熊 靜,龔易昕悅,王潤月,梁 健,謝 靜,*(.成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,四川成都 60500;.中國科學(xué)院成都生物研究所,四川成都 6004)

一測多評(píng)法(Quantitative Analysis of Multi-components by Single marker,QAMS)是王智民教授于2006年首次提出的一種多成分質(zhì)量評(píng)價(jià)新方法[1]。十余年來,經(jīng)過國內(nèi)外科研工作者的不懈努力,QAMS已被廣泛地應(yīng)用于中藥(中藥材、飲片、提取物及成方制劑)的質(zhì)量評(píng)價(jià)。《中國藥典》(2010年版)首次將QAMS用于黃連藥材的含量測定標(biāo)準(zhǔn),2015年版藥典在其基礎(chǔ)上,新增了8個(gè)使用QAMS的藥材,代表該方法正式獲得國家法定檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的認(rèn)可,并用于行業(yè)生產(chǎn)實(shí)際。在國際上,QAMS也獲普遍認(rèn)可,如《美國藥典》(34版)、《歐洲藥典》(7.0版)分別有25個(gè)、9個(gè)天然藥物標(biāo)準(zhǔn)使用QAMS。

絕大多數(shù)食品也是來源于天然植物,與中藥一樣具有成分復(fù)雜的特征。受QAMS法對(duì)于中藥質(zhì)量控制應(yīng)用的啟發(fā),國內(nèi)外科研工作者從2012年開始使用QAMS對(duì)植物源食品中的多個(gè)成分進(jìn)行了定量分析,取得了較好的效果。本文以傳統(tǒng)的食品和衛(wèi)健委公布的101種“既是食品又是藥品的物品”(《按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材物質(zhì)目錄管理辦法》(征求意見稿)國衛(wèi)辦食品函〔2014〕975號(hào))為對(duì)象,檢索了中國知網(wǎng)CNKI數(shù)據(jù)庫和Web of Science數(shù)據(jù)庫,對(duì)國內(nèi)外公開發(fā)表的食品研究領(lǐng)域的QAMS相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析,綜述QAMS在食品研究中的熱點(diǎn)、值得注意的問題與發(fā)展趨勢。

1 QAMS原理及其優(yōu)勢

QAMS的原理是多成分體系中,各成分的含量與檢測器響應(yīng)值在一定范圍內(nèi)成正比,因此可選取其中某一種成分為內(nèi)標(biāo)物,通過使用對(duì)照品,在與實(shí)際樣品相同分析條件下測定該內(nèi)標(biāo)成分與其它待測成分的含量與響應(yīng)值函數(shù)關(guān)系,從而建立彼此間的相對(duì)校正因子(relative correction factor,RCF,fkm,公式1):

式(1)

其中,Ck、Ak分別為內(nèi)標(biāo)成分的濃度和響應(yīng)值,Cm、Am分別為待測成分的濃度和響應(yīng)值。

通過測定對(duì)照品并計(jì)算出待測成分與內(nèi)標(biāo)成分的fkm值后,即可將公式(1)變形為公式(2),從而計(jì)算出樣品中其它待測成分的絕對(duì)含量:

式(2)

從上述QAMS的基本原理與測定方法,可見QAMS法的最明顯優(yōu)勢是在解決了多成分定量分析中對(duì)照品短缺和檢測成本高的問題,只需要1個(gè)廉價(jià)而易得的對(duì)照品,即可實(shí)現(xiàn)多成分的同時(shí)測定,如Li等[2]使用表沒食子基兒茶素沒食子酸酯實(shí)現(xiàn)了綠茶中8個(gè)兒茶素類化合物的定量測定,Ning等[3]使用人參皂苷Rg1實(shí)現(xiàn)了人參中18個(gè)三萜皂苷類化合物的定量測定。另外,由于減少了對(duì)照品的使用,QAMS還可以大大降低實(shí)驗(yàn)人員的工作量,提高分析檢測的效率。

2 基于QAMS的食品研究進(jìn)展

2.1 QAMS應(yīng)用于相關(guān)食品研究的論文發(fā)表情況

雖然QAMS早于2006年就應(yīng)用于中藥研究,但其首次應(yīng)用于食品研究是2012年。截止2020年1月,在中國知網(wǎng)CNKI數(shù)據(jù)庫和Web of Science數(shù)據(jù)庫上共檢索到75篇文獻(xiàn)(剔除重復(fù)收載后),其中以中文和英文分別發(fā)表58篇和17篇(均作為參考文獻(xiàn)列入本文)。發(fā)表這些論文的期刊,不乏Talanta、Phytomedicine、Journal of Chromatography A等高水準(zhǔn)的SCI期刊,中文的絕大多數(shù)也是北大核心期刊,這說明基于QAMS的食品研究受到了廣大學(xué)者和期刊編輯的重視和好評(píng)。從文章的年度分布來看,如圖1所示,2012～2015年的研究較少,4年共計(jì)僅12篇;2016年一躍上升到19篇,其后2017～2019年雖然有所下降,但也平均在15篇左右,這說明基于QAMS的食品研究工作還有待進(jìn)一步的加強(qiáng)。

圖1 2012～2019年度基于QAMS的食品研究論文發(fā)表情況Fig.1 Publication on food research papers based on QAMS in 2012～2019

2.2 基于QAMS研究的食品范圍

目前已發(fā)表的75篇文獻(xiàn)均為研究論文,涉及到56種傳統(tǒng)食品及“既是食品又是藥品的物品”,所涉及的化學(xué)成分類型包括苯丙酸類、香豆素類、黃酮類、揮發(fā)油類、蒽醌類、生物堿類、三萜及其皂苷類等,具體匯總于表1。不同的學(xué)者在研究同一個(gè)食品時(shí)可能選用了不同的內(nèi)標(biāo)物,或者選用同一個(gè)內(nèi)標(biāo)物定量了不同的其它化合物。從人參皂苷類化合物的定量分析,最為體現(xiàn)QAMS法在解決昂貴對(duì)照品上的凸出優(yōu)勢。

表1 已報(bào)道的基于QAMS研究的食品研究情況Table 1 Reported food research based on QAMS

續(xù)表

續(xù)表

3 QAMS法應(yīng)用的關(guān)鍵問題

現(xiàn)有的研究報(bào)道,均對(duì)QAMS方法進(jìn)行了一系列的方法學(xué)驗(yàn)證,尤其是對(duì)其RCF的耐用性進(jìn)行了重點(diǎn)考察,包括對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)室、不同的實(shí)驗(yàn)人員、不同的儀器設(shè)備、不同的色譜柱、不同的流動(dòng)相流速、不同的檢測波長、不同的柱溫等因素的考察,同時(shí)通過與常規(guī)外標(biāo)法的測定結(jié)果進(jìn)行比較,結(jié)果表明QAMS法具有很好的普適性,能夠作為外標(biāo)法的替代方法用于多成分的定量分析。本文在此基于研究體會(huì)和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,針對(duì)QAMS應(yīng)用中的一些關(guān)鍵問題進(jìn)行一些探討。

3.1 待測色譜峰的定位問題

待測樣品的峰位確定是QAMS法的首要至關(guān)重要問題。目前,幾乎所有的文獻(xiàn)報(bào)道均采用的是相對(duì)保留時(shí)間RCF定峰位,包括內(nèi)標(biāo)峰與待測峰的差值和比值兩種定位方案。雖然這兩種方案簡便易行,但其普適性仍然具有一定的不足:如果保留時(shí)間相差太大的話,無論差值和比值的RCF的RSD都會(huì)變大,甚至有可能超過合理允許范圍;不同儀器之間,尤其是不同色譜柱之間,差值和比值的RSD將會(huì)顯著上升,從而有可能降低QAMS方法的普適性。因此,建議在使用不同色譜柱對(duì)成分復(fù)雜的、保留時(shí)間差異大的多個(gè)待測成分進(jìn)行定位時(shí),最好采用校正保留時(shí)間的絕對(duì)誤差的辦法,以提高色譜峰定位的準(zhǔn)確性(推薦中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所提出的線性校正法[77]);另外,也可以選用定性用的對(duì)照品或“對(duì)照提取物”進(jìn)行校正[78]。

3.2 紫外低吸收化合物QAMS檢測的問題

目前報(bào)道的QAMS法,主要針對(duì)紫外共軛吸收強(qiáng)的多酚類化合物,使用HPLC/UV或UPLC/UV法進(jìn)行測定。但食品中還有大量紫外吸收弱、甚至無吸收的化合物。目前,已有的1篇使用HPLC/ELSD[58]、2篇使用GC[66,71]和3篇使用LC/MS[3,28-29]報(bào)道,說明換檢測器對(duì)弱紫外吸收化合物的QAMS檢測是可行的。特別是MS具有UV無法比擬的準(zhǔn)確性和檢測限,因此,基于LC/MS的QAMS分析應(yīng)該成為國內(nèi)外學(xué)者們研究的重點(diǎn)。

3.3 不同類型(母核)化合物的QAMS問題

以目前的研究報(bào)道來看,QAMS應(yīng)用于同類型化合物(母核相同、僅僅是取代基的差異)的同時(shí)測定是完全沒有問題的,而對(duì)于不同類型的化合物,現(xiàn)有研究結(jié)果尚無法得出確定性的結(jié)論。雖然有不少研究表明QAMS對(duì)不同類型化合物具有很好的適宜性,但也有少量報(bào)道得出了相反的結(jié)論,如張瀟等[16]明確指出“一測多評(píng)法不適用于忍冬中不同類型化合物之間含量測定,其應(yīng)用有一定局限性”;Yi等[25]分別使用蘆丁、廣藿香苷A、異綠原酸C三個(gè)化合物為內(nèi)標(biāo)物QAMS測定3類共15個(gè)化合物,Stekolshchikova等[29]分別使用人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷F11三個(gè)化合物為內(nèi)標(biāo)物QAMS測定3類共14個(gè)人參皂苷,這為不同類型化合物的QAMS提供了一個(gè)有益的參考:首先考察選用一個(gè)內(nèi)標(biāo)的情況,看是否能滿足不同類型化合物的QAMS需求;如果不行的話,那就選擇多個(gè)內(nèi)標(biāo),分別測定同類型的化合物?？傮w上,不同類型(母核)化合物的QAMS問題還需要更深入的探討,尤其是使用MS作為檢測器的時(shí)候。

3.4 內(nèi)標(biāo)化合物與待測化合物含量差距大的問題

這個(gè)問題在目前的文獻(xiàn)報(bào)道中尚未獲得足夠的重視。待測樣品中內(nèi)標(biāo)化合物與待測化合物含量差距過大,會(huì)因微小的體系變化而導(dǎo)致RCF變動(dòng)很大,從而使得測定結(jié)果的準(zhǔn)確性降低,為此,QAMS的提出者王智民教授提出“待測成分應(yīng)有相對(duì)較高的含量,原則上應(yīng)≥1 mg/g”[78],在應(yīng)用實(shí)踐中卻不可忽視。

4 展望

QAMS在部分食品的多成分的檢測中得到了成功應(yīng)用,特別是解決了多成分定量分析中對(duì)照品短缺和檢測成本高的問題。雖然QAMS作為一種新穎、高效、低成本的整體質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,已經(jīng)展現(xiàn)出了自身的優(yōu)勢,但其色譜峰定位、結(jié)構(gòu)含量懸殊的多成分之間及不同測定儀器之間的普適性等問題還需更深入的研究。相信經(jīng)過各位專家學(xué)者的不斷研究與努力完善,QAMS將會(huì)越來越廣泛地運(yùn)用于食品科研和生產(chǎn)實(shí)踐中。