duì)9號(hào)產(chǎn)地粉葛的異黃酮提取效果見圖2。

圖2 液料比對(duì)葛根素和大豆苷提取效果的影響Fig.2 The effect of liquid material ratio on extraction effect of puerarin and daidzein

葛根素和大豆苷的提取曲線變化趨勢(shì)一致，在液料比為45∶1（mL/g）時(shí)達(dá)到峰值，表明在該條件下異黃酮的提取效果最佳。

圖3為不同提取時(shí)間的異黃酮提取曲線。

圖3 提取時(shí)間對(duì)葛根素和大豆苷提取效果的影響Fig.3 The effect of extraction time on extraction effect of puerarin and daidzein

葛根素和大豆苷的提取曲線變化趨勢(shì)基本相似，在提取時(shí)間低于45 min時(shí)，異黃酮的提取率變化不大，在提取時(shí)間為50 min時(shí)異黃酮的提取效果最佳。

不同提取溫度對(duì)9號(hào)產(chǎn)地粉葛的異黃酮提取效果見圖4。

圖4 提取溫度對(duì)葛根素和大豆苷提取效果的影響Fig.4 The effect of extraction temperature on extraction effect of puerarin and daidzein

葛根素和大豆苷的提取曲線變化趨勢(shì)相似，當(dāng)提取溫度從40℃提升到50℃時(shí)，葛根素和大豆苷的提取率急劇升高并達(dá)到頂峰，高于50℃后平緩下降，表明在提取溫度為50℃時(shí)異黃酮的提取效果最佳。

以上單因素試驗(yàn)結(jié)果顯示，葛根中異黃酮成分的最佳提取因素分別為50%乙醇、液料比45∶1（mL/g）、提取時(shí)間50 min、提取溫度50℃。

2.4 正交試驗(yàn)

基于單因素試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)乙醇的體積分?jǐn)?shù)、液料比、提取溫度、提取時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果（n=3）Table 5 Orthogonal test results（n=3）

續(xù)表5 正交試驗(yàn)結(jié)果（n=3）Continue table 5 Orthogonal test results（n=3）

由正交試驗(yàn)結(jié)果和極差分析可知，當(dāng)以葛根素提取率為指標(biāo)時(shí)，4個(gè)因素對(duì)工藝的影響效果為A＞D＞C＞B，其理論最優(yōu)組合為A2B1C2D3，該組合恰好是正交試驗(yàn)實(shí)際最優(yōu)組；以大豆苷的提取率為指標(biāo)時(shí)，4個(gè)因素對(duì)工藝的影響效果為D＞B＞A＞C，其最優(yōu)組合為A2B1C3D3。兩個(gè)指標(biāo)顯示的結(jié)果，最優(yōu)的提取溫度存在差異，由于葛根中的葛根素含量遠(yuǎn)大于大豆苷的含量，并從節(jié)能方面考慮，本項(xiàng)目主要參考以葛根素的提取率為指標(biāo)的分析結(jié)果。綜上所述，最優(yōu)的水平組合為A2B1C2D3，即最佳提取條件為使用40%乙醇作為提取溶劑，液料比控制在40∶1（mL/g），在50℃條件下超聲輔助提取60 min。

3 結(jié)論

廣西各個(gè)產(chǎn)地的粉葛、野葛的水分含量均低于14%，符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定，其中產(chǎn)于廣西桂林的粉葛水分含量最低，為7.13%；產(chǎn)于玉林市的野葛多糖和總異黃酮含量較高，分別為1.106 0、5.163 0 g/100 g，該產(chǎn)地的野葛中所含葛根素和大豆苷含量最高，分別為41.767 5、5.788 4 mg/g。綜合考察9個(gè)產(chǎn)地葛根原料的水分含量、多糖和總異黃酮含量，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)于廣西玉林市的野葛品質(zhì)最佳。