南文金，黃健強(qiáng)，吳靜波，胡鴻惠，鐘 瀾，陳細(xì)浩，彭國(guó)良*

（1.韶關(guān)學(xué)院 廣東省粵北生豬養(yǎng)殖廢棄物減量化工程技術(shù)研究中心，廣東 韶關(guān) 512005；2. 韶關(guān)市畜牧研究所，廣東 韶關(guān) 512005）

豬瘟是一種豬烈性傳染病，該病在我國(guó)屬于一類動(dòng)物疫病，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展.豬瘟由豬瘟病毒屬豬瘟病毒感染引起，豬瘟病毒為單股正鏈RNA病毒，只感染家豬和野豬，不感染其他動(dòng)物和人［1］.該病毒在世界多地有流行，歐美國(guó)家通過(guò)凈化該病使之在家豬群中發(fā)生率很低，呈偶爾散發(fā).在歐洲國(guó)家和地區(qū)，該病主要流行在野豬群中，并對(duì)其國(guó)內(nèi)家豬構(gòu)成嚴(yán)重威脅［2-3］，因此，對(duì)該病的防治極為重視.早在上世紀(jì)50年代，我國(guó)科學(xué)家就研制出了豬瘟C毒株弱毒疫苗，該疫苗被公認(rèn)為是效果最好的豬瘟疫苗，為世界養(yǎng)豬業(yè)做出了卓越貢獻(xiàn)，很多國(guó)家利用該疫苗消滅了豬瘟病毒.我國(guó)豬瘟主要通過(guò)免疫疫苗進(jìn)行防控，該病為強(qiáng)制免疫疾病，高密度的疫苗接種使得豬瘟防控在我國(guó)取得了良好的效果.根據(jù)中國(guó)獸藥監(jiān)察所2011—2018年的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，該病在我國(guó)豬群中的陽(yáng)性帶毒率從9.26%下降到0.7%［4］，已經(jīng)具備凈化豬瘟的條件.雖然該病在豬群中帶毒率很低，但在養(yǎng)豬生產(chǎn)中不容忽視，馬振乾對(duì)2015—2017年采自全國(guó)各地的3 000余份發(fā)病豬樣品進(jìn)行豬瘟病毒核酸進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果不同年份發(fā)病豬樣品核酸陽(yáng)性率為12.8%～16.4%［5］，鄒敏等研究也證明在發(fā)病豬樣品豬瘟病毒核酸檢出率還比較高［6］.因此，養(yǎng)豬生產(chǎn)中一旦豬瘟疫苗免疫失敗，造成的危害極大.豬瘟疫苗免疫效果直接影響到豬瘟防控成效，不同學(xué)者的對(duì)各地區(qū)豬瘟免疫效果檢測(cè)報(bào)道表明，我國(guó)豬群中種豬免疫效果相對(duì)較好，但商品豬群免疫效果不理想，部分豬場(chǎng)甚至出現(xiàn)免疫失敗，特別是保育豬群的抗體水平一直比較低，成為高風(fēng)險(xiǎn)群體［7-8］.隨著集約化養(yǎng)豬發(fā)展，如何通過(guò)監(jiān)測(cè)抗體水平進(jìn)行豬瘟免疫程序優(yōu)化，使豬群整體抗體水平高，抗體離散度小顯得尤為重要.本研究以某豬場(chǎng)基本生產(chǎn)流程和現(xiàn)有免疫程序?yàn)榛A(chǔ)，通過(guò)對(duì)哺乳期母豬抗體水平變化和母源抗體對(duì)疫苗免疫檢測(cè)，對(duì)該豬場(chǎng)免疫效果進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)，為豬場(chǎng)豬瘟免疫程序科學(xué)制定提供依據(jù)和參考.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清樣品

2018年6—9月采集自廣東某規(guī)?；i場(chǎng)，存欄基礎(chǔ)母豬1 200頭.根據(jù)試驗(yàn)方案分別采集相應(yīng)的母豬和仔豬血液.

1.1.2 豬瘟抗體檢測(cè)試劑盒和主要儀器

豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京愛(ài)德士元亨生物科技有限公司，酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo公司MULTISKAN GO型號(hào)全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀.

1.2 方法

1.2.1 母豬哺乳期豬瘟抗體變化

選擇同期分娩母豬40頭，分別在分娩當(dāng)天和仔豬斷奶當(dāng)天耳靜脈采血，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法制備血清，血清-25 ℃保存.

1.2.2 母豬分娩日抗體和仔豬28日齡母源抗體關(guān)系

選擇同期分娩13頭母豬，分娩日豬瘟抗體阻斷率在37.39%～91.37%間，25日齡斷奶，28日齡每窩仔豬隨機(jī)選擇4頭仔豬前腔靜脈采血檢測(cè)豬瘟母源抗體水平，仔豬打耳號(hào)標(biāo)記.

1.2.3 母源抗體對(duì)仔豬免疫效果影響

根據(jù)1.1.2試驗(yàn)檢測(cè)的28日齡窩仔豬豬瘟抗體平均阻斷率高低，選擇母源抗體水平不同的6窩仔豬，豬瘟母源抗體平均阻斷率分別為37.39%、56.58%、67.67%、73.69%、86.26%和91.25%，每頭母豬所產(chǎn)仔豬隨機(jī)選擇4頭（和1.1.2試驗(yàn)同樣編號(hào)仔豬）.分別在仔豬35日齡、42日齡、56日齡、70日齡、84日齡和105日齡前腔靜脈采血分離血清.仔豬豬瘟疫苗免疫程序?yàn)?8日齡和56日齡進(jìn)行豬瘟疫苗首免和二免，免疫劑量1頭份，疫苗某公司生產(chǎn)的豬瘟細(xì)胞苗.

1.2.4 抗體檢測(cè)方法和數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法制備血清，-25℃保存血清，為減低檢測(cè)批次間誤差，將試驗(yàn)采集的母豬血清和仔豬血清分為兩個(gè)批次集中檢測(cè)，所有血清檢測(cè)都用美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)的同一個(gè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析.

2 結(jié)果

2.1 母豬哺乳期豬瘟抗體的變化

對(duì)40頭同期分娩母豬哺乳前后豬瘟抗體水平檢測(cè)，結(jié)果如圖1所示，一個(gè)哺乳期內(nèi)，豬瘟抗體平均阻斷率由68.57%下降到60.98%，平均下降幅度為12.47%，哺乳前抗體離散度為30.06%，斷奶后抗體離散度為39.44%.經(jīng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，哺乳期抗體下降幅度個(gè)體間差異明顯，下降幅度在0.31%～63.75%，但出現(xiàn)了3頭母豬（9號(hào)、23號(hào)和26號(hào)）哺乳后抗體水平升高.從圖1可知，分娩當(dāng)天母豬抗體水平越高，哺乳期抗體水平下降幅度越小，分娩當(dāng)天母豬抗體阻斷率高于70%的23頭母豬中，抗體阻斷率下降幅度超過(guò)10%的占8.7%（2/23），而分娩當(dāng)天母豬抗體阻斷率低于70%的17頭母豬中，有58.82%（10/17）的抗體下降幅度超過(guò)10%.

2.2 母豬分娩日抗體和28日齡仔豬母源抗體的關(guān)系

對(duì)13頭母豬所產(chǎn)仔豬28日齡豬瘟抗體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)圖2. 28日齡窩仔豬平均母源抗體水平和母豬分娩日抗體水平呈正相關(guān).當(dāng)母豬分娩日抗體阻斷率高于85%時(shí)，28日齡窩仔豬平均抗體阻斷率大于60%，母豬抗體阻斷率在70%～85%間的，仔豬抗體阻斷率在40%～50%間，母豬抗體阻斷率低于70%，仔豬抗體阻斷率都低于40%.

圖1 母豬哺乳期豬瘟抗體的水平變化

圖2 母豬分娩日豬瘟抗體水平和28日齡窩的平均抗體水平

2.3 母源抗體水平對(duì)仔豬豬瘟疫苗免疫效果的影響

對(duì)28日齡母源抗體水平不同的6窩仔豬首免和二免后的抗體水平進(jìn)行監(jiān)測(cè)，結(jié)果如圖3所示.發(fā)現(xiàn)在28日齡首免后6窩仔豬母源抗體迅速下降，當(dāng)首免日母源抗體阻斷率低于45%的，仔豬母源抗體在首免后14日，即42日齡時(shí)，豬瘟抗體水平下降到最低，56日齡二免后抗體持續(xù)上升，二免疫后14天，即仔豬70日齡，窩平均抗體阻斷率達(dá)都為陽(yáng)性（阻斷率＞40%），至105日齡時(shí)，平均抗體阻斷率超過(guò)60%.28日齡母源抗體超過(guò)60%的兩窩仔豬首免后至56日齡，即首免后28天，抗體水平都呈下降趨勢(shì)，56日齡二免后抗體水平上升，但維持時(shí)間較短，70日齡后抗體水平就明顯開(kāi)始下降，至105日齡，窩仔豬平均抗體阻斷率處于陽(yáng)性臨界值.

圖3 母源抗體水平和免疫后抗體的水平變化

3 討論

3.1 母豬哺乳期豬瘟抗體水平的變化

在規(guī)模化豬場(chǎng)，母豬豬瘟疫苗免疫程序主要有兩種，一種稱為“普免”，即每年對(duì)所有經(jīng)產(chǎn)母豬進(jìn)行2～4次豬瘟疫苗免疫，另一種稱為跟胎免疫，即在母豬哺乳結(jié)束時(shí)對(duì)母豬進(jìn)行豬瘟疫苗接種.本試驗(yàn)選擇的豬場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬采用的跟胎免疫豬瘟疫苗方式，仔豬斷奶時(shí)母豬接種2頭份豬瘟細(xì)胞苗，從圖1檢測(cè)數(shù)據(jù)可知，該豬場(chǎng)母豬分娩當(dāng)天，即哺乳前母豬豬瘟抗體陽(yáng)性率（抗體阻斷率＞40%）雖然達(dá)到90%（36/40），但抗體水平不高，平均阻斷率為68.57%，抗體不均勻，離散度為30.06%，哺乳前母豬豬瘟抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)反應(yīng)了該豬場(chǎng)母豬免疫沒(méi)有達(dá)到理想效果，通過(guò)追溯發(fā)現(xiàn)，抗體陰性母豬主要為出現(xiàn)返情和流產(chǎn)母豬，沒(méi)有正常受胎和分娩后沒(méi)有進(jìn)行豬瘟疫苗補(bǔ)免，導(dǎo)致再次懷孕分娩時(shí)距離上次接種疫苗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，抗體水平較低，此外，本試驗(yàn)選擇的40頭分娩母豬中由6頭為頭胎母豬，這部分母豬在分娩時(shí)候豬瘟抗體水平也相對(duì)較低，這可能是導(dǎo)致平均抗體水平較低，抗體離散度較大主要原因.

試驗(yàn)中一個(gè)哺乳期結(jié)束后數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)表明，對(duì)于哺乳前抗體水平較高的母豬，經(jīng)過(guò)哺乳后抗體下降幅度較小，絕大多數(shù)哺乳前抗體阻斷率超過(guò)70%的母豬，抗體阻斷率下降幅度不超過(guò)10%，但哺乳前抗體阻斷率低于70%的母豬，哺乳對(duì)抗體影響較大，有超過(guò)50%的哺乳前抗體阻斷率低于70% 的母豬哺乳結(jié)束后抗體下降幅度超過(guò)10%.從試驗(yàn)獲得的數(shù)據(jù)可知，不論是哺乳前母豬抗體水平高還是低，哺乳后抗體下降幅度都存在個(gè)體間差異，經(jīng)過(guò)對(duì)每窩仔豬數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（文中為列舉數(shù)據(jù)），這種個(gè)體間差異和母豬哺乳仔豬數(shù)量沒(méi)有明顯關(guān)系，其原因還需進(jìn)一步研究.另外，在檢測(cè)的40頭母豬中，出現(xiàn)3頭母豬（編號(hào)為9號(hào)、23號(hào)和26號(hào)）斷奶時(shí)豬瘟抗體阻斷率上升（阻斷率分別上升9.7%，1.55%和25.4%），在排除了采血時(shí)血液嚴(yán)重溶血影響檢測(cè)結(jié)果后，分析認(rèn)為該豬場(chǎng)可能存在豬瘟隱形感染情況，特別是在沒(méi)有免疫豬瘟疫苗情況下，抗體水平率突然大幅度升高的26號(hào)母豬.

通過(guò)研究哺乳對(duì)母豬抗體水平影響對(duì)豬場(chǎng)選擇適合的免疫程序具有參考意義.哺乳對(duì)母豬豬瘟抗體影響的公開(kāi)研究報(bào)道較少，因條件所限，本試驗(yàn)跟蹤檢測(cè)的母豬數(shù)量也有限，僅為一個(gè)豬場(chǎng)的數(shù)據(jù)，只是依據(jù)該試驗(yàn)豬場(chǎng)的免疫程序和免疫劑量進(jìn)行了初步研究，這種變化和母豬胎次、免疫程序、疫苗類型、免疫劑量以及不同公司商品化疫苗間的關(guān)系還需進(jìn)一步系統(tǒng)開(kāi)展研究.

3.2 母豬哺乳前豬瘟抗體水平和28日齡仔豬母豬抗體間的關(guān)系

大量研究報(bào)道證明，新生仔豬母源抗體水平在吃初乳后1～2天即達(dá)到高峰，在1周后開(kāi)始下降［9］，為減少多次采血對(duì)新生仔豬造成的應(yīng)急影響，所以本試驗(yàn)沒(méi)有進(jìn)行斷奶前仔豬母源抗體消長(zhǎng)檢測(cè)，而是根據(jù)該試驗(yàn)豬場(chǎng)生產(chǎn)流程和免疫程序，在仔豬28日齡首次免疫豬瘟疫苗時(shí)間開(kāi)始進(jìn)行抗體檢測(cè)跟蹤（該豬場(chǎng)采用的25日齡斷奶，仔豬30日齡轉(zhuǎn)群）.從圖2的檢測(cè)數(shù)據(jù)分析可知，母豬哺乳前抗體水平和28日齡仔豬母源抗體呈正相關(guān)，當(dāng)母豬哺乳前抗體阻斷率高于70%時(shí)，28日齡母源抗體還為陽(yáng)性，當(dāng)母豬哺乳前抗體阻斷率低于70%時(shí)，28日齡仔豬母源抗體都為陰性.陳果亮在開(kāi)展母豬哺乳前抗體和35日齡仔豬母源抗體水平關(guān)系時(shí)也有類似結(jié)果，當(dāng)母豬抗體阻斷率高于70%時(shí)，35日齡仔豬母源抗體還為陽(yáng)性［9］，但本試驗(yàn)中，仔豬采用28日齡首免豬瘟疫苗，沒(méi)有檢測(cè)35日齡仔豬母源抗體.試驗(yàn)中仔豬個(gè)體間數(shù)據(jù)分析表明，即使是同一窩仔豬28日齡母源抗體個(gè)體之間也存在差異.

仔豬在首免豬瘟疫苗前主要依靠母源抗體提供保護(hù)，但仔豬母源抗體水平會(huì)影響疫苗免疫效果［10］，首免日齡應(yīng)選擇的母源抗體下降到陽(yáng)性臨界值，即阻斷率40%～50%時(shí)進(jìn)行豬瘟疫苗首免［11］.通過(guò)試驗(yàn)選擇豬場(chǎng)采用的豬瘟28日齡首次免疫豬瘟疫苗時(shí)母源抗體檢測(cè)結(jié)果可知，母豬哺乳前抗體對(duì)仔豬28日齡母源影響明顯，這和陳果量報(bào)道的母豬哺乳前抗體水平和35日齡仔豬母源抗體影響結(jié)果相一致［9］，因此，豬場(chǎng)要取得理想豬瘟抗體免疫效果，首先要對(duì)母豬豬瘟免疫程序進(jìn)行優(yōu)化，使得母豬抗體陽(yáng)性率高，均勻性好，離散率低，才能有利于仔豬免疫程序的設(shè)計(jì)和提高免疫效果.

3.3 母源抗體水平對(duì)仔豬免疫效果的影響

本研究中采用該豬場(chǎng)現(xiàn)有商品豬群豬瘟免疫程序，即28日齡和56日齡進(jìn)行豬瘟疫苗首免和二免，免疫劑量為1頭份傳代細(xì)胞苗，選擇的6窩仔豬28日齡首次免疫豬瘟疫苗當(dāng)天母源抗體處于不同水平，其中，抗體阻斷率低于30%（陰性）仔豬1窩，抗體阻斷率30%～40%仔豬2窩，抗體阻斷率40%～50%（陽(yáng)性，低抗體）仔豬1窩，抗體阻斷率大于60%和70%各仔豬各1窩.從圖3抗體變化圖可知，不論28日齡母源抗體處于陽(yáng)性還是陰性，免疫豬瘟疫苗后，在首免后7天和14天母源抗體都迅速下降，從首免后14天，即仔豬42日齡后，母源抗體低于50%的4窩仔豬豬瘟抗體水平出現(xiàn)上升，到56日齡二免時(shí)抗體阻斷率還沒(méi)有達(dá)到陽(yáng)性值水平，二免后抗體水平迅速上升，二免后2周，仔豬70日齡豬瘟抗體阻斷率都達(dá)到陽(yáng)性值，且抗體水平持續(xù)上升，至105日齡試驗(yàn)結(jié)束，抗體阻斷率都超過(guò)60%，部分超過(guò)70%.而母源抗體平均阻斷率超過(guò)60%的兩窩仔豬，首免后母源抗體迅速下降，至56日齡二面時(shí)抗體阻斷率低于30%，二免后抗體水平迅速上升，二免后2周，抗體阻斷率在50%左右，但抗體維持時(shí)間較短，至84日齡已經(jīng)開(kāi)始下降，105日齡時(shí)抗體阻斷率下降到陽(yáng)性臨界值附近.

研究認(rèn)為，豬瘟疫苗接種后中和抗體效價(jià)＞32時(shí)，對(duì)豬瘟病毒攻擊具有良好的保護(hù)效果［12］，而病毒中和試驗(yàn)操作復(fù)雜，試驗(yàn)要求高，并不適合臨床中大規(guī)模檢測(cè)評(píng)估. IDEXX 公司的豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的豬瘟病毒E2蛋白抗體水平和中和抗體具有良好的相關(guān)性，當(dāng)中和抗體效價(jià)為1∶32時(shí)相當(dāng)于該試劑盒阻斷率為50%［9］，所以，在養(yǎng)豬生產(chǎn)中，抗體阻斷率高于50%被用來(lái)評(píng)估豬場(chǎng)免疫合格與否臨界值.從該豬場(chǎng)檢測(cè)數(shù)據(jù)看，該豬場(chǎng)存在的主要風(fēng)險(xiǎn)是母豬豬瘟抗體水平離散度高，導(dǎo)致仔豬豬瘟疫苗首免時(shí)母源抗體水平高低不均勻.

本文研究結(jié)果也再次證明，規(guī)模化養(yǎng)豬豬場(chǎng)要想把豬瘟發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)降低，必須根據(jù)母源抗體消長(zhǎng)確定合理的首免疫時(shí)間，而要達(dá)到母源抗體消長(zhǎng)較為一致，首先要做好母豬群的科學(xué)免疫，使母豬群豬瘟抗體不但合格率達(dá)到較高水平，抗體均勻度也要較為一致，才有利于商品豬群的科學(xué)免疫.