王利玲

（河南建筑職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 鄭州 450064）

黃柳菇（Pholiota adiposa）學(xué)名為黃傘，又稱黃蘑、柳蘑、多脂鱗傘等[1]。因其子實體呈金黃色，而且菌蓋菌柄上布滿黃褐色鱗片而得名。黃柳菇是一種中低溫型食用菌，其味道鮮、肉質(zhì)滑嫩、風(fēng)味獨特，而且含有大量的蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)，營養(yǎng)成份豐富，是一種市場前景良好的食用菌新品種[2]。中醫(yī)認(rèn)為，黃柳菇味甘，性平，具有滲濕利水，緩中止痛的功效[3]?？梢杂行У拇龠M(jìn)體內(nèi)新陳代謝，加速身體廢棄物和有毒物的排出。改善腹脹、腹瀉、周身水腫等現(xiàn)象，常被用于治療水腫、腹瀉、腹脹等[4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)黃柳菇中含有一些核酸、黃酮類物質(zhì)。對精力不足、過度疲勞等有很好的輔助治療效果，可以快速恢復(fù)體力[5]。特別是對于過度運動訓(xùn)練的運動員來說，能夠有效抵抗運動性疲勞，提高免疫力，促進(jìn)身體運動功能的恢復(fù)。

黃柳菇的總黃酮是其含有的黃酮類化合物的總稱，具有很強(qiáng)的抗氧化和消除自由基作用，而且還有止咳、平喘、祛痰、抗菌、抗病毒及消炎作用；對心血管疾病也有很好的療效，是許多中草藥的有效成分[6]。通過就黃柳菇中總黃酮類物質(zhì)對過度運動訓(xùn)練的影響開展研究，探討黃柳菇總黃酮等有效成份對免疫系統(tǒng)的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃柳菇干品由長治市金善生物科技有限公司提供，一級品，雜質(zhì)含量≤0.1%。

蒸餾水、無水乙醇（分析純），上海凱茵化工有限公司；磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液（pH 2.2～8.0），上海古朵生物科技有限公司；丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）試劑盒，上海雙贏生物科技有限公司；小鼠肝糖原、肌糖原試劑盒，上海滬崢生物科技有限公司

1.2 儀器設(shè)備

TM-EXA1003H-G型精密電子天平，南京湯姆斯衡器有限公司；WND-200型高速中藥粉碎機(jī)，北京普析通用儀器有限公司；RE-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海越眾儀器設(shè)備有限公司；THZ-82A回旋式水浴恒溫振蕩器，常州金壇良友儀器有限公司；PHS-828實驗室PH計，北京天地首和科技發(fā)展有限公司；TU-1800紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限公司；KA-1000型臺式離心機(jī)，上海市安亭電子儀器廠；DB030型運動試驗跑臺，北京智鼠多寶生物科技有限責(zé)任公司；SMT-120全自動生化分析儀，成都斯馬特科技有限公司。

1.3 黃柳菇總黃酮的提取

總黃酮提取方法很多，有采用不同溶劑浸泡的方法、加熱提取法、水浴回流乙醇提取法、超聲波輔助提取法、微波輔助提取法、半仿生提取法等[7]。其中半仿生提取法因符合口服給藥經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運吸收的原理，更易于人體吸收而受到廣泛關(guān)注，已成功地應(yīng)用在了杜仲葉、葛根、苦參、石榴果皮等植物總黃酮的提取上[8]，因此采用半仿生提取法進(jìn)行黃柳菇總黃酮的提取。

將黃柳菇干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎研磨制成粉末，過80目篩后用乙醇作為浸提劑，按料液比為1∶20混合均勻。根據(jù)仿生學(xué)原理，人體的胃、小腸、大腸的體液環(huán)境pH是由酸性向堿性轉(zhuǎn)變的。用磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖溶液模擬胃腸道pH，分別調(diào)pH為2.2、6.8、7.0（取胃、小腸、大腸體液pH中值），在恒溫水浴70℃下提取60 min，合并3次提取液，蒸發(fā)濃縮至50%體積得黃柳菇總黃酮提取液。

1.4 總黃酮含量的測定

精確稱取黃柳菇總黃酮提取液，4 500 r·min-1離心10 min，取上清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，再用提取時對應(yīng)的乙醇濃度定容，取1 mL溶液稀釋50倍作為待測液。取2.5 mL待測液于25 mL比色管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線方法用分光度計測定吸光度。黃柳菇總黃酮含量M（%）的計算公式為：

M ＝[（A ×25.0 ×5 000）/（B ×2.5 ×100）]×100%式中：A為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線查到的總黃酮質(zhì)量濃度（mg·mL-1）；B為黃柳菇提取液用質(zhì)量（g）。

根據(jù)上述方法測得黃柳菇總黃酮含量為6.55%.

1.5 試驗分組

取雌雄各半的SPF級小鼠，體重（20±3） g。適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)行跑臺適應(yīng)性訓(xùn)練。選擇能夠連續(xù)正常跑步的小鼠進(jìn)行下一步過度運動訓(xùn)練，設(shè)置跑臺速度為12 m·min-1，傾角15°。每天下午各進(jìn)行2組過度運動訓(xùn)練，每組訓(xùn)練之間休息10 min。過度訓(xùn)練的判斷標(biāo)準(zhǔn)是小鼠力竭匍匐在跑臺不動時，連續(xù)2次給予2 mA電壓的電刺激，小鼠仍然腹部著地不動。連續(xù)1周后建立小鼠過度訓(xùn)練模型。

末次過度運動訓(xùn)練結(jié)束后，按體重將小鼠隨機(jī)分成3組開始灌胃試驗，每組10只。高劑量組、中劑量組、低劑量組每日上午分別經(jīng)口灌胃1次劑量為 400 mg·kg-1、200 mg·kg-1和 100 mg·kg-1的黃柳菇總黃酮提取液；對照組灌胃同樣體積蒸餾水；下午繼續(xù)進(jìn)行跑臺過度運動訓(xùn)練，跑臺速度提升到為15 m·min-1，其它參數(shù)不變，連續(xù)3周。

1.6 小鼠體內(nèi)抗氧化試驗

末次跑臺過度運動訓(xùn)練結(jié)束后，將小鼠麻醉，摘取小鼠的心臟和肝臟。按照試劑盒要求測定MDA、SOD、肝糖原和肌糖原含量。摘取小鼠眼球后在眼眶處采血，按操作手冊進(jìn)行乳酸（LD）、肌酸激酶（CK）、血尿素氮（BUN） 含量測定。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練小鼠心肌組織抗氧化酶的影響

小鼠心肌組織中的抗氧化酶測量結(jié)果如表1所示。

表1 黃柳菇總黃酮對小鼠心肌組織抗氧化酶的影響Tab.1 Effect of total flavonoids of Pholiota adiposa on the antioxidant enzymes in the myocardium of mice

由表1可知，與對照組相比，低劑量組MDA含量上升而中、高劑量組下降；與對照組相比下，高劑量組、中劑量組、低劑量組的SOD含量均有所上升。

2.2 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練小鼠肝糖原和肌糖原的影響

小鼠肝臟組織中的肝糖原和肌糖原含量測量結(jié)果如表2所示。

由表2可知，與對照組相比，高劑量、中劑量、低劑量組的肝糖原和肌糖原含量均有所上升。

2.3 黃柳菇總黃酮對過度訓(xùn)練小鼠血液生化指標(biāo)的影響

灌胃黃柳菇總黃酮后對小鼠血液中LD、CK、BUN含量的影響如表3所示。

表3 黃柳菇總黃酮對小鼠血液LD、CK、BUN的影響Tab.3 Effect of total flavonoids of Pholiota adiposa on the content of LD,CK and BUN in blood of mice

由表3可知，與對照組相比，低劑量組小鼠血乳酸含量略微上升了0.17%，而高劑量組、中劑量組則分別下降了31.64%和11.46%，灌胃高劑量的黃柳菇總黃酮對血乳酸含量的下降影響最大；與對照組相比，高劑量組、中劑量組、低劑量組小鼠血液中肌酸激酶含量分別下降了30.55%、13.31%和13.84%，其中高劑量組對肌酸激酶含量下降的影響最大，黃柳菇總黃酮灌胃劑量與肌酸激酶含量呈一定的反比關(guān)系；與對照組相比，高劑量組、中劑量組、低劑量組小鼠血液中血尿素氮含量分別下降了25.73%、13.50%和5.09%，其中高劑量組對血尿素氮含量下降的影響最大，黃柳菇總黃酮灌胃劑量與血尿素氮含量呈一定的反比關(guān)系。

3 討論

運動員在高強(qiáng)度過度運動訓(xùn)練時，身體需要大量的氧氣來產(chǎn)生能量，導(dǎo)致氧化產(chǎn)物“自由基”的生成增多。自由基是一種有害的氧化產(chǎn)物，過多的自由基使身體不能被有效清除。身體正常的細(xì)胞也不能被有效修復(fù)還原，造成組織細(xì)胞受損或變性壞死、DNA裂解老化等現(xiàn)象。很容易產(chǎn)生細(xì)胞病變和衰老，引起免疫力下降、運動功能受損、甚至誘發(fā)癌癥、腫瘤等疾病。

而總黃酮的主要功效就是其抗氧化性，通過清除多余的自由基，有效對過度運動產(chǎn)生的機(jī)體細(xì)胞受損進(jìn)行修復(fù)。減少過氧化現(xiàn)象，從而預(yù)防運動功能下降、提升機(jī)體免疫力。

試驗結(jié)果表明，對過度訓(xùn)練的小鼠灌胃黃柳菇總黃酮后，小鼠體內(nèi)具有細(xì)胞毒性的MDA含量明顯降低，而具有清除自由基能力的SOD含量有所上升。由于過度運動訓(xùn)練時，體內(nèi)自由基產(chǎn)生大幅激增，體內(nèi)的SOD含量會出現(xiàn)應(yīng)激性增高。但隨著高濃度自由基對SOD的大量消耗，以及機(jī)體的失代償，SOD含量會很快回落到低水平。

小鼠體內(nèi)肌糖原和肝糖原的增加是為了給過度運動提供充足的無氧代謝能量，以維持血糖水平相對穩(wěn)定。灌胃黃柳菇總黃酮后2個指標(biāo)的提升表明，黃酮也能夠刺激小鼠體內(nèi)運動能量的儲備。

綜上所述，黃柳菇總黃酮能夠有效抑制過度運動訓(xùn)練時的心肌、骨骼肌等組織的過氧化現(xiàn)象，維持機(jī)體酸堿平衡、修復(fù)受損細(xì)胞，改善血液循環(huán)，促進(jìn)新陳代謝等作用，對恢復(fù)機(jī)體的運動功能有一定的功效，后期還需深入研究其作用機(jī)理，為黃酮醫(yī)藥、保健品領(lǐng)域的進(jìn)一步應(yīng)用提供理論依據(jù)。