董延江，陳稼，韓慶軍，韓業(yè)東，吳倩，佟玉紅

（1.遼寧省農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，沈陽110003；2.四川本草興農(nóng)生物科技有限公司，成都611430）

現(xiàn)代獸醫(yī)學(xué)研究表明，偽狂犬病、藍(lán)耳病、口蹄疫、流行性腹瀉、圓環(huán)病毒等病毒在豬群中廣泛存在，“有豬的地方就有豬瘟”，表明豬瘟在中國豬群廣泛存在，因而就有了大量的混合感染，就有了豬病防控領(lǐng)域內(nèi)“亞健康”“亞臨床”的新名詞，豬群“健康狀況處于脆弱平衡”的平衡理論[1]。顯而易見，越來越多的疫病在威脅著豬群健康，越來越多的混合感染使得疫病對養(yǎng)豬業(yè)的危害程度日趨嚴(yán)重。病毒無細(xì)胞結(jié)構(gòu)，只有核酸這一特殊物質(zhì)，對抗生素不敏感，變異速度快，只有通過抗病毒類藥物控制。但自2005年起，抗病毒西藥，如金剛烷胺、金剛乙胺、利巴韋林、阿昔洛韋、嗎啉胍等醫(yī)用抗病毒藥物禁止用于食用動物。目前疫苗的接種和中藥防治對此類傳染病卻有著較好的防控和治療作用[2-3]。中藥之所以能保護易感動物，是因為它可以調(diào)節(jié)豬群的非特異性免疫力。這種免疫力相對于使用疫苗等途徑產(chǎn)生的特異性免疫力而言，其作用更具有廣泛性，而且對提高豬群疾病感染閾值也有積極意義[4]。

按照傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論，可認(rèn)為非洲豬瘟病毒是中醫(yī)病因中的“癘氣”，癘氣為害頗似火熱之邪致病，具有一派熱盛之象，其毒熱較火熱為甚，而且常夾有濕毒等穢濁之氣，防控“治未病”宜采取清熱解毒、補中益氣、芳香化濕等法來實現(xiàn)[5]。2019年年底爆發(fā)的新型冠狀肺炎是以免疫系統(tǒng)功能紊亂及炎性反應(yīng)引起的深部氣道和肺泡損傷為特征性病理表現(xiàn)，屬于中醫(yī)肺絡(luò)病變范疇[6]，是疫癘之氣，為癘氣感染所致暴發(fā)疫病，中醫(yī)早期即可參與治療，特別是中藥可通過多靶點調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)，避免系統(tǒng)性炎癥即“細(xì)胞因子風(fēng)暴”的發(fā)生，在改善新冠的重癥發(fā)生率，降低病死率等方面已凸顯出極大的價值[7]。現(xiàn)有臨床研究也證實連花清瘟可明顯改善患者發(fā)熱、咳嗽、咳痰、氣促等癥狀，可用于治療COVID-19[6]，經(jīng)典方劑組合的清肺排毒湯對新冠肺炎患者的臨床癥狀改善明顯[8]。

因此，傳統(tǒng)中醫(yī)藥在防治瘟疫中積累了大量臨床經(jīng)驗及有效組方，獸醫(yī)臨床上通過使用中藥對易感動物的保護也逐漸得到行業(yè)和豬場的重視。本試驗受試藥物為純中藥制劑，由傳統(tǒng)名方增減而來，具有“扶正祛邪，解毒逐瘟”的功效，具有強大免疫促進(jìn)功能，對流行疫癥的預(yù)防具有很好的作用?，F(xiàn)將使用本草健凈的典型案例報道如下。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

本草健凈為純中藥制劑，主要由人參葉、白術(shù)、黃芪、地骨皮、升麻、茜草、甘草等幾味中藥組成。中藥組方研究為南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所，四川本草興農(nóng)生物科技有限公司生產(chǎn)提供。

1.2 試驗試劑與設(shè)備

1.2.1 試驗試劑

豬干擾素γ（IFN-γ）ELISA試劑盒，購于江蘇科晶生物科技有限公司；

白介素-6（IL-6）ELISA試劑盒，購于江蘇科晶生物科技有限公司；

豬腫瘤腫壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒，購于江蘇科晶生物科技有限公司；

豬超氧化物歧化酶（SOD）ELISA試劑盒，購于江蘇科晶生物科技有限公司。

1.2.2 試驗儀器

離心機（賽默飛世爾科技中國有限公司，型號：Sorvall ST 16R）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（成都特斯特儀器有限公司，型號：TSTP4008）；多功能酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技公司，型號：Thermo Varioskan Flash）；采血針、采血管等耗材均購于萬科化學(xué)試劑公司。

1.3 試驗動物與給藥方式

1.3.1 案例一

遼寧省境內(nèi)某豬場，規(guī)模10 000頭以上。某日外抓45頭約50 kg后備母豬，進(jìn)場約20 d部分發(fā)燒，死亡6頭，對死亡豬進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)：脾臟腫大，內(nèi)臟器官出血。

將豬場所有發(fā)病動物平均分為兩組，1組為治療組，純中藥制劑本草健凈35 g·d-1·頭-1拌料給藥，連續(xù)給藥3周，另1組為對照組，不進(jìn)行任何治療，正產(chǎn)采食飲水。給藥期間各組試驗動物在飼料中添加維生素C，并加強圈舍消毒。

1.3.2 案例二

遼寧省境內(nèi)某豬場，規(guī)模10 000頭以上。其中3欄600頭75 kg商品豬，發(fā)病初期，2號欄中15頭豬出現(xiàn)發(fā)燒、采食量下降、部分病豬出現(xiàn)死亡；隨后1、3號欄中部分豬只出現(xiàn)發(fā)燒、采食量下降等癥狀。

對本場3欄600頭豬全部使用本品進(jìn)行治療，治療方式為10 kg·t-1拌料給藥，連續(xù)給藥15 d，同時加強消毒。

1.4 飼養(yǎng)管理

按照豬場日常管理進(jìn)行，所有仔豬自由采食和飲水。試驗期間保持豬舍通風(fēng)、清潔，圈舍內(nèi)溫度控制穩(wěn)定，每日做圈舍清掃，試驗期間消毒和免疫按照常規(guī)進(jìn)行。

1.5 指標(biāo)測定

1.5.1 臨床癥狀

試驗期間，每周觀察受試藥物對受試動物尿液、皮毛、精神、淚斑和痂皮的影響，并記錄死亡數(shù)量。

1.5.2 非特異性免疫指標(biāo)測定

試驗結(jié)束后，治療組及對照組各選擇6頭豬進(jìn)行頸靜脈血采集，分離血清，檢測受試動物血清SOD酶、干擾素-γ含量，抗炎因子TNF-α、IL-6等非特異性免疫細(xì)胞因子。

通過血清SOD酶檢測試劑盒說明書檢測各組試驗豬血清中SOD酶；豬干擾素-γ（IFN-γ）、白介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附定量測定試劑盒各試劑在室溫環(huán)境下（25℃）復(fù)蘇。然后取出酶標(biāo)板，按照說明書操作步驟在波長450 nm的酶標(biāo)儀上測量各孔的OD值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和相應(yīng)的OD值作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后按照對應(yīng)的所測得的樣品OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找樣品相對應(yīng)的所含IFN-γ、IL-6、TNF-α的濃度值。

1.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

采用SPSS16.0單因子方差分析對試驗結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床癥狀

2.1.1 案例一

給藥1周后，本草健凈組試驗豬尿液清澈度明顯改善；連續(xù)給藥2周，治療組皮毛和精神狀態(tài)明顯提升；再給藥1周后觀察發(fā)現(xiàn)，治療組淚斑和痂皮逐漸消失；對照組臨床癥狀無明顯改善。

連續(xù)給藥14 d，只有2頭豬發(fā)生死亡，再給藥7 d，發(fā)現(xiàn)剩余豬只均恢復(fù)正常，豬場情況穩(wěn)定，存活率達(dá)到82%。

2.1.2 案例二

通過連續(xù)給藥治療15 d，本草健凈組試驗豬尿液清澈度明顯改善，皮毛和精神狀態(tài)明顯提升，淚斑和痂皮逐漸消失。僅用藥前出現(xiàn)癥狀的死亡淘汰豬50頭外，其余豬只無典型癥狀，均飼養(yǎng)至約200 kg順利出欄，成活率達(dá)到91.6%。

2.2 非特異性免疫指標(biāo)測定結(jié)果

各試驗血清SOD酶檢測結(jié)果見表1、表2，由表可見通過本草健凈治療后，給藥組的SDO酶、IFN-γ含量明顯高于對照組，具有顯著差異（P＜0.05）。給藥組的IL-6、TNF-α含量明顯低于對照組，具有顯著差異（P＜0.05）。

表1案例一非特異性免疫檢測結(jié)果

表2案例二非特異性免疫檢測結(jié)果

3 討論

豬病毒性傳染病一直以來都是全球豬群疫病防控的重點和難點，給養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大經(jīng)濟損失。病毒的種屬及血清型復(fù)雜，且易突變，有的病毒還會導(dǎo)致免疫抑制，這給疫苗研發(fā)及應(yīng)用帶來困難。而抗病毒西藥種類很少，且毒副作用較大，易發(fā)生耐藥性，臨床療效十分有限[9]。中草藥有清熱解毒、養(yǎng)胃健脾、除濕化痰、補氣養(yǎng)血、活血化瘀、固本培元、扶正祛邪、平衡陰陽等多種功效，能根據(jù)病因病機進(jìn)行針對性治療，綜合運用可發(fā)揮全面的調(diào)整和治療作用[10]。中藥治病是從整體出發(fā)，通過調(diào)整正邪關(guān)系，使機體各項功能恢復(fù)到平衡狀態(tài)。中藥在病毒性疫病的防治上具有療效好、毒副作用低、抗病毒范圍廣等優(yōu)點，部分中藥在治病的同時還能提高畜禽免疫力，促進(jìn)生長。

本草健凈為純中藥制劑，主要由人參葉、白術(shù)、黃芪、地骨皮、升麻、茜草、甘草等幾味中藥組成。其中人參葉能夠補氣，益肺，祛暑，生津；升麻：味辛甘性涼，清熱解毒，發(fā)表透疹，升陽舉陷；地骨皮、茜草味甘苦性寒，具有涼血止血等功效；甘草：味甘性平，補氣解毒，能夠調(diào)和諸藥，通十二經(jīng)。中醫(yī)認(rèn)為，“正氣存內(nèi)，邪不可干”，體內(nèi)陰陽失衡，才容易為時疫所傷。本方以君臣佐使的合理調(diào)配，重點通過提升正氣，透發(fā)邪氣，涼血解毒、凈化血液，從而改善豬對傳染病的抵抗力及顯著提高感染后的排毒自愈能力，具有“扶正祛邪、解毒逐瘟”的功效，對于集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)中，周邊出現(xiàn)疫情或感染初期，使用效果尤其明顯。方中黃芪、白術(shù)主要功效為提高機體非特異性免疫功能，其中黃芪、白術(shù)的主要成分黃芪多糖和白術(shù)多糖具有明顯提高免疫功能的效果，有利于促進(jìn)機體中巨噬細(xì)胞和某些中性粒細(xì)胞的吞噬和殺菌功能的提高[11-12]。

豬血清中SOD酶含量表示豬抗氧化能力，而動物抗氧化能力的提高，對動物保持機體的健康具有非常重要的意義[13]，純中藥制劑本草健凈可以提高患病豬血清SOD酶含量，增加機體非特異性免疫作用[14]，從而達(dá)到抵抗病毒的作用。機體適度的免疫應(yīng)答對于抵御病毒入侵是有利的，但有些病毒性疾病引起的免疫應(yīng)答過于強烈，導(dǎo)致豬群產(chǎn)生Ⅲ型超敏反應(yīng)，引起廣泛的血管炎性反應(yīng)，因此需要調(diào)節(jié)豬群對病毒的免疫應(yīng)答水平，避免免疫應(yīng)答過度（免疫亢奮）和免疫應(yīng)答不足（免疫抑制和免疫麻痹）。機體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答主要通過IFNγ（Ⅱ型干擾素）來調(diào)控，因此評價中藥對非特異性免疫力第二道免疫防線是否增強主要通過對IFN-γ含量的變化進(jìn)行評價[10]。重要的白細(xì)胞介素（如IL-1、IL-6）、TNF-α在病毒入侵之后含量會增加，其會導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞受損[15]，引起凝血，同時導(dǎo)致血小板減少和骨髓造血機能障礙。IL-6釋放增多會導(dǎo)致心肌損傷，影響心臟的供血和供氧，因此豬群會出現(xiàn)全身多處發(fā)紫、呼吸困難、母豬流產(chǎn)（也是供氧不足導(dǎo)致的結(jié)果）、休克、猝死等情況。

4 小結(jié)

本研究表明，中藥制劑本草健凈可有效提升豬只非特異性免疫功能，試驗組SOD酶，IFN-γ免疫細(xì)胞因子均有明顯升高，IL-6、TNF-α炎癥免疫因子顯著降低，說明中藥制劑本草健凈可通過提高豬只機體非特異性免疫能力來預(yù)防病毒性疫病。