王冬生

（河南工業(yè)和信息化職業(yè)學(xué)院，河南 焦作 454002）

白靈菇（Pleurotus ferulae） 為真菌門（Enmycophyta） 擔(dān)子菌綱 （Basidiomycetes） 傘菌目 （Agaricales） 側(cè)耳科 （Pleurotaceae） 側(cè)耳屬 （Pleurotus）[1]真菌，因其外形與靈芝相似，但卻通體白色因而得名。白靈菇通體潔白，菇體肥大、菌蓋肥厚、菌柄短粗、肉質(zhì)鮮美營養(yǎng)成分十分豐富，具有調(diào)節(jié)人體生理平衡，增強(qiáng)人體免疫力的作用，是一種食用和藥用價值都很高的珍稀食用菌[2]。白靈菇多糖對增強(qiáng)人體免疫力，提高人體的抗氧化性和疲勞恢復(fù)有很好的效果[3]。

長跑運(yùn)動員在運(yùn)動訓(xùn)練時，體內(nèi)新陳代謝和血液循環(huán)加快，能量消耗增加，肌肉組織內(nèi)會產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物，引起肌肉酸痛、神經(jīng)系統(tǒng)反應(yīng)緩慢等身體疲勞現(xiàn)象，同時也會產(chǎn)生身心疲勞等心理性疲勞的感覺[4]。如何盡快消除疲勞，快速恢復(fù)身體機(jī)能成為了一個值得研究的問題[5]。針對白靈菇多糖對長跑運(yùn)動員的疲勞恢復(fù)作用進(jìn)行試驗，為探討白靈菇多糖對長跑運(yùn)動員生理和心理疲勞的恢復(fù)作用。

1 白靈菇多糖提取液的制備

1.1 試劑與儀器

白靈菇一級品干品（雜質(zhì)含量＜0.1%），購自四川大灣山食品有限公司。

主要試劑：DEAE-52，Sigma公司；SephdexG-100，Wolsen公司；乙醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉（分析純），天津市天大化學(xué)試劑廠；濃硫酸、苯酚、葡萄糖（分析純），上海試劑一廠綜合經(jīng)營公司。

主要儀器設(shè)備：佳明（Garmin） HRM 4-run跑步心率帶，上海佳明速達(dá)航電科技有限公司；WBZS801-7鼓風(fēng)電熱烘箱，蘇州王品工業(yè)烘箱設(shè)備有限公司；HL-2恒流泵，上海亞榮有限公司；756 PC紫外可見分光光度計，上海醫(yī)用激光儀器廠；HHW 420型電熱恒溫水浴鍋，濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司；傅立葉紅外光譜儀VECTOR－22，德國BRUKER公司；HF 240-300全自動生化分析儀，山東濟(jì)寧正豐醫(yī)療科技有限公司。

1.2 白靈菇粗多糖提取

取白靈菇干品，洗凈后在35℃的烘箱中烘干30 min，上粉碎機(jī)打成粉末過80目篩，按1∶10的料液比與80%乙醇混合進(jìn)行脫脂，去除雜質(zhì)后得白靈菇粗多糖提取液。

1.3 白靈菇粗多糖的分離純化

將白靈菇粗多糖提取液采用纖維素DEAE-52進(jìn)行分離純化，具體按以下步驟進(jìn)行。

1） 取DEAE-52型纖維素離子交換劑30 g，加入450 mL的去離子水浸泡24 h，倒掉多余的水后再用去離子水洗3次；最后一次水洗倒掉多余水后，加4倍體積的0.5 mol·L-1鹽酸浸泡4 h；抽濾，用水洗至濾液至中性。然后用0.5 mol·L-1鹽酸浸泡4 h，抽濾，用水除去游離鹽酸。再用氫氧化鈉洗滌，進(jìn)而用水洗去堿液，至濾液成中性。最后重復(fù)一次鹽酸洗滌，使DEAE-52纖維素離子交換劑帶上氯離子。將濕的DEAE-52與水的混懸液傾入柱中，制備纖維素層析柱。

2）將層析柱垂直架好，采用橫流泵提供動力進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣。層析具體過程是將白靈菇粗多糖溶液加熱充分溶解，上離心機(jī)4 000 r·min-1離心10 min除去不溶顆粒后，上樣，以0～0.5 mol·L-1氯化鈉進(jìn)行洗脫，流速為1.0 mL·min-1，分步收集。經(jīng)苯酚-硫酸法檢測后收集多糖提取液。

1.4 白靈菇多糖純度檢測

纖維素DE-52分離得到的白靈菇多糖純度采用Sephadex-100進(jìn)行檢測[6]，具體步驟如下。

1） 將 Sephadex-100凝膠裝柱 （Φ1.6 cm×60 cm）進(jìn)行預(yù)處理，以減少碎屑使凝膠沉降，將柱底出口關(guān)閉，用0.1 mol·L-1的氯化鈉溶液以1 mL·min-1的流速平衡。

2）層析過程：將白靈菇多糖提取液加熱溶解，離心機(jī)4 000 r·min-1離心10 min除去不溶顆粒，上樣。用0.1 mol·L-1的氯化鈉洗脫液，按流速1.0 ml·min-1、5 mL管進(jìn)行洗脫，分部收集，用苯酚-硫酸法檢測多糖純度。

3）多糖的純化采用Sephadex進(jìn)行分析，進(jìn)行的同時監(jiān)測不同管子中多糖的濃度，并以此繪制多糖在Sephadex柱中分離曲線。結(jié)果顯示曲線洗脫峰為對稱形狀，因此可以確定分離的白靈菇提取液多糖為純品，即均一多糖。

4） 將白靈菇提取液多糖配置成一定濃度的溶液，使用紅外光譜儀分別在不同波長處掃描，結(jié)果顯示白靈菇多糖中含有葡萄糖和鼠李糖等成分。

2 研究對象和方法

2.1 研究對象

選取本校體育大學(xué)田徑專業(yè)的30名中長跑運(yùn)動員為試驗對象，這30人均長期從事長跑專項訓(xùn)練。其中男運(yùn)動員21人，女性9人。按性別隨機(jī)分成3組，每組10人（7男3女）：試驗1組、試驗2組和對照組。研究對象的基本情況如下：試驗1組平均年齡19.4歲、身高170.2 cm、體重62.9 kg；試驗2組平均年齡20.2歲、身高173.4 cm、體重68.3 kg；對照組平均年齡20.5歲、身高171.6 cm、體重66.9 kg。

2.2 研究方法

采用靜息心率 RHR（resting heart rate，RHR）比較試驗法和血液指標(biāo)試驗法，研究白靈菇多糖對長跑運(yùn)動員疲勞恢復(fù)的作用。

提取白靈菇多糖提取液備用。在試驗開始第1天起，每天晨起時測量研究對象的靜息心率，連續(xù)測量30 d；在試驗開始第1天早上空腹抽血1次進(jìn)行血液指標(biāo)測定，在試驗結(jié)束的最后一天再空腹抽血1次測定血液指標(biāo)。從開始試驗第1天起，試驗1組和2組在每天正常飲食的基礎(chǔ)上，分別服用100 mL和200 mL的白靈菇多糖提取液，連續(xù)服用30 d；對照組不服用任何補(bǔ)劑。全體研究對象在試驗期間每天正常飲食，不得添加其它藥品、保健品、營養(yǎng)品和運(yùn)動功能性飲料等額外飲食。

2.2.1 靜息心率RHR比較試驗法

開始試驗的前1天就寢前，要求在胸部佩戴佳明（Garmin） HRM4-run跑步心率帶，用于靜息心率的測量。從第1天早上晨起時測量靜息心率數(shù)據(jù)，要求不起床，不坐起、不說話，不做任何運(yùn)動的初醒狀態(tài)下進(jìn)行測量，以平躺1 min記錄的靜息心率數(shù)據(jù)為準(zhǔn)。

2.2.2 血液指標(biāo)測定試驗

試驗兩次的血樣采集均應(yīng)在空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行，主要涉及全血乳酸（LD）、肌酸激酶（CK）、血尿素氮（BUN）含量等測定，統(tǒng)一由校醫(yī)院的醫(yī)護(hù)人員完成采血和血液指標(biāo)測定。

3 試驗結(jié)果與討論

3.1 靜息心率RHR測量結(jié)果與討論

3組人員的30天靜息心率變化情況見圖1。

如圖1所示，前10天3組研究對象的RHR均處于一個上升期，其中第9天的RHR最高，試驗1組、2組和對照組的平均RHR分別為45.03、43.93和44.18。因為第1周按訓(xùn)練計劃是超負(fù)荷運(yùn)動量集訓(xùn)，從第2周開始進(jìn)行為期3周的保持期訓(xùn)練，運(yùn)動負(fù)荷不再加大，只是維持在第1周的運(yùn)動量水平。3組研究對象平均RHR變化曲線可以看出，試驗1組RHR數(shù)值也有上升；試驗2組前10天也有上升，但中期處于持平狀態(tài)，后期反而有所下降；總體上2個試驗組的平均RHR均要低于對照組，試驗2組在試驗中后期的RHR均處于試驗1組之下。

靜息心率反映了人在安靜狀態(tài)下，一般是指在清醒、不活動的狀態(tài)下每分鐘心跳的次數(shù)。這一指標(biāo)不僅能在一定程度上反映一個人的健康程度（心臟機(jī)能），還是一項訓(xùn)練疲勞程度與恢復(fù)情況的晴雨表。

本次試驗中，第1周的大負(fù)荷運(yùn)動量使全體研究對象的RHR均升高，特別是對照組靜息心率曲線上升很快。但是從第2周開始不再增加運(yùn)動量，這時心臟和肌肉等運(yùn)動組織已經(jīng)適應(yīng)了這種強(qiáng)度。疲勞感慢慢在減輕，心率恢復(fù)速度也明顯加快。運(yùn)動結(jié)束后平靜下來的靜息心率也增加緩慢，對照組的心率曲線也趨于平穩(wěn)。試驗1組因為服用了白靈菇多糖提取液，其心率上升幅度與對照組相比更??；試驗2組由于服用了更多的白靈菇多糖提取液，心率曲線在試驗后期甚至出現(xiàn)了緩慢下降的趨勢。這說明增加白靈菇提取液的服用量對降低靜息心率有一定的功效，從而降低RHR的數(shù)值。需要注意的是，對于常人來說，過低的靜息心率也容易引起頭暈、氣短等問題。本試驗中長跑運(yùn)動員的靜息心率降低是建立在長期的運(yùn)動訓(xùn)練基礎(chǔ)上的，因此低心率屬于合理的數(shù)值范圍。

3.2 全血乳酸、肌酸激酶和血尿素氮測定與討論

試驗開始和最后一天服用白靈菇提取液后采血，使用全自動生化分析儀進(jìn)行全血乳酸、肌酸激酶和血尿素氮測定。測定結(jié)果如表1所示。

表1 血液指標(biāo)檢測結(jié)果Tab.1 Results of blood index test

由表1可知，試驗1組和試驗2組在試驗后與對照組相比，全血乳酸含量均有所上升。對照組在試驗前后全血乳酸含量增加了15.29%；試驗1組在試驗前后全血乳酸含量增加了10.48%；試驗2組在試驗前后全血乳酸含量增加了3.97%。在減少血乳酸的生成和積累方面效果不顯著。試驗2組的乳酸含量在同等條件下增加幅度最小，說明服用白靈菇提取液能夠有效緩解肌肉酸痛、降低疲勞感；而且從試驗1組和對照組的增幅來看，服用量與抗乳酸抗疲勞程度呈現(xiàn)正比關(guān)系。

試驗1組和試驗2組在試驗后與對照組相比，肌酸激酶含量均有所上升。對照組在試驗前后肌酸激酶含量增加了42.40%；試驗1組在試驗前后肌酸激酶含量增加了16.95%；試驗2組在試驗前后肌酸激酶含量增加了10.22%。肌酸激酶通常存在于肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，一般肌肉細(xì)胞的損傷會使肌酸激酶含量升高；而長跑屬于耐力訓(xùn)練，長時間的跑步運(yùn)動會導(dǎo)致肌肉細(xì)胞的勞損；同時，第1周運(yùn)動量的加大，劇烈運(yùn)動也會使肌酸激酶增高，肌酸分泌過多，人就會覺得酸痛而產(chǎn)生疲勞感。本試驗中，對照組肌酸激酶含量增加幅度很大，而試驗1組、2組肌酸激酶含量在同等條件下增加幅度較小，說明服用白靈菇提取液能夠降低血液中肌酸激酶的含量，減少肌酸分泌就能夠減輕肌肉的酸痛，減輕肌肉疲勞。

與對照組相比，試驗1組和試驗2組血尿素氮含量均有所升高。對照組血尿素氮含量增加了12.26%；試驗1組血尿素氮含量增加了14.81%；試驗2組血尿素氮含量增加了57.18%。本試驗中，2個試驗組均服用了白靈菇多糖，補(bǔ)充了大量的高蛋白物質(zhì)。雖然多糖對血尿素氮的產(chǎn)生有一定的抑制作用，可以修復(fù)受損細(xì)胞，以緩解機(jī)體對負(fù)荷的不適應(yīng)。由于血尿素氮水平受飲食的影響較大，本次試驗中白靈菇提取液服用量過大，可能引起蛋白質(zhì)供給過剩，造成血中尿素氮出現(xiàn)非生理性升高，這從試驗2組的血尿素氮值要高于試驗1組就可以看出。而對照組的血尿素氮升高可能是因為運(yùn)動量的增加而引起的。

4 結(jié)論

白靈菇多糖能夠有效減少疲勞感，通過靜息心率的試驗和血液指標(biāo)檢測結(jié)果均顯示出其抗疲勞的功效。對長跑運(yùn)動員的試驗研究顯示，白靈菇多糖的緩解疲勞作用機(jī)理，可能是對運(yùn)動肌肉細(xì)胞的修復(fù)作用和蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的補(bǔ)充作用，減輕了肌肉的酸痛感，降低了乳酸過度堆積。從而減輕了人體的疲勞感，有助于運(yùn)動員體力的恢復(fù)。但試驗中運(yùn)動員的血尿素氮指標(biāo)有所升高，分析其原因可能是白靈菇多糖提取液攝入量過大，多余的蛋白質(zhì)不能被人體吸收。后期需要在多糖的攝入量上再進(jìn)一步研究，為白靈菇多糖在運(yùn)動保健、醫(yī)藥等領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。