陳嘉俊，佘秋民，趙冰，王希上

（深圳市寶安區(qū)松崗人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 深圳 518105）

慢性阻塞性肺部疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）簡(jiǎn)稱慢阻肺，是一組以持續(xù)氣流受限為主要特征的、能夠預(yù)防和醫(yī)治的肺部疾病，近年來(lái)研究證明慢阻肺已成為與高血壓和糖尿病“旗鼓相當(dāng)”的慢性疾病，包括慢阻肺在內(nèi)的慢性呼吸道疾病已成為繼心血管疾病、糖尿病之后的第三大死亡原因[1-3]。

肺功能檢查是確診COPD 及評(píng)估病情嚴(yán)重程度最重要的檢查，還可用于治療效果的評(píng)價(jià)，但肺功能檢查的效果與臨床醫(yī)生是否經(jīng)驗(yàn)豐富、患者是否積極配合等有很大關(guān)系，目前臨床上對(duì)COPD 進(jìn)行診斷、分級(jí)、評(píng)估和預(yù)后存在明顯的局限性，因此從血液中檢測(cè)COPD 特征性生物標(biāo)記物正逐步成為研究熱點(diǎn)[4]。 有研究表明，血清組織蛋白酶S（cat S）的表達(dá)水平可能與COPD 的發(fā)病和病情嚴(yán)重程度相關(guān)，血清cat S 可加快COPD 肺氣腫的產(chǎn)生與小氣道重塑，并且參與COPD 的發(fā)生發(fā)展[5]。

本研究旨在通過探討血清cat S 含量與COPD發(fā)病及嚴(yán)重程度的關(guān)系，評(píng)價(jià)其作為實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)在COPD 輔助診斷和臨床診治中的應(yīng)用價(jià)值。報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 COPD 組 選擇 2017 年 1 月到 2018 年 9 月在我院呼吸內(nèi)科門診部隨診的COPD 病患73 例（男 45 例，女 28 例），年齡在 55～84 歲；平均年齡為70±7.6 歲，滿足中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)《慢性阻塞性肺疾病診治指南(2013 年修訂版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)：除其他疾病外，在吸入支氣管擴(kuò)張劑1s 用力呼氣容積/用力肺活量%（FEV1/FVC）＜70%時(shí)，表明持續(xù)氣流受限。 再根據(jù)氣流受限的嚴(yán)重程度，將COPD 組分為Ⅰ～Ⅳ級(jí)，Ⅰ級(jí)有16 例，均為輕度慢阻肺， 數(shù)據(jù)顯示FEV1/FVC＜70%但FEV1≥80%預(yù)計(jì)值；Ⅱ級(jí)有26 例，均為中度慢阻肺，數(shù)據(jù)顯示50%≤FEV1＜80%預(yù)計(jì)值；Ⅲ級(jí)有24 例，均為重度慢阻肺，數(shù)據(jù)顯示30%≤FEV1＜50%預(yù)計(jì)值；Ⅳ級(jí)有7 例，均為極重度慢阻肺，數(shù)據(jù)顯示FEV1＜30%預(yù)計(jì)值，時(shí)常伴隨慢性呼吸衰竭癥狀。

1.1.2 對(duì)照組 設(shè)置 54 例，男 28 例，女 26 例，年齡在 51～80 歲，平均年齡為 65±10.2 歲，而且都為同一時(shí)期本院健康檢查中確定的基本健康者。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 收集2 組患者臨床一般資料，其中包含年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、是否吸煙等資料。

1.2.2 血清cat S BA-ELISA 檢測(cè)方法的建立 用cat S 單克隆抗體作為包被抗體，生物素標(biāo)記的cat S 多克隆抗體作為結(jié)合抗體，以辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈親合素(SA-HRP)為酶標(biāo)記物，TMB 作為底物，重組人cat S 作為校準(zhǔn)品，經(jīng)工藝和反應(yīng)條件優(yōu)化，建立血清cat S BA-ELISA 法。 cat S 單克隆抗體、兔抗 cat S 多克隆抗體、SA-HRP、 重組人 cat S、TMB 顯色底物均由深圳市安群生物工程有限公司供應(yīng)[15]。

1.2.3 臨床樣本測(cè)定 COPD 組和對(duì)照組空腹采集外周靜脈血3ml，分離血清，置-20℃凍存。 用上述方法檢測(cè)cat S 濃度。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 我們采用SPSS25 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，而計(jì)數(shù)資料使用數(shù)量或百分比表示。 只有兩個(gè)組合之間相比較就使用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，若是多個(gè)組合間比較使用方差分析； 采用多重線性回歸分析評(píng)估血清 cat S 與 COPD 關(guān)系； 用受試者工作特征（ROC）曲線判斷血清中cat S 水平對(duì)COPD 診斷價(jià)值。 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2 組一般資料比較 COPD 組和對(duì)照組進(jìn)行單因素分析，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）的因素有年齡和是否吸煙， 兩組間的性別與BMI 差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 見表1。

表1 研究對(duì)象一般資料

2.2 2 組血清cat S 水平比較 COPD 組血清cat S含量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見表2。

表2 COPD 組與對(duì)照組血清中cat S 水平比較

2.3 cat S 影響因素的多重線性回歸分析 以血清中cat S 水平作為因變量，COPD 分組、受試者的性別、年齡、是否吸煙作為自變量，采用多重線性回歸分析，經(jīng)逐步后退分析，對(duì)性別、年齡、吸煙因素進(jìn)行校正后，COPD 患者與對(duì)照組的血清中cat S水平有顯著差異（P＜0.01）。 見表3。

表3 cat S 影響因素的多重線性回歸分析

2.3 不同嚴(yán)重程度COPD 患者血清cat S 水平比較四組間血清cat S 水平存在顯著差異 （F=22.69，P＜0.01），其與 COPD 嚴(yán)重程度相關(guān)；cat S 水平：Ⅳ級(jí)＞Ⅲ級(jí)＞Ⅱ級(jí)＞Ⅰ級(jí)（P＜0.01），表明血清 cat S 水平與COPD 病情程度成正比。 見表4。

表4 不同COPD 分級(jí)患者血清中cat S 水平比較

2.4 ROC 曲線分析 血清 cat S 診斷 COPD 的ROC 曲線。曲線下面積(AUC)為0.905。當(dāng)切點(diǎn)設(shè)定為≥10.53μg/L，靈敏度76.9%，特異性92.6%。見圖1。

圖1 cat S 的 ROC 曲線

3 討論

慢阻肺（COPD）是呼吸系統(tǒng)的常見病和多發(fā)病，近年來(lái)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)[6]，慢阻肺的診斷多根據(jù)臨床表現(xiàn)，缺乏量化指標(biāo)，血清生物標(biāo)志物是一種定量指標(biāo)，可靠的血清標(biāo)志物有助于慢阻肺的診斷，指導(dǎo)治療和預(yù)后[7]。 目前，臨床上也對(duì)多種血清學(xué)指標(biāo)和COPD 的相關(guān)性進(jìn)行了研究，馬原、田玉恒考察了慢阻肺患者 HDAC2、IL-8、TNF-α水平變化[8]；范維、袁本林等探討了血清PCT、UA、CRP、WBC 和 Glu 等指標(biāo)的濃度變化對(duì) COPD 急性加重期的臨床意義[9，10]；劉芳[11]研究了血清 hs-CRP、IL-6、PCT 及脂聯(lián)素聯(lián)檢在 COPD 中的應(yīng)用價(jià)值；徐輝等[12]的研究也揭示了組織蛋白酶S 表達(dá)水平可能與COPD 病情有關(guān)。組織蛋白酶S（Cat S）是半胱氨酸蛋白酶的重要一員，是單鏈蛋白，由225個(gè)氨基酸組成，其相對(duì)分子量為24.8KDa，與多種疾病的產(chǎn)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[13]。 本研究采用生物素-親和素系統(tǒng)建立了cat S BA-ELISA 檢測(cè)方法，包被抗體采用cat S 單克隆抗體，結(jié)合抗體為生物素標(biāo)記的cat S 多克隆抗體，經(jīng)方法驗(yàn)證，靈敏度、特異性、準(zhǔn)確度等指標(biāo)均達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。 對(duì)比S.N.Kehlet[14]等的方法，本研究建立的BA-ELISA 法借助生物素-親和素放大效應(yīng)[15]在常規(guī)ELISA 技術(shù)的基礎(chǔ)上增加了一級(jí)放大，檢測(cè)靈敏度更高。

本研究對(duì)73 例COPD 患者和54 例對(duì)照組的血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)，COPD 組血清 cat S 為18.02±8.73μg/L，健康對(duì)照組 7.83±2.20μg/L，顯示COPD 患者血清中cat S 水平與正常對(duì)照組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-8.36，P＜0.01）；對(duì) cat S 影響因素進(jìn)行多重線性回歸分析，將COPD 分組（COPD組、對(duì)照組）、年齡、性別（男、女）、吸煙因素（吸煙、不吸煙） 等變量均納入初始的多變量線性回歸模型， 只有在逐步后退分析中P＜0.1 的變量被保留，由此產(chǎn)生的模型最終只保留了與血清cat S 相關(guān)的兩個(gè)變量COPD 分組和吸煙因素， 而且在對(duì)年齡、性別（男、女）、吸煙因素（吸煙、不吸煙）等變量進(jìn)行校正后，COPD 組的血清中cat S 水平仍較對(duì)照組明顯升高（標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù) B=0.449，P＜0.01），且吸煙者的cat S 水平也較不吸煙者高（標(biāo)準(zhǔn)化系數(shù)B=0.409，P＜0.01）；將Ⅰ～Ⅳ級(jí)不同程度 COPD 患者血清cat S 水平進(jìn)行比較，研究顯示Ⅰ～Ⅳ組不同嚴(yán)重程度的COPD 患者cat S 水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.69，P＜0.01）， 而隨著 COPD 病情加重，cat S水平也逐漸上升， 顯示cat S 水平與COPD 病情嚴(yán)重程度顯著正相關(guān)，這與李耕誼等[16]研究結(jié)果一致；經(jīng) ROC 曲線分析，AUC 為 0.905，以約登指數(shù)最大為原則，最佳臨界值 Cat S＞10.53μg/L 時(shí)，靈敏度為76.9%，特異度為92.6%。上述結(jié)果說(shuō)明血清組織蛋白酶S 項(xiàng)目可作為實(shí)驗(yàn)室對(duì)臨床檢測(cè)慢阻肺的一項(xiàng)有效指標(biāo)。

綜上所述，COPD 患者血清cat S 濃度具有異常升高表現(xiàn)，且病情程度越重，患者cat S 水平越高，可為COPD 患者臨床輔助診斷及療效監(jiān)測(cè)（評(píng)估）提供重要依據(jù)。