鄭曉陽 黃文峰 何鳳蘭 劉麗燕

【摘?要】?目的：建立黎辣根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采集來自陽江的7批次黎辣根飲片，參考《中藥大辭典》（下冊）和《中華人民共和國藥典》（一部）等，對(duì)黎辣根的質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究，包括植物形態(tài)與藥材性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別和含量測定的研究。結(jié)果：7批次黎辣根樣品的植物形態(tài)與藥材性狀特征相似，顯微特征明顯;薄層色譜斑點(diǎn)清晰、分離度好;高效液相含量測定專屬性強(qiáng)，分離度和重復(fù)性好。結(jié)論：本研究方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，創(chuàng)新性強(qiáng)，可用于黎辣根的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】?黎辣根;顯微鑒別;薄層色譜鑒別;含量測定

【中圖分類號(hào)】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A?【文章編號(hào)】1007-8517（2020）17-0045-04

Abstract：objective To establish the quality standards of li horseradish.Methods Collected from 7 batches in yangjiang horseradish yinpian， refer to the dictionary of Chinese medicine and the law of the Peoples Republic of China pharmacopoeia （book1&book 2） （a）， the quality control method for study of li horseradish， including plant morphology and medicinal properties， microscopic identification， TLC identification and content determination of research.Results In 7 batches of horseradish similar samples of plants with medicinal properties characteristics， microscopic characteristics of the obvious; TLC spots were clear， good separating degree; High performance liquid content determination of specific， separating degree and repeatability.Conclusion This study method is accurate and reliable， good repeatability， innovative is strong， can be used for quality control of li horseradish.

Key?words：Li horseradish;Microscopic Identification;TLC Identification;Content Determination

黎辣根Rhamnus crenata Sieb.et Zucc.是鼠李科鼠李屬植物長葉凍綠的根，又名鈍葉鼠李根[1] 、長葉鼠李根[1] 、苦李根、黎羅根[2]，黎辣根具有清熱利濕、殺蟲解毒的作用，臨床上治療疥瘡疔瘡、癩癬、麻風(fēng)、蛔蟲病等癥狀。有文獻(xiàn)收載其植物形態(tài)圖[2]，但沒有其藥材性狀、飲片性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別以及含量測定記載。本研究對(duì)黎辣根進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1?儀器與材料

1.1?儀器?DIONEX UltiMate 3000型高效液相色譜儀，水浴鍋，電子天平及各種玻璃儀器。

1.2?材料?黎辣根飲片購買于陽江市江城區(qū)杏春藥店，取其干燥根粉碎（過40目藥典篩），測得其水分為12.5%。

2?植物形態(tài)與藥材性狀

2.1?植物形態(tài)[1]?為落葉灌木或小喬木。高7m。幼枝帶紅色，被毛，后脫落。葉互生，葉柄長4～12cm，被密柔毛。倒卵狀橢圓形、披針狀橢圓形或倒卵形，長4～14cm，寬2～5cm，先端漸尖或短急尖，基部楔形或鈍，邊緣具鋸齒，上面無毛，下面被柔毛或沿脈被柔毛。聚傘花序腋生，總花梗長4～15mm，被柔毛;花單性，異株，淡綠色或紫色;花萼5裂，裂片三角形與萼管等長，外面有微毛;花瓣5，近圓形，先端2裂;雄蕊5，與花瓣等長;子房上位，球形，無毛，3室，花柱不分裂，柱頭不明顯。核果球形，成熟時(shí)黑色或紫黑色，長5～6mm。種子青灰色，無溝?；ㄆ?～8月，果期8～10月。見圖a 植物形態(tài)圖（幼苗）和圖b 植物形態(tài)圖。

2.2?藥材性狀?外表面棕褐色或黃褐色。有棕皺紋及橫裂紋。斷面皮部粗糙，黃褐色;木部黃色或淡黃色。質(zhì)堅(jiān)硬，不易折斷。見圖c黎辣根藥材和圖d 黎辣根飲片。

3?顯微鑒別

3.1?根粉末顯微特征?石細(xì)胞長梭形，密集成團(tuán)，胞腔狹小，紋孔明顯，見圖e;紅棕色塊類圓形，重疊集結(jié)成團(tuán)狀，見圖f。

3.2?根橫切面顯微特征?根皮部含有較多紅棕色團(tuán)塊，見圖f;木質(zhì)部細(xì)胞類圓形，放射狀排列，髓部不明顯，見圖g。

3.3?莖粉末顯微特征?纖維成束，繩狀，纖維束上嵌有密集的草酸鈣方晶，形成晶纖維，見圖h;石細(xì)胞成群，壁厚，胞腔細(xì)小，紋孔明顯，見圖i。

4?薄層鑒別

取本品粉末2g，加甲醇60mL，40℃加熱回流45min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5mol/L硫酸溶液10mL，水浴加熱30min，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次10mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，即得供試品溶液。分別取大黃素對(duì)照品、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（通則0502）[3]試驗(yàn)，分別吸取供試品溶液5μL、大黃素對(duì)照品和大黃素甲醚對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下觀察，結(jié)果見圖j。另置于氨蒸氣中熏后，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色，結(jié)果見圖k。

5?含量測定

5.1?色譜條件?與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20）為流動(dòng)相，流速：lmL/min;檢測波長為254nm;柱溫：30℃。

5.2?對(duì)照品溶液的制備?分別精密稱取大黃素10.63mg，加甲醇溶解，使配成每1mL含大黃素20μg的對(duì)照品溶液，即得。

5.3?供試品溶液的制備?精密稱取3批粉碎過40目藥典篩的黎辣根粉末各2g，分別加入甲醇20mL，40℃水浴加熱回流提取45min，過濾，濾液蒸干，用甲醇適量使溶解，移至10mL容量瓶，過0.45μL微孔濾膜，即得。

5.4?線性關(guān)系?考察分別精密吸取同一對(duì)照品溶液8.504μg/mL、17.008μg/mL、25.512μg/mL、34.016μg/mL、42.520μg/mL，注入液相色譜儀中，測定峰面積。以大黃素對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=3.7079X，r=0.999（n=5）。表明大黃素對(duì)照品線性關(guān)系良好，結(jié)果見表2、圖L。

5.5?精密度試驗(yàn)?取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測定大黃素峰面積，測定結(jié)果RSD=0.62%，表明該方法精密度良好，結(jié)果見表3。

5.6?重復(fù)性試?驗(yàn)取同一批號(hào)供試品，按供試品溶液制備方法制備6份供試液。按照正文含量測定方法，測定每份樣品中大黃素的含量，結(jié)果RSD=1.71%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好，結(jié)果見表4。

取精密度試驗(yàn)的對(duì)照品測得的結(jié)果參與重復(fù)性試驗(yàn)的計(jì)算，結(jié)果見表5。

5.7?穩(wěn)定性試驗(yàn)?以選定濃度（mg/mL）為準(zhǔn)的供試溶液， 分別在0、1、2、4、6h時(shí)間段內(nèi)測定峰面積。

5.8?加樣回收率?試驗(yàn)取已知含量為0.64mg/g的黎辣根，打成細(xì)粉（過3號(hào)篩），取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，再分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液（溶劑為甲醇溶液，濃度為0.6505mg/mL）2.5mL，稱定重量，然后按正文含量測定方法供試品溶液制備項(xiàng)下的方法操作測定，記錄色譜圖，考察本方法的加樣回收率，加樣回收率為97.9%，RSD為0.31%，表明該方法回收率良好。結(jié)果見表6。

5.9?樣品含量測定

5.9.1?測定?分別吸取3批供試品溶液和大黃素對(duì)照品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀中，測定，計(jì)算，即得。

5.9.2?結(jié)果?3批黎辣根大黃素的含量分別為0.4216mg/g、0.4290 mg/g、0.4285mg/g。

6?討?論

薄層色譜斑點(diǎn)清晰、分離度好;高效液相含量測定專屬性強(qiáng)，分離度和重復(fù)性好。通過試驗(yàn)研究，確定以甲醇為溶劑，40℃水浴加熱回流提取45min為含量測定中最優(yōu)的樣品提取方法。本研究方法準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，創(chuàng)新性強(qiáng)，可用于黎辣根的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

[1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典（下冊）[M].2版.上海：上海科技出版社，2005：12.

[2]《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編彩色圖譜[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1974：137.

[3]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：208-209.

（收稿日期：2020-04-08?編輯：程鵬飛）