□ 鄭欣欣 劉跳跳 咸陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

1 引言

過(guò)氧化苯甲酰（benzoyl peroxide，BPO）是一種白色結(jié)晶性粉末，稍有氣味，具有弱氧化性，其自身轉(zhuǎn)化生成的苯甲酸（benzeneformic acid，BA）可抑制小麥中蛋白質(zhì)分解酶的活性，進(jìn)而提高小麥粉的貯氧能力[1]。過(guò)氧化苯甲酰具有增強(qiáng)面粉彈性、提升面粉等級(jí)等作用，有助于改進(jìn)面粉品質(zhì)。但是，過(guò)量添加過(guò)氧化苯甲酰會(huì)使面粉顏色發(fā)青，同時(shí)破壞其中的維生素，降低面粉質(zhì)量，嚴(yán)重影響食品衛(wèi)生指標(biāo)及食用品質(zhì)[2]。當(dāng)前，某些企業(yè)為追求巨大的經(jīng)濟(jì)利益而忽視標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，致使在市售小麥粉中非法添加過(guò)氧化苯甲酰的事件時(shí)有發(fā)生[3—4]。在食安通食品抽檢信息與分析系統(tǒng)中查詢到，2012年4月至2019年10月公布的不合格小麥粉共計(jì)24批次，且主要集中在2012～2016年之間。其中，2012年不合格小麥粉占25%，主要原因可能是公告執(zhí)行初期很多生產(chǎn)企業(yè)未及時(shí)調(diào)整工作。但是，近幾年小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰不合格的事件也偶有發(fā)生。

現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料往往注重探討過(guò)氧化苯甲酰檢驗(yàn)新方法的驗(yàn)證，如采用分光光度法[5]構(gòu)建面粉中過(guò)氧化苯甲酰的快速檢測(cè)體系，且多數(shù)文獻(xiàn)選用高效液相色譜法[6—10]進(jìn)行檢測(cè)，但均未被《國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢實(shí)施細(xì)則》所錄入，對(duì)小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰監(jiān)督抽檢的研究也少有報(bào)道。因此，本研究采用《小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定高效液相色譜法》（GB/T 22325—2008）[11]對(duì)陜西省咸陽(yáng)市3個(gè)市縣的小麥粉生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行監(jiān)督抽檢，檢測(cè)其小麥粉中的過(guò)氧化苯甲酰含量，以期為3個(gè)市縣的監(jiān)管部門(mén)對(duì)小麥粉加工生產(chǎn)過(guò)程的監(jiān)管提供可靠的依據(jù)，進(jìn)而幫助監(jiān)管部門(mén)和人民群眾了解小麥粉生產(chǎn)的安全狀況。

2 材料與方法

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

2.1.1 儀器

高效液相色譜儀，島津；電子天平，島津制作所；旋渦混合器，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；溶劑過(guò)濾器，天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

2.1.2 試劑

甲醇：色譜純；碘化鉀溶液：50%水溶液，質(zhì)量濃度；苯甲酸：純度為99.96%，LGC；乙酸銨緩沖溶液（0.02mol/L），苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液（1mg/mL）。

2.1.3 材料

30批次小麥粉為2019年咸陽(yáng)市縣級(jí)監(jiān)督抽檢樣品，全部從3個(gè)市縣的小麥粉生產(chǎn)企業(yè)抽取，其中，彬州市17批次、長(zhǎng)武縣6批次、旬邑縣7批次。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 方法原理

由甲醇提取的過(guò)氧化苯甲酰以碘化鉀為還原劑將其還原為苯甲酸，通過(guò)高效液相色譜儀分離，在230nm下檢測(cè)，最低檢出限為0.5mg/kg。

2.2.2 樣品前處理

稱(chēng)取5g樣品置于50mL具塞比色管中，加10.0mL甲醇，在旋渦混合器上混勻1min，靜置5min；加50%碘化鉀水溶液5.0mL，在旋渦混合器上混勻1min，放置10min；加水至50.0mL，混勻，靜置，吸取上清液通過(guò)0.22μm濾膜，濾液置于樣品瓶中，備用。

2.2.3 色譜條件

檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器；色譜柱：Shim—pack GIST C18；規(guī)格：4.6mm×250mm×5μm；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流動(dòng)相：甲醇∶水（含0.02mol/L乙酸銨）為10∶90（體積分?jǐn)?shù)）；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10.0μL。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱(chēng)取0.025g苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至25mL容量瓶中，得到1000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液。準(zhǔn)確移取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)貯備液0.05、0.10、0.20、0.40、0.60mL，分別置于5個(gè)50mL容量瓶中，并分別加入甲醇至50.0mL，配備成濃度分別為1.0、2.0、4.0、8.0、12.0μg/mL的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

2.2.5 計(jì)算方法

式中：D為樣品中過(guò)氧化苯甲酰的含量，g/kg；c是由工作曲線上查出的試樣測(cè)定液中相當(dāng)于苯甲酸的濃度，μg/mL；V為試樣提取液的體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g；0.992是由苯甲酸換算成過(guò)氧化苯甲酰的換算系數(shù)。

3 結(jié)果與分析

3.1 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分析

苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖，如圖1所示。以GB/T 22325—2008中附錄A苯甲酸標(biāo)品色譜圖的保留時(shí)間為7.728min的色譜峰為苯甲酸標(biāo)品的目標(biāo)峰，圖1與標(biāo)準(zhǔn)中苯甲酸的色譜圖一致。

圖1 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖2可知，苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=35322.1X+4646.36，相關(guān)系數(shù)(r2)=0.9999851，擬合度(R2)=0.9999703，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)與擬合度都達(dá)到了0.9999級(jí)別，故符合實(shí)驗(yàn)要求。

圖2 苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的校準(zhǔn)曲線

3.3 不同區(qū)域小麥粉質(zhì)量分析

由圖3可知，對(duì)3個(gè)市縣27家面粉廠的30批次小麥粉進(jìn)行監(jiān)督抽檢，合格29批次、不合格1批次，總體合格率為96.67%、不合格率為3.33%。通過(guò)對(duì)不同區(qū)域分析可知，彬州市和旬邑縣的小麥粉全部合格，合格率達(dá)到100%；長(zhǎng)武縣的小麥粉合格5批次，合格率為83.33%，不合格1批次，不合格率為16.67%。結(jié)果表明，3個(gè)市縣的大多數(shù)面粉企業(yè)都能夠遵守衛(wèi)生部【2011】年第4號(hào)公告中“禁止在面粉生產(chǎn)中添加過(guò)氧化苯甲?！钡囊螅廊挥袀€(gè)別企業(yè)未遵守公告要求，造成小麥粉不合格。

圖3 不同區(qū)域面粉廠的抽檢結(jié)果統(tǒng)計(jì)圖

3.4 不合格小麥粉樣品檢測(cè)

由圖4可知，小麥粉樣品色譜圖中與苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品目標(biāo)峰（保留時(shí)間為7.728min）對(duì)應(yīng)位置出現(xiàn)色譜峰，其對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間為7.753min，表明樣品中含有過(guò)氧化苯甲酰。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算公式可知，小麥粉樣品中的過(guò)氧化苯甲酰含量為0.032g/kg，且平行小麥粉樣品同樣檢出過(guò)氧化苯甲酰，含量為0.032g/kg。

圖4 小麥粉檢驗(yàn)樣品色譜圖

3.5 不合格小麥粉加標(biāo)樣品檢測(cè)

圖5 加標(biāo)樣品色譜圖

由圖5可知，向小麥粉樣品中加入濃度為8.0μg/mL、體積為0.4mL的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，加標(biāo)樣品色譜圖中在與苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品目標(biāo)峰（保留時(shí)間為7.728min）對(duì)應(yīng)位置只出現(xiàn)一個(gè)色譜峰，表明樣品的色譜峰和標(biāo)準(zhǔn)品的目標(biāo)峰相重合，其保留時(shí)間為7.749min，加標(biāo)樣的色譜峰面積明顯增大。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算公式可知，加標(biāo)樣的過(guò)氧化苯甲酰的含量為 0.1 1 g/kg。根據(jù)回收率計(jì)算公式可得，回收率為98.73%。按照GB/T 27404—2008中對(duì)回收率的要求范圍為90%～110%，故本實(shí)驗(yàn)的回收率滿足要求，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

3.6 不合格小麥粉復(fù)測(cè)樣品檢測(cè)

由圖6可知，由不同檢驗(yàn)員再次對(duì)小麥粉樣品進(jìn)行復(fù)測(cè)，得到的樣品色譜圖中與苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品目標(biāo)峰（保留時(shí)間為7.728min）對(duì)應(yīng)位置出現(xiàn)色譜峰，其對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間為7.699min，表明復(fù)測(cè)小麥粉樣品中含有過(guò)氧化苯甲酰。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和計(jì)算公式可知，復(fù)測(cè)小麥粉樣品中相應(yīng)的過(guò)氧化苯甲酰的含量為0.032g/kg。

圖6 小麥粉復(fù)測(cè)樣品色譜圖

3.7 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)、復(fù)測(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)不合格樣品進(jìn)行檢測(cè)和再次確認(rèn)，結(jié)果都表明不合格小麥粉中含有過(guò)氧化苯甲酰。根據(jù)復(fù)測(cè)數(shù)據(jù)及過(guò)氧化苯甲酰計(jì)算公式可得，不合格小麥粉樣品中過(guò)氧化苯甲酰的含量為0.032g/kg，故確定該小麥粉為不合格產(chǎn)品。

3.8 實(shí)驗(yàn)的精密度

依據(jù)GB/T 22325—2008中對(duì)精密度的要求，重復(fù)性是在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)重復(fù)性限（r），再現(xiàn)性是再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)再現(xiàn)性限（R）。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，標(biāo)準(zhǔn)中重復(fù)性和再現(xiàn)性公式的適用范圍是小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰的含量在0.00～0.20mg/kg時(shí)，而實(shí)驗(yàn)測(cè)定的不合格小麥粉中的過(guò)氧化苯甲酰的含量為32mg/kg，不在適用范圍內(nèi)，故無(wú)法計(jì)算精密度。通過(guò)查詢資料，“關(guān)于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定 高效液相色譜法》（GB/T 22325—2008）精密度的問(wèn)題”[12]中提到兩方面的問(wèn)題，一是方法的最低檢出限是0.5mg/kg與精密度要求的范圍相互矛盾，采用本法無(wú)法檢出0.00～0.20mg/kg范圍；二是當(dāng)檢測(cè)結(jié)果超出0.00～0.20mg/kg范圍時(shí)，重復(fù)性和再現(xiàn)性無(wú)法衡量。

參考現(xiàn)行有效且適用于小麥粉的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，《出口食品中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定 高效液相色譜法》（SN/T 3148—2012）只對(duì)回收率有所要求，《小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定 液相色譜法》（DB22/T 384—2004）中對(duì)精密度的要求是兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%，《小麥粉中過(guò)氧化苯甲酰的測(cè)定方法》（GB/T 18415—2001）中對(duì)精密度的要求是雙試驗(yàn)測(cè)定值的相對(duì)偏差不得大于15%。

上述方法與GB/T 22325—2008的共同點(diǎn)都是利用不同還原劑將過(guò)氧化苯甲酰還原為苯甲酸，再利用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。因此，該方法的精密度參考上述檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算如下。

精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。實(shí)驗(yàn)的精密度為符合精密度要求，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

4 結(jié)論與討論

2019年，本研究對(duì)陜西省咸陽(yáng)市3個(gè)市縣27家面粉廠的30批次小麥粉進(jìn)行抽檢，并對(duì)小麥粉中的過(guò)氧化苯甲酰含量進(jìn)行檢測(cè)。得出統(tǒng)計(jì)結(jié)果，30批次小麥粉中合格29批次、不合格1批次，合格率為96.67%。檢測(cè)中，通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)、加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)、復(fù)測(cè)實(shí)驗(yàn)對(duì)不合格產(chǎn)品進(jìn)行了檢測(cè)和再次確認(rèn)，結(jié)果均表明不合格小麥粉中含有過(guò)氧化苯甲酰，含量為0.032g/kg。

通過(guò)分析，小麥粉中含有過(guò)氧化苯甲?？赡苡袃煞矫嬖颍阂环矫?，企業(yè)在小麥粉生產(chǎn)過(guò)程中直接使用了過(guò)氧化苯甲酰；另一方面，企業(yè)在小麥粉生產(chǎn)過(guò)程中使用的小麥粉添加劑中含有過(guò)氧化苯甲酰，再由添加劑帶入小麥粉中。因此，企業(yè)在小麥粉生產(chǎn)過(guò)程中不僅要做到不使用過(guò)氧化苯甲酰，還要在購(gòu)買(mǎi)小麥粉添加劑時(shí)仔細(xì)查看其配料成分是否正規(guī)合法。通過(guò)對(duì)咸陽(yáng)市3個(gè)市縣的小麥粉生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行監(jiān)督抽檢，有效了解了小麥粉生產(chǎn)的安全狀況，為3個(gè)市縣的監(jiān)管部門(mén)提供了可靠的依據(jù)。