何立佳

（石家莊職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河北 石家莊 050081）

松茸 [Tricholoma matsutake(Ito et Imai)Singer]，屬于口蘑科 （Tricholomataceae） 傘菌目 （Agaricales）。宋代《經(jīng)史證類(lèi)務(wù)急本草》記載，松茸主要分布在非洲北部、亞洲、歐洲和美洲地區(qū)[1]。由于野生松茸易與松木共生，菇體肥厚柔嫩，口感鮮美，有特別的濃香，口感如鮑魚(yú)，極潤(rùn)滑爽口，是擁有“菇中之王”美譽(yù)的名貴食用菌[1]。臨床的抗疲勞試驗(yàn)研究成果證實(shí)，松茸（Tricholoma matsutake） 多糖具有防癌、降脂、抗毒等功效[2]，由于能夠消除體內(nèi)的自由基，分解肌肉中產(chǎn)生的大量乳酸，有效修復(fù)受損的機(jī)體組織，因而還具備抗疲勞的特殊功效[3]。研究發(fā)現(xiàn)，松茸多糖可以降低機(jī)體乳酸脫氫酶的活性，使肝糖原含量顯著提高，提高機(jī)體的運(yùn)動(dòng)能力，并在運(yùn)動(dòng)后迅速恢復(fù)正常，增強(qiáng)機(jī)體適應(yīng)能力[4]，因此具有抗疲勞的作用；松茸多糖中氨基酸含量較高，還富有蛋白質(zhì)、脂肪及多種維生素；此外，松茸多糖中具有的肽類(lèi)、多糖、有機(jī)鍺、核酸衍生物等在其他食用菌中極為少見(jiàn)，這些物質(zhì)可以顯著降低機(jī)體心肌脂褐素和皮膚內(nèi)羥脯氨酸的含量，達(dá)到延緩衰老、強(qiáng)身、益腸胃的作用[5]。

通過(guò)以松茸為研究對(duì)象，利用酶輔助超聲波法對(duì)松茸中的多糖進(jìn)行提取。通過(guò)小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)和抗疲勞生化指標(biāo)分析揭示松茸多糖的抗運(yùn)動(dòng)疲勞活性，以期拓展松茸多糖的應(yīng)用范圍。

1 試驗(yàn)步驟

1.1 松茸多糖的制備

研究原料松茸子實(shí)體主要購(gòu)自云南叢茸經(jīng)貿(mào)有限公司，液體深層發(fā)酵產(chǎn)物松茸多糖由2個(gè)部分組成：胞內(nèi)多糖和胞外多糖。對(duì)松茸多糖的提取可以采取熱水提取法、堿浸提取法、復(fù)合酶解法、有機(jī)溶劑提取法、微波和超聲波提取法等[6]。本研究采用關(guān)長(zhǎng)亮等[7]提取松茸多糖的酶輔助超聲波法，并對(duì)制得的松茸多糖樣本進(jìn)行了興奮劑檢測(cè)和毒物試驗(yàn)檢測(cè)。該法制備的松茸多糖提取物不僅未檢出任何興奮劑成分，而且安全無(wú)毒，具備極高的生物活性。

1.2 動(dòng)物試驗(yàn)

試驗(yàn)將出生7周左右的40只雄性健康小鼠（昆明種小鼠，購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），合格試驗(yàn)小鼠情況基本一致。隨機(jī)分為A、B、C、D小組。其中，A組小鼠為對(duì)照組，每天投喂相同劑量的生理鹽水輔食；B、C、D小組為試驗(yàn)組，每天分別投喂5 g·kg-1、10 g·kg-1與 15 g·kg-1的松茸多糖輔食。休息期間對(duì)照組投喂相同劑量的生理鹽水輔食，試驗(yàn)組每天分別投喂 5 g·kg-1、10 g·kg-1與 15 g·kg-1的松茸多糖輔食。對(duì)上述4個(gè)小組的小鼠持續(xù)投喂28 d，并通過(guò)相應(yīng)的試驗(yàn)，檢驗(yàn)松茸多糖提取物的抗疲勞效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 松茸多糖提取物對(duì)小鼠負(fù)重游泳力竭時(shí)間的影響

在最后一次投喂0.5 h后，對(duì)各組小鼠進(jìn)行相應(yīng)的尾部負(fù)重金屬鉛游泳試驗(yàn)。4組小鼠的負(fù)重量為體重的4%，游泳箱內(nèi)的環(huán)境與水溫相同，試驗(yàn)需要記錄4組小鼠負(fù)重游泳的首次下沉?xí)r間與力竭時(shí)間。游泳期間利用秒表記錄首次下沉?xí)r間，當(dāng)小鼠下沉水面10 s后不能浮出時(shí)則視為力竭，以游泳開(kāi)始到力竭的時(shí)間記作小鼠力竭游泳的時(shí)間。在25℃水溫中的4組小鼠，經(jīng)過(guò)此次負(fù)重游泳試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1與圖2。其中，圖中不同小寫(xiě)字母表示試驗(yàn)組與對(duì)照組的參數(shù)相比，存在顯著性差異（P＜0.05）。

由圖1和圖2可知，與投喂生理鹽水輔食的對(duì)照組小鼠相比，投喂 5 g·kg-1、10 g·kg-1與 15 g·kg-1不同劑量松茸多糖提取物的B組、C組、D組，小鼠負(fù)重游泳首次下沉?xí)r間與負(fù)重游泳時(shí)間相應(yīng)延長(zhǎng)，在負(fù)重游泳首次下沉?xí)r間與力竭時(shí)間方面，表現(xiàn)出了明顯的抗疲勞效果。同時(shí)投喂大劑量松茸多糖提取物的試驗(yàn)組小鼠，負(fù)重游泳耐力提高效果最為顯著。

2.2 松茸多糖對(duì)抗疲勞生化指標(biāo)的影響

完成負(fù)重游泳試驗(yàn)后的小鼠，集體休息1 d后，需要繼續(xù)參與持續(xù)時(shí)間為0.5 h的無(wú)負(fù)重游泳試驗(yàn)。從小鼠尾靜脈取血，采用試劑盒（南京建成生物工程研究所）分別測(cè)定4組小鼠的血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量，測(cè)試結(jié)果詳見(jiàn)表1。

表1 松茸多糖對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量的影響Tab.1 Effects of Tricholoma matsutake polysaccharide on the contents of urea nitrogen,blood lactic acid and liver glycogen in rat after exercise

由表1可知，A組、B組、C組和D組血清尿素氮含量分別是 （14.75±1.38）mg·g-1、（12.06±1.36）mg·g-1、（9.45±1.25）mg·g-1、（7.36±1.05）mg·g-1；血乳酸含量分別為 （12.52±1.36）mmol·L-1、（10.11±1.32）mmol·L-1、（7.21±0.95）mmol·L-1、（4.62±0.84）mmol·L-1；肝糖原含量分別是 （16.22±1.22）mg·g-1、（18.01±1.64）mg·g-1、（20.89±1.68）mg·g-1、（23.77±1.38）mg·g-1?？梢?jiàn)，相比投喂生理鹽水輔食的對(duì)照組小鼠，試驗(yàn)組小鼠體內(nèi)肝糖原的含量顯著提升，而血清尿素氮和血乳酸的含量，則呈現(xiàn)出了顯著的下降趨勢(shì)。

3 松茸多糖影響運(yùn)動(dòng)疲勞的機(jī)理

試驗(yàn)結(jié)果可知，松茸多糖能明顯延長(zhǎng)負(fù)重小鼠游泳時(shí)間及耐缺氧時(shí)間，這跟松茸多糖提取物結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。在松茸菌絲體、子實(shí)體和發(fā)酵液中普遍存在的松茸多糖，作為松茸體內(nèi)最有價(jià)值的活性物質(zhì)，通常會(huì)因提取方式與分離方法之間的差異，形成結(jié)構(gòu)不同的各類(lèi)多糖。由發(fā)酵菌絲體和子實(shí)體中提取的多糖分子，也存在明顯的結(jié)構(gòu)差異[8]。

組成松茸多糖的α與β葡聚糖，屬于同分異構(gòu)體。其中，α-葡聚糖有利于機(jī)體存儲(chǔ)能量，并具備降低人體血脂含量、防凝血、抗病毒的重要功效，但是相關(guān)研究成果罕有報(bào)道。作為構(gòu)成機(jī)體組織與細(xì)胞基本單元的β-葡聚糖，由于具有抗癌的特殊功效，目前已經(jīng)廣受關(guān)注，并且據(jù)此展開(kāi)了廣泛的科學(xué)研究。田光輝等[9]發(fā)現(xiàn)，水解松茸多糖不僅可以得到半乳糖與D-葡萄糖，還可以從中分離出少量的鼠李糖和巖藻糖；熊偉等[10]借助氣相色譜法分解松茸多糖發(fā)現(xiàn)，葡萄糖、半乳糖、甘露糖、巖藻糖和木糖，這五種單糖的摩爾比為49.25∶18.68∶12.68∶3.02∶1。Xiang Dinga等[11]利用葡萄糖凝膠與纖維素柱法，不僅測(cè)得了松茸多糖的分子量，而且還得到了組成松茸多糖各類(lèi)單糖的種類(lèi)及其比例。其中，8.89×104Da為松茸多糖的分子量[11]。此外，他們通過(guò)運(yùn)用電子顯微鏡掃描法、核磁共振分析法、紅外（IR）光譜與氣象色譜鑒定法、完全水解分析法和原子力學(xué)分析法，得到了松茸多糖的結(jié)構(gòu)主鏈，以及由半乳糖和木糖組成的分支結(jié)構(gòu)[11]。

根據(jù)研究，由于松茸多糖內(nèi)含多種活性物質(zhì)，并且具有極為多樣的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和豐富的組成元素，松茸多糖提取物才具備抗癌、抗病毒、抗疲勞等功效[12]。

4 結(jié)論與建議

通過(guò)以上松茸多糖對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮、血乳酸和肝糖原含量的影響研究結(jié)果顯示，松茸多糖不僅可以有效增加機(jī)體的耐缺氧能力，還能顯著降低機(jī)體劇烈運(yùn)動(dòng)后產(chǎn)生的血清尿素氮和血乳酸含量。純天然的松茸多糖提取物既無(wú)副作用，又能有效增強(qiáng)肌肉耐力與心肺功能，幫助運(yùn)動(dòng)性疲勞中迅速恢復(fù)體能。

松茸多糖的保健功能逐漸得到了食品工業(yè)的重視，其藥用價(jià)值也受到醫(yī)藥行業(yè)的關(guān)注，作為具有重要保健功能的食品和理想的藥物，松茸多糖的應(yīng)用和發(fā)展前景廣闊。經(jīng)過(guò)試驗(yàn)組小鼠的驗(yàn)證，松茸多糖在生物體內(nèi)產(chǎn)生的作用有了理論依據(jù)。松茸多糖的作用主要體現(xiàn)在2個(gè)方面：一是降低運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的血乳酸和血尿氮；二是提升機(jī)體耐缺氧能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)真菌多糖在生物醫(yī)藥和保健食品研發(fā)方面的應(yīng)用提供了方向[6]。詳細(xì)探究并且深入分析松茸多糖提取物的藥用價(jià)值與生物活性，既可以為松茸多糖的現(xiàn)實(shí)應(yīng)用提供科學(xué)的理論指導(dǎo)，又有助于保健食品的系統(tǒng)研制與有序開(kāi)發(fā)。利用野生松茸開(kāi)發(fā)天然藥物，幫助消除運(yùn)動(dòng)疲勞，是松茸多糖未來(lái)的研究方向[13-14]。