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        腌制過(guò)程中亞硝酸鈉對(duì)羊肉脂肪酸組成以及脂質(zhì)氧化的影響

        2020-11-17 03:02:52姬曉穎馬國(guó)源陳耀祥金錦偉余群力

        姬曉穎,馬國(guó)源,陳耀祥,金錦偉,余群力

        (1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州 730070;2.甘肅中天羊業(yè)股份有限公司,甘肅 定西 743000;3.青海5369生態(tài)牧業(yè)科技有限公司,青海 果洛 814000)

        肉的腌制是肉品貯藏的一種傳統(tǒng)手段,也是肉品生產(chǎn)常用的加工方法.亞硝酸鈉在肉制品加工的過(guò)程中,主要用作發(fā)色劑、防腐劑和抗氧化劑[1].肉在腌制過(guò)程中添加亞硝酸鹽會(huì)產(chǎn)生獨(dú)特?zé)岱€(wěn)定的腌制顏色,可明顯改善肉類制品的感官品質(zhì)[2].亞硝酸鹽可抑制肉毒梭狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、蠟狀芽孢桿菌和產(chǎn)氣莢膜桿菌等的生長(zhǎng)繁殖,有利于肉制品的貯藏和貨架期的延長(zhǎng)[3-4].亞硝酸鹽可以防止肉制品酸敗,延長(zhǎng)其保質(zhì)期[5],因此在腌制肉制品過(guò)程中使用亞硝酸鹽已經(jīng)非常普遍.但是在腌制肉制品中如果亞硝酸鹽添加量超過(guò)國(guó)標(biāo)最大使用量150 mg/kg時(shí),就會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒副作用[6-7].隨著公眾食品安全意識(shí)的提高,人們對(duì)肉制品中添加亞硝酸鹽持消極態(tài)度,致使肉制品中添加亞硝酸鹽的量被肉品腌制研究關(guān)注與重視.

        雖然世界各國(guó)的肉類研究機(jī)構(gòu)和生產(chǎn)廠家都在不斷積極研發(fā)一種經(jīng)濟(jì)適用、安全可靠、能代替亞硝酸鈉的肉品發(fā)色劑,如嘗試用麥芽酚、抗壞血酸、葡萄糖酸鐵、檸檬酸鐵等來(lái)替代亞硝酸鈉,然而這些物質(zhì)無(wú)論在發(fā)色效果、持久性、穩(wěn)定性、防腐、呈味等方面都效果不理想,到目前為止還沒(méi)有找到完全替代亞硝酸鈉的添加劑[8-9].因此國(guó)內(nèi)外的肉類加工企業(yè)仍采用亞硝酸鈉作為肉品發(fā)色劑來(lái)獲得理想的色澤和風(fēng)味,延長(zhǎng)保質(zhì)期[10].目前需要解決的問(wèn)題是如何減少亞硝酸鈉的用量,所以研究亞硝酸鈉的使用量對(duì)腌肉制品脂質(zhì)氧化的影響具有十分重要意義.

        因此本研究以羊肉作為研究對(duì)象,探討腌制過(guò)程中不同亞硝酸鈉添加量對(duì)羊肉脂肪酸組成以及脂質(zhì)氧化程度的影響,以期能為腌制羊肉制品的脂質(zhì)氧化及質(zhì)量調(diào)控提供一定的理論依據(jù).

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        本試驗(yàn)取樣于甘肅省定西市中天羊業(yè)股份有限公司,隨機(jī)選取胴體質(zhì)量相近、健康的6~9月齡大尾寒羊9只,屠宰后采集臀肌,將肉樣采集后清洗血液,剔除脂肪、筋膜和結(jié)締組織,瀝干,放入保鮮袋中4 ℃運(yùn)輸回實(shí)驗(yàn)室.

        亞硝酸鈉、乙醇、甲醇、異丙醇、丙二醛、氫氧化鉀、氯化鈉、氯仿、硫氰酸銨、氯化亞鐵、三氯乙酸、正己烷、濃硫酸等均購(gòu)于天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司,均為分析純.

        1.2 儀器

        電子天平FA2004B(上海佑科儀器有限公司);AB-S型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);水浴鍋(北京科偉永興儀器公司);冰箱(青島海爾電冰箱股份有限公司);高速臺(tái)式離心機(jī)GT10-1(北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司); 7000D GC-MS聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent公司)等.

        1.3 樣品處理

        將羊肉切割成約3 cm×3 cm×3 cm均勻小塊,向其中均勻注射0、50、100、150 mg/kg的NaNO2.隨后置于滾揉機(jī)中滾揉12 h,期間每滾揉30 min,靜止30 min,放置在4 ℃的冰箱中腌制,在0、12、24、48、72和168 h時(shí)進(jìn)行取樣.其中,色度以及肌紅蛋白含量直接測(cè)定,對(duì)于不便立即測(cè)定的指標(biāo),用鋁箔紙包裹避光,避免脂質(zhì)光敏氧化的發(fā)生,置于-80 ℃凍藏待測(cè).

        1.3.1 色度 肉色采用CR-10型色差儀,將色彩色差計(jì)調(diào)至L*、a*、b*色域系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定.肉樣沿肌纖維垂直的方向切取厚度不低于2 cm的肉塊,將肉樣新切面朝上平放在托盤上,置4 ℃避光靜置30 min后,在其切面上選取6個(gè)點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定,取平均值[11].因?yàn)樵谌跛嵝原h(huán)境下亞硝酸呈不穩(wěn)定狀態(tài),繼續(xù)分解為亞硝基和NO,亞硝基會(huì)與肉制品中的肌紅蛋白和血紅蛋白結(jié)合,產(chǎn)生亞硝基肌紅蛋白和亞硝基血紅蛋白,從而使肉品呈現(xiàn)鮮紅色,改變?nèi)馄返腶*值,所以本試驗(yàn)只測(cè)定了a*值.

        1.3.2 硫代巴比妥酸值(TBARS) 采用國(guó)標(biāo) GB 5009.181-2016[12]測(cè)定.

        1.3.3 過(guò)氧化值(POV) 采用國(guó)標(biāo) GB 5009.227-2016[13]測(cè)定.

        1.3.4 脂肪酸含量 參考O′Fallon等[14]的方法測(cè)定,根據(jù)具體情況作稍微的修改.將真空包裝袋中的肉樣在室溫下解凍12 h,用刀剝離并剔除肌肉表面脂肪,將樣品置于研缽中加入液氮研磨,然后稱取1.0 g研磨后的樣品置于具塞試管,分別加入0.7 mL濃度為10 mol/L的KOH溶液和5.3 mL無(wú)水甲醇,并在55 ℃恒溫下水浴1.5 h,同時(shí)每20 min振搖試管5 s.水浴結(jié)束后,取出試管,在自來(lái)水下將其冷卻到低于室溫,然后再加入0.58 mL濃度為12 mol/L的H2SO4溶液,在55 ℃下繼續(xù)恒溫水浴1.5 h進(jìn)行游離脂肪酸甲酯化,同時(shí)每20 min振搖5 s.水浴結(jié)束后,取出試管,用自來(lái)水將其冷卻至低于室溫,再加入3 mL正己烷搖勻后轉(zhuǎn)移至離心管,以3 000 r/min的速度離心5 min,取上清液,并利用有機(jī)相過(guò)濾膜將其過(guò)濾到樣品瓶,放于-20 ℃待GC檢測(cè).

        色譜柱:DB-23石英毛細(xì)管柱(60 m×0.25 mm×0.25μm,美國(guó)Agilent公司);進(jìn)樣口:250 ℃,分流比20∶1;進(jìn)樣量:1 μL;載氣為He氣,柱流速1 mL/min;升溫程序:初溫50 ℃,保持4 min,10 ℃/min升溫至150 ℃,保持4 min,5 ℃/min升溫至230 ℃,保持5 min.

        質(zhì)譜條件:離子源溫度230 ℃,四級(jí)桿溫度150 ℃,電子轟擊能70 eV,掃描范圍15~550 m/z,輔助溫度230 ℃.

        化合物經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索同時(shí)與NIST Library譜庫(kù)的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖對(duì)照,結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn),確定各揮發(fā)性化合物的化學(xué)成分,僅報(bào)道匹配度大于800(最大值1000)的鑒定結(jié)果.

        1.3.5 脂質(zhì)氧化產(chǎn)物 參考Alicia等[15]的方法并稍作修改.采用SPME-GC-MS技術(shù)測(cè)定樣品中揮發(fā)性化合物的種類及含量.取l0 g肉樣,與1 g NaCl混勻后裝入頂空萃取瓶中密封,80 ℃水浴40 min充分熟制后,將萃取頭插入瓶中萃取40 min,取出萃取頭進(jìn)行GC-MS分析.

        色譜條件:色譜柱為Thermo TG-WAX(60 m×0.25 mm,0.5 μm).升溫程序:色譜柱起始柱溫35 ℃,保持5 min,然后以5 ℃/min升至220 ℃,保持10 min.載氣(He)流速0.8 mL/min,不分流.進(jìn)樣解吸溫度240 ℃,解吸2 min.

        質(zhì)譜條件:電子轟擊(EI)離子源,電子能量70 eV,離子源溫度200 ℃,燈絲電流200 μA,接口溫度240 ℃,檢測(cè)電壓350 V,掃描質(zhì)量范圍為35~350 m/z.

        揮發(fā)性化合物定性與定量:用TuborMass4.1.1數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),對(duì)GC-MS結(jié)果進(jìn)行分析,通過(guò)對(duì)比系統(tǒng)自帶的NBS、Nist等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行解析,各物質(zhì)峰所得質(zhì)譜圖與標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì),根據(jù)其匹配度鑒定各揮發(fā)性化合物.并用相對(duì)離子豐度表示各種化合物的相對(duì)含量.

        1.3.6 肌紅蛋白相對(duì)含量測(cè)定 參考Krzywicki等[16]的方法略有改動(dòng).取肉樣5 g,加入20 mL 0.04 mol/L pH值為6.8的磷酸鈉緩沖液勻漿25 s.勻漿液在4 ℃冰箱中放置1 h,然后在3 500 r/min轉(zhuǎn)速下離心30 min.上清液經(jīng)濾紙過(guò)濾,用同樣的緩沖液補(bǔ)足至25 mL,測(cè)定其在525、545、565、572 nm處的吸光度.氧合肌紅蛋白和高鐵肌紅蛋白相對(duì)含量計(jì)算公式為:

        COMb=(0.882A575/A525-1.267A565/A525+0.809A545/A525-0.361)×100%

        CMMb=(-2.514A572/A525+0.777A565/A525+0.8A545/A525+1.098) ×100%

        式中:COMb:氧合肌紅蛋白相對(duì)含量,%;CMMb:高鐵肌紅蛋白相對(duì)含量,%;Aλ:相應(yīng)波長(zhǎng)下的吸光度

        2 結(jié)果與分析

        2.1 色度

        色澤是反應(yīng)羊肉感官品質(zhì)的重要指標(biāo),色澤很大程度上影響消費(fèi)者的喜好[17].a*值的變化與肌紅蛋白(Mb)的含量和化學(xué)狀態(tài)密切相關(guān).由表1可得,a*值在24 h內(nèi)有上升趨勢(shì),24 h后逐漸趨于穩(wěn)定或者下降;且未添加亞硝酸鈉的處理a*值低于添加亞硝酸鈉的處理(P<0.05).這與趙晶[18]不同貯藏條件下羊肉品質(zhì)及其DNA質(zhì)量的研究結(jié)果相似.未添加亞硝酸鈉的肉樣在0~24 h時(shí)a*值升高的原因很可能就是因?yàn)閯偳虚_(kāi)的肉放置一段時(shí)間,肌肉中的肌紅蛋白與氧氣接觸,變?yōu)檠鹾霞〖t蛋白,肉色表現(xiàn)為鮮紅色;24 h以后肉表面的氧合肌紅蛋白進(jìn)一步被氧化成褐色的高鐵肌紅蛋白,肉的顏色變暗,檢測(cè)到的紅度值相對(duì)較低;而添加亞硝酸鈉后,肉樣中的肌紅蛋白與亞硝酸鈉反應(yīng)可生成亞硝基肌紅蛋白,呈粉紅色[19],因此其a*值較未添加亞硝酸鈉的均有所上升.且當(dāng)亞硝酸鈉濃度為100 mg/kg時(shí),a*值更為穩(wěn)定;腌制168 h時(shí),亞硝酸鈉濃度為100 mg/kg的肉樣a*值比未添加組的高39.21%.

        表1 腌制過(guò)程中亞硝酸鈉對(duì)羊肉a*值的影響

        2.2 硫代巴比妥酸值(TBARS)

        TBARS值表征反應(yīng)中氧化產(chǎn)物MDA(丙二醛)的質(zhì)量分?jǐn)?shù),與脂肪的氧化程度成正比[20].表2可得,由于脂肪的氧化,羊肉在腌制過(guò)程中所有肉樣TBARS值均緩慢升高,這與林玉海[21]的研究結(jié)果相似.而且在整個(gè)腌制過(guò)程中添加亞硝酸鈉的肉樣TBARS值明顯低于未添加亞硝酸鈉的肉樣,在腌制24 h后各肉樣中MDA含量有顯著性差異(P<0.05),這可能是由于亞硝酸鈉可以與不飽和脂肪酸反應(yīng)形成穩(wěn)定的脂質(zhì)衍生物抑制脂質(zhì)氧化,不僅提高了肉類產(chǎn)品的穩(wěn)定性,而且可以防止酸敗,延長(zhǎng)其保質(zhì)期.當(dāng)亞硝酸鈉的濃度為100 mg/kg時(shí),MDA含量的上升趨勢(shì)更為緩慢.腌制168 h時(shí),濃度為100 mg/kg肉樣的MDA含量比未添加的低14.64%.

        表2 腌制過(guò)程中亞硝酸鈉對(duì)羊肉TBARS值的影響

        2.3 過(guò)氧化值(POV)

        過(guò)氧化值是表示油脂和脂肪酸氧化程度的一個(gè)指標(biāo)[22].由表3可得,由于脂肪的氧化,氫過(guò)氧化物含量逐漸增加,羊肉在腌制過(guò)程中所有肉樣POV值均緩慢升高,這可能是由于脂肪開(kāi)始緩慢氧化,氫過(guò)氧化物含量逐漸增加.這與劉文營(yíng)等[23]的研究結(jié)果相似.而在整個(gè)腌制過(guò)程中添加亞硝酸鈉的肉樣其POV值明顯低于對(duì)照組,12 h后均有顯著差異(P<0.05).當(dāng)亞硝酸鈉的濃度為100 mg/kg時(shí),POV值的上升趨勢(shì)較其他亞硝組更為緩慢.腌制168 h時(shí),濃度為100 mg/kg肉樣的POV值比未添加的低22.10%.

        表3 腌制過(guò)程中亞硝酸鈉對(duì)羊肉POV值的影響Table 3 Effect of sodium nitrite on the POV value of mutton during pickling

        2.4 脂肪酸氧化分析

        由TBARS值和POV值可知,當(dāng)亞硝酸鈉添加量為100 mg/kg時(shí),對(duì)脂質(zhì)氧化抑制效果最明顯.因此選擇腌制亞硝酸鈉添加量為100 mg/kg、國(guó)標(biāo)中亞硝酸鈉添加量的上限150 mg/kg,以及未添加亞硝酸鈉的肉樣測(cè)定脂肪酸含量以及脂質(zhì)氧化產(chǎn)物.由表4可知,單不飽和脂肪酸和多不飽和脂肪酸隨時(shí)間的延長(zhǎng)其含量逐漸下降;而飽和脂肪酸隨腌制時(shí)間的延長(zhǎng)其含量逐漸上升,這與Holman等[25]的研究結(jié)果相似.Alicia等[15]研究指出,不飽和脂肪酸含量越高,牛肉中脂質(zhì)越容易發(fā)生氧化,而脂肪含量越高,脂質(zhì)氧化程度越高.腌制時(shí)間為168 h時(shí),添加亞硝酸鈉濃度為100 mg/kg的肉樣比未添加的不飽和脂肪酸含量低44.57%,飽和脂肪酸含量高9.51%,這可能是由于亞硝酸鈉與不飽和脂肪酸的碳碳雙鍵發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生穩(wěn)定的脂質(zhì)衍生物,阻止脂質(zhì)的過(guò)氧化,因此亞硝酸鈉對(duì)脂質(zhì)氧化有一定的抑制作用[26-27].

        表4 腌制過(guò)程中不同亞硝酸鈉添加量對(duì)羊肉脂肪酸含量的影響

        2.5 脂質(zhì)氧化產(chǎn)物

        羊肉在腌制過(guò)程中添加不同濃度亞硝酸鈉對(duì)其脂質(zhì)氧化產(chǎn)物的影響見(jiàn)表5.表5中列出了18種相對(duì)含量較高且對(duì)脂質(zhì)氧化有影響的醛類、酮類和醇類物質(zhì).

        醛類主要包括己醛、庚醛、辛醛、壬醛、2-辛烯醛、苯甲醛等11種醛類物質(zhì).醛類化合物是脂質(zhì)氧化產(chǎn)生的穩(wěn)定產(chǎn)物,其含量的變化可用來(lái)評(píng)價(jià)肉類制品的脂質(zhì)氧化程度[28].醛類化合物中含量較高的為己醛和壬醛,整體含量隨腌制時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì).己醛是脂質(zhì)氧化過(guò)程中重要的氧化產(chǎn)物[29],隨著腌制時(shí)間的延長(zhǎng),己醛含量呈先上升后下降的趨勢(shì),這與Fereidoon等[28]的研究結(jié)果相似.腌制168 h時(shí),添加亞硝酸鈉濃度為100 mg/kg的肉樣比未添加亞硝酸鈉的肉樣低15.24%.

        由表5可得,醛、酮類化合物隨腌制時(shí)間的延長(zhǎng),其含量呈下降趨勢(shì),而醇類化合物含量呈上升趨勢(shì).且添加亞硝酸鈉的肉樣醛酮類化合物下降趨勢(shì)較為緩慢,醇類化合物上升趨勢(shì)也較為緩慢,這可能是由于亞硝酸鈉螯合金屬離子而發(fā)揮抗氧化作用所致.

        表5 腌制過(guò)程中不同亞硝酸鈉添加量對(duì)羊肉脂質(zhì)氧化產(chǎn)物相對(duì)含量的影響

        2.6 肌紅蛋白相對(duì)含量

        氧合肌紅蛋白和高鐵肌紅蛋白的相對(duì)含量決定肉的色澤,當(dāng)高鐵肌紅蛋白含量較高時(shí),肌肉呈現(xiàn)褐色[31].MbO2的含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì),在72~168 h,添加亞硝酸鈉的肉樣MbO2含量顯著高于未添加亞硝酸鈉的肉樣,并且168 h時(shí)未添加和添加亞硝酸鈉的MbO2與0 h的相比分別降低了57.0%和44.6%(P<0.05),說(shuō)明亞硝酸鈉可以抑制MbO2的氧化.而MetMb的相對(duì)含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈先上升后下降的趨勢(shì),在48 h時(shí)MetMb含量最高,未添加和添加亞硝酸鈉的MetMb與0 h的相比分別升高了64.8%和37.8%(P<0.05),且未添加亞硝酸鈉的MetMb相對(duì)含量高于添加亞硝酸鈉的肉樣,這可能是由于亞硝酸鈉分解為NO,與Fe連接,穩(wěn)定Hb和Mb的結(jié)構(gòu),防止其氧化分解.說(shuō)明亞硝酸鈉可有效減緩肌紅蛋白高鐵氧化.這一結(jié)果與前面a*值的變化趨勢(shì)一致.

        表6 腌制過(guò)程中亞硝酸鈉對(duì)羊肉肌紅蛋白相對(duì)含量的影響

        3 結(jié)論

        經(jīng)添加亞硝酸鈉腌制的羊肉在4 ℃條件下可以有效降低脂質(zhì)氧化速率,延長(zhǎng)貨架期.隨著腌制時(shí)間的延長(zhǎng),不同亞硝酸鈉添加量肉制品的脂質(zhì)氧化程度存在顯著性差異,其中亞硝酸鈉添加量為100 mg/kg的脂質(zhì)氧化程度最低.因此在羊肉腌制過(guò)程中添加亞硝酸鈉可有效抑制脂質(zhì)氧化,且當(dāng)亞硝酸鈉的添加量為100 mg/kg時(shí)效果較為顯著.

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