徐翠玲 汪方園 銀廣悅 錢成榮 劉繼勇

carcinoma

乙型肝炎病毒在全世界范圍內(nèi)流行，其感染嚴(yán)重威脅人類健康。HBV感染引起肝損傷慢性化的確切機(jī)制尚未完全闡明。目前多數(shù)研究認(rèn)為，宿主免疫調(diào)控紊亂是導(dǎo)致HBV感染慢性化的重要原因[1-3]?？弓h(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies，anti-CCP)是類風(fēng)濕的一項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)，但近年來發(fā)現(xiàn)anti-CCP也存在于非RA的患者血清中[4]，且其檢測(cè)多為定性檢測(cè)，而定量檢測(cè)報(bào)道則少見[5]。本研究旨在通過觀察HBV感染相關(guān)慢性肝病不同階段anti-CCP水平變化情況，分析其與HBV感染慢性肝損傷之間的關(guān)系以及對(duì)肝免疫損傷的預(yù)測(cè)價(jià)值，為臨床治療和預(yù)后研究提供免疫學(xué)指標(biāo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年5月至2018年1月在我院就診的慢性乙型病毒性肝炎患者89例為慢乙肝組、乙型病毒性肝炎肝硬化患者73例為肝硬化組、原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者32例為肝癌組和30例健康體檢者為對(duì)照組。慢性乙型病毒性肝炎和乙肝肝硬化患者診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[6]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，原發(fā)性肝癌患者診斷符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范(2017年版)》[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)?；颊咴?個(gè)月內(nèi)均未經(jīng)免疫調(diào)節(jié)劑及抗病毒治療，并排除合并其他肝炎病毒感染、酒精性肝炎等非病毒性肝炎、免疫系統(tǒng)疾病及其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。4組一般資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試對(duì)象均簽署知情同意書。見表1。

表1 4組一般資料比較

1.2 方法 采集受試者空腹時(shí)肘靜脈血樣本5 ml，入離心機(jī)，以4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心5 min，分離獲取血清，并在-70℃條件下保存，且開展anti-CCP定量檢測(cè)、肝功能、腫瘤標(biāo)志物、凝血功能的檢查，其中，檢測(cè)主要儀器及試劑：(1)anti-CCP定量檢測(cè)：采用美國BEKMAN COULTER AU5800全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，試劑采用寧波美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)的抗環(huán)瓜氨酸肽抗體檢測(cè)試劑盒(膠乳增強(qiáng)免疫比濁法)進(jìn)行檢測(cè)。(2)肝功能，檢測(cè)，檢測(cè)儀器與anti-CCP定量檢測(cè)相同，統(tǒng)計(jì)指標(biāo)：①天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)；②谷氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)；③總膽紅素(TBIL)；④直接膽紅素(DBIL)。(3)腫瘤標(biāo)志物，采用羅氏Cobas E601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀，并聯(lián)合配套試劑以酶聯(lián)免疫分析法進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)：①糖抗原125(CA125)；②癌胚抗原(CEA)；③甲胎蛋白-L3(AFP-L3)。在試驗(yàn)過程中，所有檢測(cè)項(xiàng)目均嚴(yán)格按照儀器操作規(guī)程和試劑盒說明書要求進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 4組anti-CCP水平比較 慢性乙肝組、肝硬化組及肝癌組anti-CCP水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；慢性乙肝組、肝癌組均低于肝硬化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；慢乙肝組anti-CCP水平與肝癌組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 4組anti-CCP濃度水平比較

2.2 4組肝功能水平比較 慢乙肝組、肝硬化組、肝癌組AST、ALT、TBIL、DBIL水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；慢乙肝組、肝硬化組AST高于肝癌組(P<0.05)；慢乙肝組TBIL、DBIL低于肝硬化組及肝癌組(P<0.05)；肝硬化組AST、TBIL、DBIL水平高于肝癌組(P<0.05)，而ALT水平低于肝癌組(P<0.05)。見表3。

2.3 4組腫瘤標(biāo)志物比較 慢乙肝組、肝硬化組、肝癌組、對(duì)照組AFP-L3水平、CA199水平，組間兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；慢乙肝、肝硬化組、肝癌組CA125水平均高于對(duì)照組(P<0.05)；慢乙肝CA125水平低于肝癌組、肝硬化組(P<0.05)；肝硬化組CA125水平與肝癌組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

3 討論

anti-CCP系環(huán)狀聚絲蛋白多肽片段。Schellekens等[8]依據(jù)絲集蛋白 (Filaggrin)的CDNA序列合成由21個(gè)氨基酸殘基組成的環(huán)瓜氨酸肽，該多肽即為抗CCP抗體的靶抗原。anti-ccp在2010年被美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)列為RA的分類診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[9]，但也有研究發(fā)現(xiàn)，HBV感染可以引起抗 CCP抗體的升高，其產(chǎn)生機(jī)制可能與HBV感染誘發(fā)炎癥，肝細(xì)胞被破壞，蛋白肽段的瓜氨酸化有關(guān)[10]。

表3 4組肝功能水平比較

表4 4組腫瘤標(biāo)志物比較

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，慢性乙型肝炎組anti-CCP水平高于對(duì)照組，其原因可能是由于在慢性乙型病毒性肝炎患者中，HBV感染不直接引起肝細(xì)胞病變，而與感染后引起機(jī)體的免疫應(yīng)答狀態(tài)有關(guān)[11,12]，機(jī)體的免疫應(yīng)答致肝細(xì)胞損傷,HBV在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖，肝細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，肝細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)成分釋放,血清中形成針對(duì)瓜氨酸化的蛋白肽段的抗體，因此乙肝病毒性肝炎患者中anti-CCP水平存在中度表達(dá)。本次研究涉及肝病的患者體內(nèi)存在免疫應(yīng)答、聚集炎性反應(yīng)情況，其中，免疫應(yīng)答與細(xì)胞免疫關(guān)系密切，而細(xì)胞免疫主要是Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，乙肝感染不同階段，患者免疫水平也隨之下降[13]。另外，腫瘤標(biāo)志物也是反映慢乙肝、肝癌及肝硬化肝功能的重要指標(biāo)[14]。

本研究發(fā)現(xiàn)，慢性乙肝組CCP濃度水平低于乙肝肝硬化組，提示隨著乙肝病程進(jìn)展，CCP濃度水平隨之升高，這一點(diǎn)與本研究中乙型肝炎肝硬化組患者的anti-CCP水平顯著高于其他各組的結(jié)果相一致。隨著CCP濃度升高，炎癥程度增加，乙肝病程隨之進(jìn)展，隨著肝細(xì)胞炎癥程度增加，肝臟損傷程度隨之提升，anti-CCP水平也增高，同時(shí)我們認(rèn)為存在隨著自身免疫反應(yīng)的加劇，乙肝病程亦隨之進(jìn)展的過程，兩者間存在相互促進(jìn)的關(guān)系。其機(jī)制可能由于在乙肝肝硬化患者中，由于HBV在肝細(xì)胞內(nèi)的持續(xù)慢性感染及復(fù)制，肝細(xì)胞的破壞不斷進(jìn)行，肝細(xì)胞炎癥增加，肝臟內(nèi)皮細(xì)胞逐漸壞死，肝小葉的正常結(jié)構(gòu)被破壞，一方面隨著炎癥程度增加，血清中產(chǎn)生的針對(duì)瓜氨酸化的蛋白肽段的抗體濃度增加，另一方面，與肝硬化時(shí)肝小葉的正常結(jié)構(gòu)被破壞，肝代謝功能下降，機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的抗體累積增加有關(guān)，因此，在肝硬化患者中，anti-CCP水平存在較高表達(dá)。本研究中，慢乙肝、肝硬化及肝癌患者AST、ALT、TBIL、DBiL水平均與健康對(duì)照組間差異均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本研究還發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者anti-CCP的水平低于肝硬化組和慢性乙肝組，但與肝硬化組有統(tǒng)計(jì)學(xué)性差異，而與慢乙肝組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其原因由于HBV對(duì)肝細(xì)胞的長期反復(fù)損害，HBV DNA整合到肝細(xì)胞DNA引起突變，從而引起肝細(xì)胞的惡變[15,16]，導(dǎo)致原發(fā)性肝癌的發(fā)生，而HBV復(fù)制所需的生物學(xué)環(huán)境日趨惡化，機(jī)體免疫應(yīng)答下降，產(chǎn)生的抗體隨之下降。因此，對(duì)于未使用免疫調(diào)節(jié)劑且持續(xù)anti-CCP高水平表達(dá)的肝硬化患者，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)anti-CCP水平如呈下降趨勢(shì)時(shí)是否可以提示患者有惡變的可能性，這有待我們進(jìn)一步去研究。

綜上所述，anti-CCP的水平與HBV感染后機(jī)體肝免疫損傷以及機(jī)體的免疫狀態(tài)有關(guān)，對(duì)臨床了解肝臟的損傷程度，觀察療效，判斷預(yù)后具有重要意義。

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