孫長玲，孫嘉彤，胡蔣寧

(大連工業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院， 國家海洋食品工程與技術(shù)研究中心， 遼寧 大連 116034)

苯并(a)芘(BaP)常溫下為淡黃色針狀晶體，是一種含有5個苯環(huán)的多環(huán)芳烴，屬于油脂中難降解的有毒有害化合物之一[1]。BaP對人體的各種器官如肺、肝、皮膚和胃腸等均有影響，具有一定的致癌性和致病性[2-4]，因此應(yīng)嚴(yán)格控制其在食品中的含量。BaP作為外源性危害物，廣泛存在于煙熏食品、海洋食物及食用油中，尤其是食用油中含量較多[5-6]。目前各國對BaP在食用油中的最大允許含量也各不相同。我國食用油中BaP的最大允許量為10 μg/kg。國際橄欖油理事會推薦BaP的最大允許量為2 μg/kg。

在我國，現(xiàn)行食用油中BaP檢測的前處理方法有GB/T 5009.27—2016《食品中苯并(a)芘的測定》中的中性氧化鋁柱柱層析或苯并(a)芘分子印跡柱凈化、SPE固相萃取法[7]等，但國標(biāo)法中油脂的前處理方法溶劑消耗較大，操作步驟煩瑣，操作準(zhǔn)確性及時長一定程度上取決于操作人員的熟練程度。SPE固相萃取法雖然操作相對簡單，但是大規(guī)模檢測BaP時，購買SPE小柱的成本將會大大增加。因此，有必要開發(fā)新型、簡單、快速富集方法用于檢測油脂中BaP。已有國外學(xué)者[8-10]試圖僅用少量有機(jī)試劑提取食用油中BaP，然后利用二甲基亞砜將BaP從有機(jī)相中萃取出來，二甲基亞砜中BaP的分配系數(shù)用水來調(diào)整，從而達(dá)到分離BaP的目的。Pandey等[11]開發(fā)利用液液萃取和固相萃取柱，然后通過高效液相色譜儀熒光檢測器進(jìn)行檢測。上述方法雖然節(jié)約了少量有機(jī)試劑，但其成本、有機(jī)試劑的消耗量以及環(huán)保方面并沒有得到很好的解決，所以目前亟需開發(fā)一種有機(jī)試劑消耗量少、簡單、快速、精確度高的油脂前處理方法。

本文建立一種經(jīng)相轉(zhuǎn)移催化皂化提取富集食用油中BaP技術(shù)，利用高效液相色譜(HPLC-FLD)檢測方法進(jìn)行BaP測定，并與現(xiàn)有常規(guī)方法進(jìn)行了比較，以期為油脂中BaP的檢測提供新的可能。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

油茶籽油(BaP未檢出)，苯并(a)芘標(biāo)準(zhǔn)品、四丁基溴化銨、四氫呋喃均購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，甲醇、無水乙醇均為色譜級分析試劑，氫氧化鉀購自天津市大茂化學(xué)試劑廠，1-辛醇購自東京化成工業(yè)株式會社。

1260Ⅱ系列高效液相色譜儀(美國安捷倫，配有熒光檢測器)，DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，超聲清洗機(jī)，渦旋振蕩器，98-2強磁力攪拌器，電子天平。

1.2 實驗方法

1.2.1 液相色譜條件

流動相為色譜級甲醇-蒸餾水(體積比95∶5)，等度洗脫，流速0.8 mL/min；FLD檢測器，激發(fā)波長384 nm，發(fā)射波長406 nm；柱溫箱溫度為室溫；進(jìn)樣量10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

利用色譜級甲醇配制質(zhì)量濃度分別為1.562 5、3.125、6.25、12.5、25 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.2.1 色譜條件進(jìn)行分析，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.3 樣品的前處理

稱取0.25 g油茶籽油于25 mL玻璃小瓶中，加入4 mol/L氫氧化鉀溶液8 mL、1 mol/L 四丁基溴化銨(TBAB)溶液200 μL、無水乙醇2 mL，在恒溫加熱磁力攪拌器中，80℃、800 r/min攪拌10 min后，冷卻至室溫。再加入1 mL四氫呋喃和500 μL 1-辛醇，在室溫下800 r/min磁力攪拌萃取15 min后，靜置。用注射器抽取上清液用甲醇定容至5 mL，搖勻，過膜，待測。

1.2.4 BaP含量測定

將1.2.3前處理樣品注入高效液相色譜儀進(jìn)樣瓶中，按照1.2.1色譜條件進(jìn)行分析，將對應(yīng)色譜峰峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中，計算BaP含量，并計算BaP回收率。

1.2.5 回收率和精密度實驗

稱取0.25 g油茶籽油于25 mL玻璃小瓶中，加入1 mL一定質(zhì)量濃度的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用1.2.3和1.2.4方法處理分析測定BaP含量。設(shè)置空白對照，進(jìn)行3個水平的檢測，每組實驗重復(fù)6次。計算加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限

按照1.2.2方法繪制BaP標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到的線性方程為y=327.85x-274.14，R2=0.998 9。BaP質(zhì)量濃度在1.562 5～25 μg/mL之間與峰面積具有良好的線性關(guān)系，以信噪比為3計算的檢出限為0.2 ng/mL，以信噪比為10計算的定量限為0.7 ng/mL。

2.2 前處理條件的優(yōu)化

2.2.1 四氫呋喃體積的優(yōu)化

在0.25 g油茶籽油中分別添加0.125、0.062 5、0.031 25 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，按照1.2.3方法在其他條件不變的情況下分別添加0.5、1、1.5 mL四氫呋喃進(jìn)行萃取，按1.2.4方法分析并計算BaP回收率，考察四氫呋喃體積對BaP回收率的影響，結(jié)果如圖1所示。

圖1 四氫呋喃體積對BaP回收率的影響

由圖1可知，在四氫呋喃體積為1 mL時BaP回收率最高，因此選取四氫呋喃的體積為1 mL。

2.2.2 萃取方式的選擇

在0.25 g油茶籽油中分別添加1 mL質(zhì)量濃度為0.125、0.062 5、0.031 25 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.3方法在其他條件不變的情況下，分別選用超聲15 min、渦旋分散15 min和磁力攪拌15 min 3種方式進(jìn)行萃取，按1.2.4方法分析并計算BaP回收率，考察3種萃取方式對BaP回收率的影響，結(jié)果如圖2所示。

圖2 不同萃取方式對BaP回收率的影響

由圖2可知，超聲、渦旋分散和磁力攪拌的BaP回收率分別為70.87% ～ 84.27%、93.42% ～ 101.78%、96.83%～109.59%。磁力攪拌的BaP回

收率最高，因此選用磁力攪拌作為萃取方式。

2.3 回收率及精密度

在油樣中分別添加質(zhì)量濃度為0.125、0.062 5、0.031 2 μg/mL的BaP標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL，按1.2.3方法進(jìn)行前處理后，按1.2.4方法測定BaP含量，計算回收率和精密度，結(jié)果見表1。

表1 方法的回收率和精密度

由表1可知，方法的回收率為96.15%～103.2%，RSD在2.61%～4.96%之間，符合痕量分析要求。

2.4 方法對比(見表2)

表2 相轉(zhuǎn)移催化皂化法與其他測定方法結(jié)果比較

由表2可見，與國標(biāo)方法及SPE方法相比，本研究方法回收率高、溶耗低、用時短，更加環(huán)保，可以滿足油脂中BaP含量快速測定的要求。

3 結(jié) 論

本研究建立了提取、富集食用油中苯并(a)芘的相轉(zhuǎn)移催化皂化前處理方法，并利用高效液相色譜進(jìn)行檢測。結(jié)果表明，所用的前處理方法操作簡單，耗時短，檢出限為0.2 ng/mL，定量限為0.7 ng/mL，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2.61%～4.96%之間，重復(fù)性好，回收率達(dá)96.15%～103.2%，符合高效、快速檢測食用油中苯并(a)芘的檢測要求。