王秀莉 孟安華

（1 東北師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 吉林長春 130024 2 東北師范大學(xué)附屬中學(xué) 吉林長春 130021）

“用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體”是高中生物學(xué)課程必修1 里的一個(gè)重要實(shí)驗(yàn)［1］。但是中學(xué)開設(shè)這個(gè)實(shí)驗(yàn)較少，成功率很低，而且筆者在做預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)按照教材給出的實(shí)驗(yàn)步驟在實(shí)驗(yàn)操作過程中存在一些問題：1）溶解的建那綠B 溶液在顯微鏡下原本就有顆粒；2）找到口腔上皮細(xì)胞比較困難；3）用洋蔥表皮作為實(shí)驗(yàn)材料，比較容易觀察到細(xì)胞，但健那綠B 有顆粒，不能確定觀察現(xiàn)象的正確性；4）洋蔥表皮細(xì)胞和口腔上皮細(xì)胞哪個(gè)更適合作為實(shí)驗(yàn)材料還不明確。針對(duì)以上問題筆者設(shè)計(jì)了一系列實(shí)驗(yàn)，探索出最適合線粒體觀察的方案。

1 實(shí)驗(yàn)儀器、材料與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料 倒置光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯，IX81），載玻片，蓋玻片，移液器（200 μL），吸頭（200 μL），濾紙，量筒，燒杯，漏斗，牙簽。人口腔上皮細(xì)胞，洋蔥表皮細(xì)胞。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 蒸餾水；生理鹽水：取0.9 gNaCl溶于100 mL 蒸餾水中；健那綠B：取0.3 g 健那綠B 粉末溶于30 mL 生理鹽水中，35℃水浴中溶解，并用濾紙過濾。

2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1）用鑷子夾住洋蔥的表皮并撕下，將其平鋪在載玻片上，在表皮上滴加適量健那綠B 染液，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時(shí)裝片放置于顯微鏡下觀察。

2）在載玻片上滴一滴健那綠B 染液，用滅菌牙簽較鈍的一端在口腔壁上刮幾下，然后在染液中涂一涂，3 min 或10 min 后蓋上蓋玻片，用濾紙包好壓一壓，然后將臨時(shí)裝片放置在顯微鏡下觀察。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

3.1 健那綠B 染液的過濾 由于在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)配置好的染液在標(biāo)記線粒體時(shí)會(huì)在細(xì)胞外出現(xiàn)不明顆粒，筆者將染液進(jìn)行了過濾，并將過濾和未過濾的染液在顯微鏡下進(jìn)行觀察和對(duì)比，觀察結(jié)果如圖1所示，未過濾的染液有很多顆粒，而過濾后的染液則沒有顆粒出現(xiàn)，所以接下來的實(shí)驗(yàn)均用過濾后的健那綠B 染液。

圖1 健那綠B 染液的觀察（20×）

3.2 洋蔥表皮細(xì)胞的線粒體觀察 實(shí)驗(yàn)中采用了洋蔥表皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，健那綠B 染色時(shí)間分別為3 min 和10 min，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，染色3 min 后在顯微鏡下觀察幾乎看不到線粒體被標(biāo)記的小顆粒，而染色10 min 后的細(xì)胞中可觀察到被染色的呈圓球狀的線粒體顆粒，說明健那綠B 的染色時(shí)間為10 min 是適宜的。吳艷［2］提出由于植物細(xì)胞有中膠層和細(xì)胞壁的存在，所以植物細(xì)胞內(nèi)的線粒體染色時(shí)間需稍長些。

圖2 洋蔥表皮細(xì)胞線粒體的觀察（20×）

3.2 口腔上皮細(xì)胞的線粒體觀察 采用口腔上皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，健那綠B 染色時(shí)間也分別為3 min 和10 min，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。染色3 min后在顯微鏡下觀察到被標(biāo)記的線粒體小顆粒不太明顯，而染色10 min 后的細(xì)胞中可清晰地觀察到被染色的呈現(xiàn)球狀或棒狀的線粒體顆粒，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，對(duì)于口腔上皮細(xì)胞內(nèi)的線粒體的觀察，染色時(shí)間稍長些效果更明顯。

圖3 口腔上皮細(xì)胞線粒體的觀察（60×）

4 結(jié)論與建議

4.1 結(jié)論 健那綠B 染液配制后需用濾紙過濾去除溶解不徹底的健那綠B 小顆粒，洋蔥表皮細(xì)胞和口腔上皮細(xì)胞均可作為實(shí)驗(yàn)材料，但口腔上皮細(xì)胞優(yōu)于洋蔥表皮細(xì)胞，這2 種細(xì)胞的染色時(shí)間均為10 min 時(shí)效果最好。

4.2 建議 為了避免口腔上皮細(xì)胞太少而不易觀察到，刮取口腔上皮細(xì)胞時(shí)可用牙簽多刮幾次，或者用2～3 根牙簽依次刮取盡可能多的細(xì)胞，并且牙簽要在染液中攪拌一下，使細(xì)胞盡量分散開，在觀察時(shí)要耐心地尋找分散比較好且鋪展開的細(xì)胞觀察。

由于洋蔥表皮細(xì)胞比較大，觀察時(shí)用20 倍或40 倍的物鏡比較合適，而口腔上皮細(xì)胞相對(duì)較小，可用高倍物鏡（60 倍或100 倍）進(jìn)行觀察，這樣容易觀察到細(xì)胞內(nèi)較小的線粒體。