吳君金 劉遙 廖述純

摘要：毛發(fā)毒品分析在法庭毒品分析領(lǐng)域有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，已得到了法庭的承認(rèn)、采納。隨著技術(shù)規(guī)范《SF/Z JD0107025—2018》的應(yīng)用，使毛發(fā)分析已成為毒品檢測(cè)的常規(guī)操作。本文對(duì)該技術(shù)規(guī)范中的分析程序、分析結(jié)果進(jìn)行了評(píng)判與論述，對(duì)毛發(fā)分析操作過(guò)程中的部分關(guān)鍵步驟進(jìn)行了試驗(yàn)改進(jìn)與理論探究，對(duì)樣本處理方法進(jìn)行了優(yōu)化與補(bǔ)充，使方法精密度明顯提高，為毛發(fā)中毒品定量分析提供了基礎(chǔ)保證。

關(guān)鍵詞：毛發(fā);毒品分析;技術(shù)規(guī)范;添加樣品;色譜峰

1前言

毛發(fā)中毒品分析相較其他生物檢材，無(wú)論取材簡(jiǎn)便性與穩(wěn)定性，還是吸毒信息量與長(zhǎng)程性，比常見(jiàn)血液、尿液等生物檢材具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì)[1]。我國(guó)對(duì)毛發(fā)中毒品分析研究蓬勃發(fā)展，隨著系列技術(shù)規(guī)范、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施與應(yīng)用，近年來(lái)毛發(fā)中毒品分析已成為司法判定吸毒的重要信報(bào)，為我國(guó)當(dāng)今禁毒工作提供了巨大便利與貢獻(xiàn)[2]。

《毛發(fā)中15種毒品及代謝物的液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法》（SF/Z JD0107025—2018）技術(shù)規(guī)范，為我國(guó)毛發(fā)中毒品分析廣泛應(yīng)用提供了重要技術(shù)支持。該規(guī)范的推出為現(xiàn)在吸毒判定與禁毒戒毒提供了法定證據(jù)。當(dāng)然，因毛發(fā)結(jié)構(gòu)的特殊性與毒品性質(zhì)的差異性，該技術(shù)規(guī)范可能還需更進(jìn)一步的補(bǔ)充，為使該法應(yīng)用于毛發(fā)中毒品的定量分析，還需進(jìn)一步完善，以提高方法的精密度。

本文在該技術(shù)規(guī)范的司法鑒定應(yīng)用中，就發(fā)現(xiàn)的疑問(wèn)進(jìn)行了總結(jié)，并對(duì)部分重要步驟進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充，同時(shí)對(duì)理論依據(jù)進(jìn)行了初步探討;對(duì)部分步驟提出了改進(jìn)與完善建議;使該方法更具科學(xué)性與適用性，提高了方法精密度，為毛中毒品定量分析提供了基礎(chǔ)條件。

2《SF/Z JD0107025—2018》技術(shù)規(guī)范應(yīng)用中的問(wèn)題

2.1? 11種毒品添加標(biāo)準(zhǔn)品的離子峰數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范要求，每次毛發(fā)樣本檢測(cè)時(shí)，需同時(shí)進(jìn)行添加標(biāo)準(zhǔn)品與空白樣品，以便對(duì)照分析。在儀器正常與參數(shù)不變的情況，對(duì)某月添加標(biāo)準(zhǔn)品離子峰數(shù)據(jù)隨機(jī)統(tǒng)計(jì)，見(jiàn)表1與表2。

由表2可知，R/h比于0.48～1.38之間，RSD于15%～38%之間。數(shù)據(jù)表明，按技術(shù)規(guī)范對(duì)添加標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定，峰信號(hào)的再現(xiàn)性與精密度較差，按3δ原理[3]，現(xiàn)方法不能應(yīng)用于定量分析，對(duì)定性分析的檢出限LOD附近值的判定也會(huì)造成較大干擾。

2.2? 再現(xiàn)性較差原因探究與試驗(yàn)

對(duì)毛發(fā)樣品處理液進(jìn)行重現(xiàn)性測(cè)定，以考察儀器的重現(xiàn)性與精密度，數(shù)據(jù)如表3。

由表3可知，對(duì)樣品重復(fù)測(cè)定，△h/h于0%～10%之間，儀器測(cè)定重現(xiàn)性較好，儀器條件能滿(mǎn)足毛發(fā)中毒品定性分析檢出限LOD的判定，也具備痕量定量分析的儀器要求;表1峰值重現(xiàn)性較差的主要原因，不是因儀器精密度影響，而是由測(cè)定過(guò)程中的步驟影響造成的。

2.2? 影響添加樣品精密度原因初步探究

2.2.1????? 樣品處理液上機(jī)測(cè)定前濾膜過(guò)濾的必要性

按技術(shù)規(guī)范對(duì)添加樣品處理分析中，因?yàn)槊l(fā)粉末較細(xì)而輕，在分析過(guò)程的移取上清液步驟時(shí)，偶爾會(huì)帶入毛發(fā)細(xì)粉末;同時(shí)，在吹干與復(fù)溶等過(guò)程中不可避免會(huì)偶有不易見(jiàn)的外來(lái)微小粒狀物，這些小粒狀物不僅影響儀器測(cè)定穩(wěn)定性與使用壽命，還會(huì)對(duì)儀器關(guān)鍵部件造成致命的損傷。因此，對(duì)樣品處理液上機(jī)前的濾膜過(guò)濾，是LC-MS/MS測(cè)定前的必要步驟，也是在相關(guān)國(guó)標(biāo)、行標(biāo)中多見(jiàn)采用的常規(guī)操作。綜合所有因素，本文認(rèn)為，應(yīng)增加樣品處理液上機(jī)前的濾膜過(guò)濾步驟。

2.2.2????? 樣品精密度原因初步探究

結(jié)合《SF/Z JD0107025—2018》技術(shù)規(guī)范與實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)，添加樣品處理步驟可分解為：

（1）取空白毛發(fā)樣品20mg，準(zhǔn)確添加100μL毒品混合標(biāo)準(zhǔn)液，使添加樣品中毒品量與判斷陽(yáng)性的檢出限值一致，加入900μL內(nèi)標(biāo)甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作液，使浸出液總體積為1000μL，冰浴超聲30min;（2）離心分離，移取上清液，于60℃水浴空氣流下吹干;殘留物用100？L甲醇復(fù)溶;（3）將復(fù)溶液過(guò)針式濾膜于進(jìn)樣瓶中。

步驟（1）的主要目的：內(nèi)標(biāo)主要是驗(yàn)證前處理過(guò)程和儀器可信性、可靠性;空白加標(biāo)準(zhǔn)品平行測(cè)定是便于排除未知樣本分析過(guò)程中帶來(lái)的過(guò)程中部分系統(tǒng)誤差;冰浴超聲是對(duì)毛發(fā)中毒品的浸出。從理論分析，步驟（1）對(duì)未知樣本中毒品測(cè)定屬關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但對(duì)添加樣品精密度影響較小，因?yàn)槎酒吩谠搶?shí)驗(yàn)步驟條件下基本不會(huì)分解或揮發(fā)，也不存在浸出率影響。

綜上所述，影響添加樣品峰值精密度的主要原因應(yīng)在步驟（2）、步驟（3）的移取、吹干、復(fù)溶與過(guò)濾環(huán)節(jié)中。

3???? 影響添加樣品精密度原因試驗(yàn)與討論

3.1? 濾膜選擇與直接測(cè)對(duì)照試驗(yàn)

分別準(zhǔn)確移取50μL毒品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液于系列離心管中，分別加50？L甲醇，渦旋混勻;方法1為直接置于進(jìn)樣瓶，方法2、3、4用不同材質(zhì)過(guò)濾膜過(guò)濾，上機(jī)測(cè)定，數(shù)據(jù)及比較見(jiàn)表4。

由表4可知，用尼龍材膜過(guò)濾，色譜信號(hào)明顯減弱，其中苯丙胺類(lèi)、苯甲酰愛(ài)康寧、單乙酰嗎啡非常明顯;用PTFE材與PVDF材濾頭過(guò)濾，峰高比在于0.92～1.09之間，峰信號(hào)無(wú)明顯變化。尼龍膜對(duì)部分毒品吸附明顯，PTFE材與PVDF濾頭對(duì)上述毒品基本不吸附。

尼龍材膜對(duì)毒品的吸附機(jī)理，少見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本文認(rèn)為，尼龍屬酰胺類(lèi)聚合物，從有機(jī)物的相似相溶相吸原理[4]，尼龍材膜可能對(duì)有胺基的苯胺類(lèi)、有?；亩酒肺絿?yán)重。因此，選用濾頭時(shí)，絕不能選用最常用的尼龍膜材濾頭，而選用PTFE材與PVDF材膜濾頭均可。

3.2? 氮?dú)獯蹈蓷l件與復(fù)溶的影響試驗(yàn)

按下列方法分別對(duì)空白添加樣品進(jìn)行處理。方法1：按技術(shù)規(guī)范，離心分離后，取上清液，直接濾膜過(guò)濾分析（注因未吹干，毒品濃度理論是方法2的1/10）;方法2同技術(shù)規(guī)范;方法3僅氮?dú)獯蹈蓵r(shí)不進(jìn)行水浴加熱，其它同技術(shù)規(guī)范。

由表5可知，在按技術(shù)規(guī)范進(jìn)行移取、吹干、復(fù)溶、過(guò)濾測(cè)定，與直接測(cè)定比較，損失率達(dá)25%～88%;水浴熱吹與常溫冷吹基本一致，基本不減少待測(cè)毒品損失率。

關(guān)于毒品的揮發(fā)性少見(jiàn)報(bào)導(dǎo)，但常見(jiàn)的非甲烷烴類(lèi)有機(jī)物、醇酮醚類(lèi)有機(jī)物、含氯氮硫類(lèi)有機(jī)物等，都屬于揮發(fā)性有機(jī)物[5]。而上述毒品多數(shù)屬于此類(lèi)有機(jī)物，應(yīng)歸屬于揮發(fā)性有機(jī)物;同時(shí)上述毒品中，阿片類(lèi)毒品多見(jiàn)吸食，正因其揮發(fā)性;而苯丙胺類(lèi)，主結(jié)構(gòu)有苯基與胺基，且分子量相對(duì)較小，應(yīng)也屬較易揮發(fā)的機(jī)物。

對(duì)屬具有一定揮發(fā)性的有機(jī)物，不應(yīng)采用揮發(fā)易揮發(fā)的溶劑進(jìn)行定量濃縮。本文認(rèn)為：技術(shù)規(guī)范中的氮?dú)獯蹈蓮?fù)溶，主要目的是濃縮與定容。因?yàn)榈獨(dú)獯蹈蛇^(guò)程中毒品損失率大，對(duì)定量分析影響較大，對(duì)定性分析也必有一定影響。本文建議取消該試驗(yàn)步驟，改為混勻離心后直接過(guò)濾測(cè)定。雖待測(cè)毒品濃度會(huì)有一定程度降低，但現(xiàn)行儀器的靈敏度多見(jiàn)較高，對(duì)規(guī)范中11種毒品的檢出限量能滿(mǎn)足要求。同時(shí)也可通過(guò)適當(dāng)增加稱(chēng)樣量、減少浸出液、增大進(jìn)樣量等方式提高檢測(cè)響應(yīng)值。

4???? 樣品前處理改進(jìn)總結(jié)

綜述上述試驗(yàn)與結(jié)論，本人建議將技術(shù)規(guī)范中6.1.1與6.1.3進(jìn)行修改完善，其它內(nèi)容與條款不變，6.1.1與6.1.3修改為：

6.1.1案件樣品

毛發(fā)樣品依次用適量的水和丙酮振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，置冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀。

稱(chēng)取粉末20mg，加入1000μL內(nèi)標(biāo)甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作液（甲氧那明1ng/mL），冰浴超聲30min，取出，混勻，離心分離沉淀，用一次針頭移取部分上清液，用PTFE材或PVDF材濾頭過(guò)濾，濾液供儀器分析。

6.1.3添加樣品

取空白毛發(fā)樣品20mg，添加案件樣品中出現(xiàn)的可疑目標(biāo)物對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)工作液適量，補(bǔ)加內(nèi)標(biāo)甲氧那明標(biāo)準(zhǔn)工作液（甲氧那明1ng/mL），使加入液總體積為1000μL，余下同6.1.1，與案件樣品平行提取操作。

5???? 改進(jìn)前后精密度對(duì)照試驗(yàn)

使用改進(jìn)前和改進(jìn)后方法對(duì)添加樣品進(jìn)行精密度試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6與表7。

試驗(yàn)表明，表6改進(jìn)前的RSD在12%～25%，表7改進(jìn)后RSD在4%～10%，精密度有明顯提高;相應(yīng)待測(cè)毒品峰信號(hào)明顯增強(qiáng)。

6結(jié)論與展望

經(jīng)過(guò)本文試驗(yàn)與探索，并對(duì)技術(shù)規(guī)范方法進(jìn)行改進(jìn)與完善，方法科學(xué)性更加嚴(yán)謹(jǐn)，可操作與適用性更強(qiáng)，測(cè)定精密度明顯改善，為毛發(fā)中毒品的定量分析提供了基礎(chǔ)條件。當(dāng)然，對(duì)本規(guī)范應(yīng)用于定量分析方面，案件樣品的浸出方法與條件還有待進(jìn)一步試驗(yàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃國(guó)斌，金培海.毛發(fā)中新型毒品檢驗(yàn)分析.法制博覽，2017，（01）：149～150.

[2]苗翠英，吳洋.毛發(fā)中毒品分析.刑事技術(shù)，2006，（1）：32～35.

[3]許書(shū)道.化學(xué)分析方法評(píng)價(jià).化學(xué)分析計(jì)量，2002，011（1）：30～31.

[4] 刑其毅，裴偉偉等編著.基礎(chǔ)有機(jī)化學(xué)（第4版）.北京大學(xué)出版社，352～355.

[5] 高占先主編.有機(jī)化學(xué)（第3版）.高等教育出版社，232～235.作者簡(jiǎn)介：

吳君金（1983-）浙江中醫(yī)藥大學(xué)，碩士研究生，初級(jí)藥師，研究方向：主要從事法醫(yī)毒物分析.

通訊作者：廖述純（1970-）中南大學(xué)分析化學(xué)專(zhuān)業(yè)畢業(yè)，碩士研究生，

高級(jí)工程師，研究方向：主要從事法醫(yī)毒物分析.