歐陽(yáng)穎， 李 健， 董 紅， 張羚枚， 阮揚(yáng)皓， 唐淑敏

（中山大學(xué)孫逸仙紀(jì)念醫(yī)院兒科，廣東廣州510120）

早 產(chǎn) 兒 腦 病（encephalopathy of prematurity，EOP）是造成極低出生體重兒遠(yuǎn)期預(yù)后不良的決定因素之一，因此早產(chǎn)兒腦損傷近年來(lái)日益受到國(guó)內(nèi)外圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)和新生兒學(xué)研究領(lǐng)域的重視。早產(chǎn)兒的這種神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙主要由腦白質(zhì)損傷及神經(jīng)元破壞損傷所致［1］。腦室周圍白質(zhì)軟化（periventricular leukomalacia，PVL）指腦室周圍深部腦白質(zhì)缺血性凝固性壞死，是早產(chǎn)兒腦損傷的主要形式，發(fā)生率約為25%～75%，多發(fā)于胎齡為23～32 周的早產(chǎn)兒［2］，早產(chǎn)兒腦損傷的防治成為新生兒科最迫切需要解決的問(wèn)題，然而目前早產(chǎn)兒腦損傷缺乏有效的治療手段和保護(hù)性藥物。因此尋找高效、副作用少的治療方法，是滿足早產(chǎn)兒一線臨床需求和減輕社會(huì)負(fù)擔(dān)的迫切要求，對(duì)于早產(chǎn)兒和社會(huì)都具有十分重要的意義。

近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)阻斷Rho/ROCK 信號(hào)通路可以改善多種成人腦血管疾病的預(yù)后。法舒地爾（fasudil）是目前臨床唯一可用的ROCK 選擇性抑制劑，其抑制 ROCK 作用較強(qiáng)［3-4］，具有良好的水溶性，且腦組織中含量較高。在急性缺血性腦卒中動(dòng)物模型中，fasudil可以增加腦部血流，增強(qiáng)內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）活性，促進(jìn)一氧化氮（nitric oxide，NO）生成，減少腦梗死體積，改善神經(jīng)行為［5］，促進(jìn)軸突生長(zhǎng)［6］。除此之外，臨床研究發(fā)現(xiàn)fasudil 能明顯改善成人急性腦卒中患者的神經(jīng)行為預(yù)后［7-8］。在新生兒科領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道fasudil 通過(guò)促進(jìn)神經(jīng)軸突生長(zhǎng)、下調(diào)神經(jīng)髓鞘抑制因子的表達(dá)、抗炎等機(jī)制從而達(dá)到神經(jīng)修復(fù)作用［9-10］，然而在早產(chǎn)兒腦損傷當(dāng)中尚無(wú)相關(guān)研究。目前對(duì)于PVL 的損傷機(jī)制尚無(wú)統(tǒng)一定論，Rho/ROCK 通路是否同樣參與PVL 的發(fā)生也無(wú)相關(guān)的報(bào)道。因此本研究觀察法舒地爾是否具有減輕腦部病理?yè)p傷、改善遠(yuǎn)期神經(jīng)功能，探討其是否通過(guò)抑制 ROCK 通路、減少 NF-κB P65 活化、減輕炎癥損傷而起作用，以期為PVL的治療開辟一條新途徑。

材料和方法

1 動(dòng)物

240 只新生3 日齡SD 大鼠，雌雄不限，購(gòu)自中山大學(xué)（大學(xué)城）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［SCXK（粵）2011-0029］。大鼠正常進(jìn)食、飲水。飼養(yǎng)環(huán)境為室溫、57%濕度、12 h光/暗循環(huán)。

2 主要試劑

鹽酸法舒地爾注射液購(gòu)自天津紅日藥業(yè)；抗ROCK2 抗體購(gòu)自 Abcam；抗 NF-κB P65 抗體購(gòu)自CST；0.25% 胰蛋白酶-EDTA 購(gòu)自 Gibco；Trizol 試劑、Taq DNA 多聚酶、dNTP 等 PCR 試劑購(gòu)自 TaKa-Ra；BCA 蛋白定量試劑盒購(gòu)自北京賽馳生物；二硫蘇糖醇、丙烯酰胺、N，N'-亞甲基丙烯酰胺、Tris 和吐溫20 購(gòu)自Sigma；過(guò)硫酸銨、甲醇、4%多聚甲醛購(gòu)自廣州化學(xué)試劑廠；甘氨酸購(gòu)自鼎國(guó)生物；蘇木精-伊紅染液、二甲苯、DAB 顯色試劑盒和免疫組化封閉液（山羊血清）購(gòu)自康為世紀(jì)；Lipofectamine 2000 轉(zhuǎn)染液購(gòu)自Invirogen。

3 主要方法

3.1 PVL 模型的建立 將麻醉后的SD 乳鼠沿頸正中切開皮膚及皮下組織，分離結(jié)扎左側(cè)頸部頸總動(dòng)脈，依次縫合皮下組織及皮膚，消毒切口。整個(gè)手術(shù)過(guò)程在電熱毯上進(jìn)行，于15 min 內(nèi)完成?？諝庵谢謴?fù)0.5～1 h，待乳鼠完全清醒后送回母鼠身邊，自由哺乳2～3 h后將乳鼠置入缺氧艙［寬30 cm×長(zhǎng)40 cm×高20 cm，箱底平鋪氧化鈉以吸收水分和CO2，溫度維持在（30±2）℃］，輸入含8% O2+92% N2的混合氣體，流速為2 L/min，持續(xù)2.5 h。缺氧結(jié)束，在空氣中恢復(fù)10 min 后放回窩中。自此開始計(jì)時(shí)，連續(xù)3 d腹腔注射生理鹽水或fasudil。

3.2 實(shí)驗(yàn)分組 225 只SD 大鼠隨機(jī)分為3 組，每組75 只：（1）假手術(shù)（sham）組僅分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，未結(jié)扎及缺血缺氧；（2）PVL+生理鹽水組（PVL組）：建模成功后根據(jù)不同時(shí)點(diǎn)開始腹腔注射生理鹽水（10 mL·kg-1·d-1）；（3）PVL+fasudil組：建模成功后根據(jù)不同時(shí)點(diǎn)開始腹腔注射 fasudil（10 mg·kg-1·d-1）。以12 h、24 h、48 h、72 h和30 d為時(shí)點(diǎn)亞組，每個(gè)亞組樣本量為15 只。斷頭取全腦，4%多聚甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋以制作病理標(biāo)本；于12 h、24 h、48 h和72 h，各組大鼠取15 只，麻醉后立即斷頭，分離左右腦，左腦用生理鹽水沖洗血跡后轉(zhuǎn)入-80℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

3.3 HE 染色 將石蠟包埋好的標(biāo)本連續(xù)冠狀切片，厚約5 μm，常規(guī)二甲苯脫蠟，經(jīng)各級(jí)乙醇至水化，置于蘇木素染色5min 后自來(lái)水沖洗，鹽酸乙醇分化30 s 后自來(lái)水浸泡15 min，用伊紅溶液染色2 min，常規(guī)脫水透明封片。

3.4 RT-qPCR 檢測(cè) ROCK2 的 mRNA 水平 使用常規(guī)RNA 提取方法在-80℃的新鮮組織標(biāo)本中提取RNA，提取結(jié)束后置于-80℃環(huán)境中保存?zhèn)溆?。按逆轉(zhuǎn)錄說(shuō)明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到的cDNA 用DEPC 水稀釋10 倍后備用。采用20 μL 反應(yīng)體系，其中包括2 μL cDNA 模板、上下游引物（序列見(jiàn)表1）各2 μL、10 μL 2× All-in-One qPCR Mix和4 μL DEPC 水，混勻離心。96孔PCR板上加好樣，上機(jī)檢測(cè)。反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃ 30 s；變性95℃ 5 s，退火60℃ 30 s，延伸72℃20 s，39 個(gè)循環(huán)。每個(gè)待測(cè)樣品及內(nèi)參照基因均設(shè)置3個(gè)復(fù)孔。

表1 RT-qPCR引物序列Table 1.The sequences of the primers for RT-qPCR

3.5 Western blot 檢測(cè) ROCK2和NF-κB P65 蛋白的表達(dá) 取新鮮腦組織標(biāo)本并利用RIPA 裂解液萃取細(xì)胞蛋白，于-80℃冰箱保存?zhèn)溆茫肂CA 蛋白定量試劑盒，根據(jù)試劑盒步驟說(shuō)明檢測(cè)待測(cè)樣品蛋白含量，于562 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A）值。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)樣品的蛋白濃度。取樣品蛋白進(jìn)行SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和封閉。封閉完畢后用TBST 液洗膜5 次，加入Ⅰ抗，4℃孵育過(guò)夜。次日用TBST 再次洗膜5 次，加入Ⅱ抗，反應(yīng)1 h，之后再此TBST 洗膜5次。最后利用化學(xué)發(fā)光成像儀顯影，根據(jù)系統(tǒng)指示要求對(duì)PVDF 膜進(jìn)行曝光，保存曝光好的條帶電子圖像。

3.6 大鼠神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè) （1）懸吊實(shí)驗(yàn)：讓大鼠前腿抓住一水平的玻璃棒（直徑0.5 cm），離開桌面45 cm，記錄玻璃棒掉下的時(shí)間（min）。（2）斜坡實(shí)驗(yàn)：大鼠頭向下倒置于45°斜面上，記錄大鼠轉(zhuǎn)頭向上＞135°所需的時(shí)間（s）。（3）圓桶實(shí)驗(yàn)：裝置為一個(gè)直徑20 cm、高45 cm 左右的透明圓桶，寬度允許動(dòng)物水平自由移動(dòng)；測(cè)試前3 d 捆綁動(dòng)物雙足10 min；測(cè)試時(shí)，將每只大鼠獨(dú)立放置于圓桶中，3 min之內(nèi)觀察其主動(dòng)站立時(shí)左右前肢觸壁次數(shù)，計(jì)算百分比。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)；多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Bonferroni 法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 一般情況

假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)死亡；PVL 組75 只，缺氧處理時(shí)死亡 4 只，12、24和48 h 分別死亡 1 只、2 只和 1 只，死亡率為 10.67%；PVL+fasudil 組 75 只，缺氧處理時(shí)死亡 4 只，12和24 h 分別死亡 2 只和 1 只，死亡率為9.33%。建模前，3 組乳鼠體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。PVL 組和PVL+fasudil 組大鼠的死亡率差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后12、24、48 和72 h，PVL 組及PVL+fasudil 組大鼠體重明顯落后于假手術(shù)組（P＜0.05），72 h 后PVL+fasudil組大鼠體重較PVL 組出現(xiàn)明顯追趕，30 d 時(shí)PVL 組與PVL+fasudil 組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 3組大鼠不同時(shí)點(diǎn)體重的比較Table 2.Comparison of the rat body weight at different time poinits in the 3 groups（g.Mean±SD. n=15）

2 病理組織學(xué)觀察

在各個(gè)時(shí)點(diǎn)亞組中，乳鼠的腦組織均可見(jiàn)到不同程度的腦組織水腫，細(xì)胞壞死缺失，選擇72 h來(lái)具體觀察腦組織的變化。光鏡下假手術(shù)組左右腦室等大，細(xì)胞層次分明，排列緊密，腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，染色清晰（圖1A、D）；PVL 組（圖1B、E）和PVL+fasudil 組（圖1C、F）可見(jiàn)雙側(cè)腦室不等大，左側(cè)腦室明顯擴(kuò)大，腦白質(zhì)細(xì)胞排列明顯稀疏紊亂，細(xì)胞水腫樣變，細(xì)胞間間質(zhì)松散甚至缺失，小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)。PVL組可見(jiàn)明顯軟化灶，提示PVL+fasudil 組相對(duì)于PVL組病理改變較輕。

Figure 1.Pathological changes of brain tissues in neonatal rats of the 3 groups at 72 h（HE staining）.A，D：sham group；B，E：PVL group；C，F(xiàn)：PVL+fasudil group.A～C：×40；D～F：×200.圖1 72 h時(shí)點(diǎn)3組乳鼠腦組織病理變化

3 Western blot 檢測(cè) ROCK2和NF-κB P65 蛋白表達(dá)水平的變化

PVL 組乳鼠腦組織中ROCK2 表達(dá)較PVL+fasudil 組明顯上調(diào)，12、24和48 h 時(shí)點(diǎn)兩組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖2；在24和48 h時(shí)點(diǎn)檢測(cè)NF-κB P65 的表達(dá)情況，結(jié)果顯示PVL 組相對(duì)PVL+fasudil 組和假手術(shù)組表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），見(jiàn)圖3。

Figure 2.The protein expression level of ROCK2.p：PVL；pf：PVL+fasudil.Mean±SD. n=15. *P＜0.05 vs pf group.圖2 ROCK2蛋白表達(dá)水平的比較

4 RT-qPCR法檢測(cè)ROCK2的mRNA表達(dá)水平

PVL 組和PVL+fasudil 組 ROCK2 的 mRNA 表 達(dá)相對(duì)假手術(shù)組上調(diào)，在24和48 h時(shí)點(diǎn)PVL組和PVL+fasudil 組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同組ROCK2 mRNA表達(dá)隨時(shí)間的延長(zhǎng)呈先升高后降低的趨勢(shì)，在早期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）且PVL+fasudil組升高較PVL組滯后，見(jiàn)表3。

5 神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià)

在連續(xù)30 d 的觀察期，PVL 組乳鼠出現(xiàn)不同程度的行動(dòng)遲緩，左右肢體運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，左眼睜眼時(shí)間較假手術(shù)組延長(zhǎng)，生長(zhǎng)遲緩甚至偏癱等表現(xiàn)；PVL+fasudil 組同樣出現(xiàn)左右肢體運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，但未見(jiàn)明顯偏癱，左眼睜眼時(shí)間延長(zhǎng)，體重增加相對(duì)PVL 組快。懸吊實(shí)驗(yàn)中假手術(shù)組大鼠懸吊于玻璃棒的時(shí)間長(zhǎng)于 PVL 組及 PVL+fasudil 組，PVL+fasudil 組大鼠懸吊于玻璃棒的時(shí)間比PVL 組長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；斜坡實(shí)驗(yàn)中，PVL 組及PVL+fasudil 組轉(zhuǎn)頭所需時(shí)間均長(zhǎng)于假手術(shù)組，但兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性（P＞0.05）；圓桶實(shí)驗(yàn)中，假手術(shù)組大鼠左右肢體觸碰圓桶壁次數(shù)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，而PVL 組及PVL+fasudil 組大鼠左右肢體出現(xiàn)不協(xié)調(diào)，左腿觸及桶壁次數(shù)多于右腿，見(jiàn)表4。

Figure 3.The protein expression level of P65.p：PVL；pf：PVL+fasudil.Mean±SD. n=15. *P＜0.05 vs pf group；#P＜0.05 vs sham group.圖3 P65蛋白表達(dá)水平的比較

表3 RT-qPCR檢測(cè)ROCK2的mRNA表達(dá)水平Table 3.The mRNA expression of ROCK2 detected by RT-qPCR（Mean±SD. n=15）

表4 3組大鼠圓桶實(shí)驗(yàn)分析比較和神經(jīng)行為學(xué)評(píng)估Table 4.The comparison of rats in 3 groups with drums experiments and assess of neuroethology（Mean±SD. n=15）

討 論

1 模型可行性

基于早產(chǎn)兒的發(fā)育特點(diǎn)，Back 等［11］用出生后2日齡大鼠，通過(guò)左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎，置于6% O2和94%N2混合氣體的低氧艙內(nèi)4 h，制作了缺血缺氧PVL 模型，經(jīng)大量研究證實(shí)該模型具有早產(chǎn)兒PVL的特征性改變。近幾年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)對(duì)該模型進(jìn)行不同程度的改良，制作了各有利弊的PVL 模型，盡管如此，目前也尚無(wú)早產(chǎn)兒PVL 模型的金標(biāo)準(zhǔn)。本研究基于目前國(guó)內(nèi)外的PVL模型［12-13］，選擇日齡與早產(chǎn)兒PVL 的發(fā)病胎齡相對(duì)應(yīng)的大鼠，行左側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎，然后再缺氧2.5 h，通過(guò)相對(duì)減少乳鼠腦血供、適當(dāng)縮短缺氧時(shí)間、加強(qiáng)造模過(guò)程中對(duì)乳鼠的保溫措施及縮短結(jié)扎頸總動(dòng)脈時(shí)間，從一定程度上降低了乳鼠死亡率，為成功建立PVL 模型奠定了基礎(chǔ)。該模型病理生理改變與文獻(xiàn)報(bào)道［12-13］相符，表明本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭谱鞒晒Α?/p>

2 fasudil對(duì)PVL大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用

在新生兒領(lǐng)域，國(guó)內(nèi)學(xué)者［9，14-15］研究發(fā)現(xiàn) fasudil通過(guò)抗炎、下調(diào)髓鞘抑制因子表達(dá)等作用對(duì)新生大鼠缺血缺氧性腦損傷起到神經(jīng)修復(fù)作用，但尚未見(jiàn)fasudil 在早產(chǎn)兒PVL 中的相關(guān)研究報(bào)道。結(jié)合在早產(chǎn)兒PVL 中，少突膠質(zhì)前體細(xì)胞（oligodendrocyte precursor cells，OPCs）為主要靶細(xì)胞，在各種病理性因素下，OPCs 增殖分化障礙，最終導(dǎo)致髓鞘形成障礙［16-17］，因此 fasudil 很有可能通過(guò)抑制 Rho/ROCK 通路的活化而逆轉(zhuǎn)其介導(dǎo)的病理過(guò)程，從而促進(jìn)OPCs的增殖分化，起到神經(jīng)保護(hù)作用。為明確這一推測(cè)，本實(shí)驗(yàn)采取建立PVL 大鼠模型后進(jìn)行30d 的神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)，從功能上研究其神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PVL+fasudil 組相對(duì)于PVL 組腦組織水腫壞死改變相對(duì)要輕，表明fasudil 具有減輕缺血缺氧導(dǎo)致的腦損傷的作用；經(jīng)過(guò)30 d 的動(dòng)態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)PVL+fasudil 組大鼠相對(duì)PVL 組大鼠精神狀態(tài)較好，飲食和活動(dòng)較多，但睜眼時(shí)間相對(duì)假手術(shù)組仍出現(xiàn)延遲。參照石晶［18］的方法于術(shù)后30d 對(duì)3 組大鼠進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)檢測(cè)。懸吊實(shí)驗(yàn)及斜坡實(shí)驗(yàn)可檢查大鼠隨意運(yùn)動(dòng)功能，圓桶試驗(yàn)可檢查動(dòng)物肢體運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性［19］。本研究結(jié)果提示，PVL+fasudil 組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分高于PVL 組，表明fasudil 很大程度上能改善大鼠PVL的遠(yuǎn)期神經(jīng)行為。

3 Rho/ROCK和NF-КB P65通路與PVL的關(guān)系

Rho/ROCK 信號(hào)通路受多種外界信號(hào)刺激活化后，可與細(xì)胞內(nèi)的鈣離子通道偶聯(lián)，最終使胞漿內(nèi)肌球蛋白輕鏈（myosin light chain，MLC）磷酸化水平上升，細(xì)胞骨架蛋白活化［20-21］。NF-κB 是細(xì)胞內(nèi)介導(dǎo)信號(hào)傳遞的快反應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子，常以P65-P50二聚體的形式存在，與抑制物IκB（inhibitor of NF-κB）結(jié)合而呈非活化性狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)Rho/ROCK 通路活化后通過(guò)介導(dǎo)P38 MAPK 通路，使肌動(dòng)蛋白磷酸化，最終介導(dǎo)P65-P50 二聚體從細(xì)胞漿轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核［22-23］，與相應(yīng)基因上的NF-κB 位點(diǎn)特異性結(jié)合，從而啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮生物效應(yīng)，參與炎性反應(yīng)的病理生理過(guò)程，NF-κB是Rho/ROCK下游的重要效應(yīng)分子。

在缺氧缺血所致的腦白質(zhì)軟化模型中，缺氧缺血后機(jī)體啟動(dòng)防御機(jī)制，激活Rho及Rho/ROCK 信號(hào)通路，并依次激活其下游分子NF-κB P65，NF-κB P65 作為Rho/ROCK 的重要效應(yīng)分子，被活化后迅速轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核內(nèi)，從而啟動(dòng)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，誘發(fā)神經(jīng)炎癥風(fēng)暴，進(jìn)而加劇腦損傷［24］。本研究結(jié)果顯示，fasudil 干預(yù)組ROCK2 的表達(dá)較PVL 組明顯下調(diào)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），因此我們認(rèn)為PVL 新生大鼠在缺氧缺血后進(jìn)行fasudil 干預(yù)，可有效抑制ROCK2 的表達(dá)。同時(shí)基于PVL 新生大鼠腦組織中ROCK2 于 24和48 h 表達(dá)明顯上調(diào)，重點(diǎn)討論 24 和48 h 時(shí)點(diǎn)P65 的表達(dá)情況。結(jié)果顯示PVL 組中P65在24和48 h較假手術(shù)組表達(dá)上調(diào)，PVL+fasudil組中P65在24 h表達(dá)較假手術(shù)組上調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這些結(jié)果提示 ROCK2和NF-κB P65作為Rho/ROCK 信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子參與了新生大鼠腦白質(zhì)損傷的病理生理過(guò)程，fasudil 通過(guò)抑制這一通路而起作用。

綜上所述，大鼠PVL 中Rho/ROCK 通路過(guò)度活化，fasudil 具有神經(jīng)保護(hù)作用，這種保護(hù)作用可能是通過(guò)阻斷Rho/ROCK 信號(hào)通路活化，抑制NF-κB P65通路，抑制缺氧缺血后啟動(dòng)的炎癥損傷，從而減輕PVL新生大鼠腦損傷，改善遠(yuǎn)期神經(jīng)功能。