伍金倩 ，黃道連 ，崔經(jīng)和 ，高瑞琳 ，童輝純 ，鄧坤儀

（中山火炬開發(fā)區(qū)醫(yī)院1.檢驗科；2.兒科，廣東 中山 528437；3.南方醫(yī)科大學附屬中山市博愛醫(yī)院檢驗科，廣東 中山 528400）

百日咳是由百日咳桿菌引起的一種傳染性極強的呼吸道傳染病，其臨床表現(xiàn)可因年齡而有所不同[1]，典型的臨床表現(xiàn)為陣發(fā)性痙攣性咳嗽，咳嗽終末伴有雞鳴樣、吸氣性吼聲[2]。 據(jù)相關報道，近年來我國百日咳發(fā)病率有上升趨勢[3]，局部地區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)流行，主要感染對象為 1 歲內(nèi)的嬰幼兒[4，5]，0～3月齡的嬰兒由于免疫功能差，易并發(fā)重癥肺炎、呼吸衰竭、肺實變和百日咳腦病等嚴重并發(fā)癥危及生命[6]。 目前百日咳的實驗室檢測手段主要有血清學檢查、PCR 法和百日咳桿菌培養(yǎng)。 近年來相繼有學者在百日咳患兒外周血中發(fā)現(xiàn)細胞質缺乏、染色質凝集、有裂隙的成熟小淋巴細胞-裂隙淋巴細胞[7，8]。Meng Qing-hong 等[9]在給小鼠注射百日咳毒素后，小鼠外周血涂片、骨髓及脾臟涂片中觀察到有裂隙淋巴細胞的產(chǎn)生。 這就提示我們裂隙淋巴細胞有可能成為診斷百日咳的一個特異性指標。 本文主要通過比較百日咳確診組與非百日咳組外周血裂隙淋巴細胞計數(shù)結果，同時聯(lián)合白細胞數(shù)、淋巴細胞比例等指標，探討外周血涂片裂隙淋巴細胞對診斷百日咳的實用價值。

1 資料與方法

1.1 一般臨床資料 收集2019 年1 月-2019 年10月在中山市中山火炬開發(fā)區(qū)醫(yī)院和中山市博愛醫(yī)院就診的病例共89 例為實驗對象，其中符合百日咳診斷標準的患兒37 例設為實驗組（男性23 例，女性 14 例；＜1 歲 32 例，＞1 歲 5 例），隨機選取的非百日咳患兒52 例設為對照組（男性38 例，女性14例；＜1 歲 39 例，＞1 歲 13 例）。

1.2 試劑與儀器 白細胞分類計數(shù)儀為邁瑞全自動血液分析儀；試劑為邁瑞公司生產(chǎn)；外周血涂片染色液為珠海貝索生物技術有限公司生產(chǎn)。

1.3 檢驗方法

1.3.1 外周靜脈血檢測 抽取入選患兒靜脈血2ml于EDTA-K2 抗凝管中，白細胞分類計數(shù)嚴格按照邁瑞血液分析儀操作說明進行測試;外周血涂片操作按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[10]，計算100 個成熟淋巴細胞中裂隙淋巴細胞所占比例。

1.3.2 百日咳桿菌核酸檢測 采用美國疾病預防控制中心推薦方法[11]采集患兒鼻咽拭子標本，送廣州金域醫(yī)學檢驗中心進行檢測。

1.4 質量與控制 兩家單位的血常規(guī)分類與計數(shù)結果均參加且通過衛(wèi)生部室間質評， 并每天執(zhí)行室內(nèi)質控，實驗結果具有可比性；外周血涂片裂隙淋巴細胞由固定人員進行計數(shù)。

1.5 百日咳診斷標準 根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）2003[12]診斷標準，百日咳確診依據(jù)為：⑴沒有其他明顯原因的咳嗽≥2 周，并具有≥1 個下列癥狀：陣發(fā)性咳嗽，或吸氣性回聲，或咳嗽后嘔吐；⑵實驗室分離出百日咳桿菌， 或PCR 方法檢測到核酸序列，或雙份血清學檢測陽性。

1.6 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件進行分析處理， 計量資料以均數(shù)±標準差表示，計數(shù)資料以百分率表示。 兩組間計量資料比較采用Mann-Whitney U 檢驗，陽性率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細胞數(shù)、白細胞總數(shù)及淋巴細胞比例差異 百日咳組裂隙淋巴細胞計數(shù)、 白細胞數(shù)及淋巴細胞比例的均數(shù)分別為 6.27±0.70 %、27.90±2.65×109/L 和 71.35±2.03%，均高于非百日咳組 2.81±0.23 %、11.81±0.73×109/L和65.42±1.84%，根據(jù)Mann-Whitney U 檢驗分析，差異均有統(tǒng)計學意義。 見表1。

表1 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細胞數(shù)、白細胞數(shù)及淋巴細胞比例的均值比較

2.2 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細胞陽性率差異 若設裂隙淋巴細胞計數(shù)≥4%為檢出陽性，則在37 例百日咳確診病例中陽性例數(shù)為22 例，陽性率為59.5%，明顯高于非百日咳5.8%，陽性率差異具有統(tǒng)計學意義（χ2=30.851，P＜0.05）。 見表2。

表2 百日咳組與非百日咳組裂隙淋巴細胞陽性率差異比較

2.3 裂隙淋巴細胞計數(shù)單獨以及聯(lián)合白細胞數(shù)與淋巴細胞比例對百日咳的診斷效能 ROC 曲線分析結果顯示， 裂隙淋巴細胞數(shù)這一指標對診斷百日咳有較高的準確性。 若裂隙淋巴細胞計數(shù)取4%為臨界點，曲線下面積(AUC)最大，值為0.781，對應的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值分別為0.595、0.942、0.880 和 0.766。 若把裂隙淋巴細胞計數(shù)（≥4%）、白細胞數(shù)(≥19.5×109/L)及淋巴細胞比例（≥66.5 %）三項指標進行聯(lián)合診斷，則AUC為0.878，對應的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值分別為 0.784、0.904、0.853、0.855，準確性優(yōu)于裂隙淋巴細胞數(shù)單一指標以及白細胞數(shù)和淋巴細胞比例聯(lián)合指標。 見圖1、表3。

3 討論

圖1 裂隙淋巴細胞計數(shù)單獨以及聯(lián)合白細胞數(shù)與淋巴細胞比例診斷百日咳的ROC 曲線

表3 各項指標單獨或者聯(lián)合對百日咳的診斷效能

有文獻指出，百日咳早期發(fā)病時白細胞計數(shù)顯著升高，痙攣咳嗽期升高最多，以淋巴細胞為主[13]。在本實驗中，百日咳患兒的白細胞數(shù)和淋巴細胞比例明顯升高，均高于非百日咳患兒，與王琨[14]的研究相一致，也與此文獻描述相符。

另有研究發(fā)現(xiàn)，裂隙淋巴細胞不僅存在于百日咳感染患者，也存在于淋巴瘤患者[15]。 本次實驗亦發(fā)現(xiàn)，在某些非百日咳患兒外周血涂片中也可見少量裂隙淋巴細胞，這說明裂隙淋巴細胞并不為百日咳患者所特有。 但本實驗結果同時顯示，百日咳組的裂隙淋巴細胞平均值明顯多于非百日咳組。 若設裂隙淋巴細胞計數(shù)≥4%為檢出陽性， 百日咳組的陽性率也明顯高于非百日咳組。 因此，盡管裂隙淋巴細胞不能作為百日咳的特異性指標，但仍有重要意義，臨床上也常以細胞形態(tài)學檢測結果聯(lián)合血液指標，為疾病的診斷和鑒別診斷提供線索[16]。

為了解裂隙淋巴細胞計數(shù)單一指標和聯(lián)合指標對百日咳的診斷效能， 本實驗進行了ROC 曲線分析，根據(jù)結果顯示，當裂隙淋巴細胞計數(shù)取4%為臨界點時，診斷百日咳的準確性最高，其診斷靈敏度、特異度分別為0.595 和0.942。若把裂隙淋巴細胞計數(shù)、 白細胞數(shù)及淋巴細胞比例三項指標進行聯(lián)合診斷，則準確性優(yōu)于裂隙淋巴細胞計數(shù)單一指標以及白細胞數(shù)和淋巴細胞比例聯(lián)合指標。 故臨床在診斷百日咳時，根據(jù)患者臨床癥狀，同時結合裂隙淋巴細胞計數(shù)以及白細胞數(shù)、淋巴細胞比例，會更加準確可靠。

百日咳患兒的臨床癥狀常常不典型，容易漏診[17]。傳統(tǒng)的培養(yǎng)周期長，陽性率低；PCR 方法技術要求嚴格，成本高；血清學檢測方法存在疫苗接種和感染均可出現(xiàn)陽性導致結果難以區(qū)分;而外周血裂隙淋巴細胞計數(shù)所需設備簡單，操作簡易快速，可成為臨床診斷百日咳的輔助指標，但要求技術人員熟練掌握細胞形態(tài)學，且對于裂隙淋巴細胞的診斷百分比，也還需要大量的實驗來研究和驗證。

綜上所述，裂隙淋巴細胞計數(shù)對于百日咳的診斷具有較高的靈敏度和特異性，可為臨床診斷百日咳提供線索，減少臨床對百日咳的漏診率。 該檢測方法簡便易行，值得在基層醫(yī)院推廣。