許宇振 趙成仕

摘 要：目的：調(diào)查安徽省包裝飲用水和飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌的污染情況，為提高成品飲用水市場的安全性和規(guī)范性提供幫助。方法：采用GB/T 8538-2008中銅綠假單胞菌的檢測方法，對366份包裝飲用水和飲用天然礦泉水樣品進行檢測。結(jié)果：241份包裝飲用水中檢出銅綠假單胞菌22份，檢出率為9.13%;125份飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌檢出5份，檢出率為4.00%;102份桶裝水中檢出銅綠假單胞菌19份，檢出率為18.63%;總共27份檢出的樣品中，桶裝水占比68.18%。結(jié)論：安徽省包裝飲用水和飲用天然礦泉水存在較高的銅綠假單胞菌污染現(xiàn)象，尤其是桶裝水的檢出率較高，生產(chǎn)企業(yè)和監(jiān)管部門應(yīng)加大產(chǎn)品質(zhì)量檢查力度，確保成品飲用水的安全。

關(guān)鍵詞：包裝飲用水;飲用天然礦泉水;銅綠假單胞菌

銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeru-ginosa）為革蘭氏陰性桿菌，其對不良環(huán)境的耐受力強，廣泛存在于水、土壤、空氣以及人與動物的皮膚和腸道

中[1-2]。銅綠假單胞菌具有多種致病因子，能夠?qū)е氯祟惖钠つw炎癥和急性腸道疾病，是重要的水源性和食源性致病菌，同時也是重要的醫(yī)源性致病菌[3]。近年來，飲用水中的銅綠假單胞菌污染情況也越來越被重視。我國也在國家標準中明確規(guī)定了銅綠假單胞菌的限量值[4-5]。本文對556份成品飲用水中的銅綠假單胞菌進行了檢測和分析，以期為飲用水企業(yè)及時發(fā)現(xiàn)問題，保證成品飲用水產(chǎn)品質(zhì)量以及監(jiān)管部門的分析決策提供一定幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗樣品為2019年6月到2020年5月采集的生產(chǎn)環(huán)節(jié)和流通環(huán)節(jié)的包裝飲用水和天然飲用礦泉水樣品。

1.2 儀器與試劑

高壓蒸汽滅菌鍋（上海博訊YXQ-LS-75SⅡ），超凈工作臺（蘇凈安泰SW-CJ-2FD），生物安全柜（蘇凈安泰BSC-1304ⅡA2），生化培養(yǎng)箱（上海三發(fā)SHP-160）。

銅綠假單胞菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基（CN瓊脂）、營養(yǎng)瓊脂、綠膿菌素測定用培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基、乙酰胺液體培養(yǎng)基、氧化酶試紙、鈉氏試劑等均購自北京陸橋計數(shù)股份有限公司，無菌濾膜購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.3 試驗方法

按照GB 8537-2016《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》中的第57條銅綠假單胞菌檢測方法對樣品進行檢測[6]。

1.3.1 水樣處理

在超凈臺中將250 mL水樣通過濾器中的0.45 μm無菌濾膜過濾，過濾后的濾膜平鋪于CN瓊脂平板上，36 ℃

倒置培養(yǎng)48 h。

1.3.2 驗證試驗

觀察并計數(shù)CN瓊脂平板上的菌落。計數(shù)所有藍色或綠色（綠膿色素）的可疑菌落，進行綠膿菌素確證試驗;紫外燈下觀察菌落，計數(shù)所有發(fā)熒光但是不產(chǎn)綠膿色素的可疑菌落，進行乙酰胺肉湯確證試驗;計數(shù)所有紅褐色不發(fā)熒光的可疑菌落，進行氧化酶、乙酰胺和金氏B培養(yǎng)基確證試驗。

1.3.3 菌落計數(shù)

經(jīng)驗證試驗確認的銅綠假單胞菌的比例乘以濾膜上的可疑菌落數(shù)，即為每250 mL該樣品中銅綠假單胞菌的菌落數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飲用水中銅綠假單胞菌污染情況

本文檢測了生產(chǎn)環(huán)節(jié)和流通環(huán)節(jié)的包裝飲用水和天然飲用礦泉水樣品共366份。GB 8537-2018《食品安全國家標準 飲用天然礦泉水》和GB 19298-2014《食品安全國家標準 包裝飲用水》中均規(guī)定的銅綠假單胞菌的限量要求為n=5，c=0，m=0，即檢測的5份樣品中均不得檢出銅綠假單胞菌。經(jīng)檢測，共27份樣品檢出銅綠假單胞菌，其中12份樣品為僅產(chǎn)生綠膿菌素的菌株，2份樣品為僅發(fā)熒光但不產(chǎn)綠膿菌素的菌株，8份樣品中的銅綠假單胞菌既有產(chǎn)綠膿菌素的菌株，又有發(fā)熒光但不產(chǎn)綠膿菌素的菌株，5份樣品中的銅綠假單胞菌包含有1.3.2所述的全部3類菌株。銅綠假單胞菌的檢出率為

7.38%。

2.2 包裝飲用水和飲用天然礦泉水中銅綠假單胞菌污染情況

本文檢測的366份樣品中，包裝飲用水為241份，檢出銅綠假單胞菌的樣品數(shù)為22份，檢出率為9.13%;飲用天然礦泉水為125份，其中有5份樣品檢出銅綠假單胞菌，檢出率為4.00%（表2）。飲用天然礦泉水的銅綠假單胞菌污染情況明顯低于包裝飲用水。

2.3 桶裝水和瓶裝水中銅綠假單胞菌污染情況

本文檢測的安徽省各地區(qū)的桶裝水和瓶裝水中銅綠假單胞菌污染情況如表3所示。桶裝水共檢測了102份，銅綠假單胞菌檢出19份，檢出率為18.63%;瓶裝水共檢測了264份，銅綠假單胞菌檢出8份，檢出率為3.03%;瓶裝水中的銅綠假單胞菌檢出率明顯低于桶裝水。

2.4 銅綠假單胞菌檢出樣品分析

在27份銅綠假單胞菌檢出樣品中，桶裝水為19份，占檢出樣品的70.37%;包裝飲用水檢出22份，占檢出樣品的81.48%。在22份檢出包裝飲用水中，桶裝水為15份，占檢出包裝飲用水樣品的68.18%，瓶裝水為7份，占檢出包裝飲用水樣品的31.82%。

3 討論

銅綠假單胞菌作為完全致病菌能夠產(chǎn)生內(nèi)毒素和其他致病因子，且具有多種耐藥機制，對人體尤其是抵抗力較低的老幼病孕人群具有高致病性，因此WHO建議免疫低下的人群不飲用瓶裝水[7]。而隨著人們生活水平的提高，對瓶裝水和桶裝水的需求也在日益增加，這就需要生產(chǎn)企業(yè)增強對產(chǎn)品質(zhì)量的把控，市場監(jiān)管部門加大對飲用水的監(jiān)督檢查力度，盡快盡量降低成品飲用水中銅綠假單胞菌的檢出率。

本次試驗中，銅綠假單胞菌的檢出率為7.38%，桶裝水檢出率為18.63%，說明安徽省包裝飲用水和飲用天然礦泉水存在銅綠假單胞菌污染的問題，且檢出率較高[8-9]。桶裝水的檢出率明顯高于瓶裝水，這可能是由于桶裝水使用的包裝材料是回收利用的，包裝桶的消毒方式不正確或者消毒不徹底會造成交叉污染，且桶裝水在運輸、搬運過程中可能會出現(xiàn)封口松動泄露的問題從而造成污染。雖然桶裝水的檢出率較高，但是瓶裝水的銅綠假單胞菌的檢出率也達到了3.03%，在27份檢出樣品中，依然有8份非桶裝水檢出了銅綠假單胞菌，占檢出樣品的29.63%。這說明除了包裝和運輸之外，水源本身的污染和水源的滅菌效果也是導(dǎo)致銅綠假單胞菌檢出的重要因素。

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