劉 洋 ，趙文靜 ，2，沈 斐 ，戴慧俊 ，朱 峰 ，董京萍 ，金唯新 ，紀(jì)兆林 *

（1.揚(yáng)州大學(xué)園藝與植物保護(hù)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225009；2.連云港市農(nóng)業(yè)科學(xué)院果林研究室，江蘇連云港 222000；3.無錫市惠山區(qū)陽(yáng)山鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，江蘇無錫 214155；4.無錫太湖陽(yáng)山水蜜桃科技有限公司，江蘇無錫 214156）

桃細(xì)菌性穿孔?。╬each bacterial shot hole）是由樹生黃單胞李致病變種（Xanthomonas arboricolapv.pruni，Xap）侵染引起、危害桃樹的重要病害之一，在世界范圍內(nèi)廣泛分布和傳播[1-2]。該病害還危害李樹[3]、杏樹[4]、櫻桃[5]等核果類果樹以及扁桃[6]等，在我國(guó)南、北方產(chǎn)區(qū)均普遍發(fā)生，在沿江河湖海等地區(qū)以及多雨年份嚴(yán)重發(fā)生。該病主要為害桃樹葉片，也能為害枝條和果實(shí)，造成早期落葉，減弱樹勢(shì)，影響商品果率，降低品質(zhì)[7-9]。近年來，桃樹種植面積大量增加，桃細(xì)菌性穿孔病發(fā)生日益嚴(yán)重，有的桃園大暴發(fā)或大流行，導(dǎo)致減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)，帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響桃產(chǎn)業(yè)健康和可持續(xù)發(fā)展。目前可用于防治該病的藥劑很少，且防效參差不齊、不理想。因此，筆者通過室內(nèi)藥劑毒力測(cè)定和田間試驗(yàn)，以篩選出生產(chǎn)上用于桃細(xì)菌性穿孔病防治的有效化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥，為桃細(xì)菌性穿孔病高效、低毒防治提供技術(shù)支持，也為化學(xué)和生物農(nóng)藥復(fù)配防治奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

桃細(xì)菌性穿孔病菌（Xanthomonas arboricolapv.pruni,Xap）9-6，為揚(yáng)州大學(xué)園藝與植保學(xué)院實(shí)驗(yàn)室保存的菌株，試驗(yàn)前于NB培養(yǎng)基上活化和培養(yǎng)。

1.2 供試藥劑

選取用于室內(nèi)毒力測(cè)定的藥劑均為登記可用于細(xì)菌病害防治的殺細(xì)菌劑，以及報(bào)道具有細(xì)菌抑制作用的廣譜殺菌劑或一些產(chǎn)區(qū)用于細(xì)菌病害防治的藥劑，如異菌脲和乙蒜素等。在室內(nèi)毒力測(cè)定基礎(chǔ)上選擇抑菌作用較好的藥劑進(jìn)行田間防治試驗(yàn)。

用于室內(nèi)毒力測(cè)定的化學(xué)農(nóng)藥原藥有：98%溴菌腈，江蘇托球農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn)；97%異菌脲，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；50%辛菌胺，江蘇東寶農(nóng)化股份有限公司；96%噻唑鋅，湖北康寶泰精細(xì)化工有限公司；96%喹啉銅、96%葉枯唑，山東德睿商貿(mào)有限公司。用于室內(nèi)毒力測(cè)定的化學(xué)農(nóng)藥制劑有：3%噻霉酮可濕性粉劑（WP），陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司；80%波爾多液可濕性粉劑（WP），通州正大農(nóng)藥化工有限公司；20%噻菌銅懸浮劑（SC），浙江龍灣化工有限公司；50%氯溴異氰尿酸可溶粉劑（SP），河南銀田精細(xì)化工有限公司；57.6%氫氧化銅水分散粒劑（WG），澳大利亞紐發(fā)姆有限公司。

用于室內(nèi)毒力測(cè)定的生物農(nóng)藥制劑有：0.3%梧寧霉素水劑（AS），遼寧微科生物工程股份有限公司；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素可溶粉劑（SP），華北制藥河北華諾有限公司；2%春雷霉素可濕性粉劑（WP），青島泰生生物科技有限公司；80%乙蒜素乳油（EC），河南科邦化工有限公司；12%中生菌素可濕性粉劑（WP），福建凱立生物制品有限公司；8%寧南霉素水劑（AS），德強(qiáng)生物股份有限公司；0.3%丁子香酚可溶液劑（SL），南通神雨綠色藥業(yè)有限公司。

在室內(nèi)毒力測(cè)定基礎(chǔ)上，選擇用于田間防治試驗(yàn)的藥劑包括50%氯溴異氰尿酸SP，河南銀田精細(xì)化工有限公司；0.3%梧寧霉素AS，遼寧微科生物工程股份有限公司；72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP，華北制藥河北華諾有限公司；20%噻唑鋅SC，美國(guó)瑞邦國(guó)際集團(tuán)（中國(guó)）生物科技有限公司；3%中生菌素WP，福建凱立生物制品有限公司；25%溴菌腈WP，江蘇托球農(nóng)化股份有限公司；3%噻霉酮WP，陜西西大華特科技實(shí)業(yè)有限公司；33.5%喹啉銅SC，浙江海正化工股份有限公司。

1.3 室內(nèi)毒力測(cè)定

原藥用丙酮溶解，制劑用無菌水溶解，溶解后用無菌水稀釋配置成10 g/L藥劑母液。將各藥劑母液用無菌水稀釋，配置成所需梯度濃度藥液。采用牛津杯擴(kuò)散法測(cè)定各梯度藥液對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的抑菌效果。配制雙層平板，平板表面晾干后，取病菌菌液150 μL（1×108cfu/mL）均勻涂平板，將牛津杯放置在平板中央，其中加入100 μL待測(cè)藥液，于28℃培養(yǎng)16 h后測(cè)量抑菌圈直徑，每個(gè)濃度藥劑處理重復(fù)3次，并設(shè)清水作為對(duì)照。

按式（1）計(jì)算不同濃度藥劑的抑制率。

同時(shí)配置含不同梯度濃度的各藥劑平板，采用病菌平板劃線法，確定各藥劑對(duì)病菌的最低抑菌濃度（MIC）。將藥劑不同濃度的抑制率轉(zhuǎn)換為機(jī)率值，濃度轉(zhuǎn)換為對(duì)數(shù)值，以抑制率機(jī)率值為縱坐標(biāo)（y），濃度對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)（x），用DPS軟件分析計(jì)算出各藥劑對(duì)病菌的毒力回歸方程、EC50值等。

1.4 田間小區(qū)防治試驗(yàn)

根據(jù)室內(nèi)毒力測(cè)試結(jié)果，田間小區(qū)試驗(yàn)選用毒力較好的氯溴異氰尿酸、梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素、噻唑鋅、中生菌素、溴菌腈以及噻霉酮和喹啉銅等藥劑。試驗(yàn)地設(shè)在江蘇省無錫市惠山區(qū)陽(yáng)山鎮(zhèn)寺前村10年生桃園，品種為“柳條白鳳”。藥劑施藥劑量根據(jù)藥劑包裝袋上的推薦用量濃度及生產(chǎn)上防治細(xì)菌病害的用量范圍綜合設(shè)置。試驗(yàn)處理：0.3%梧寧霉素AS（有效成分含量3.75 mg/L）、72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP（有效成分含量240 mg/L）、3%中生菌素WP（有效成分含量50 mg/L）、20%噻唑鋅SC（有效成分含量400 mg/L）、50%氯溴異氰尿酸SP（有效成分含量333.33 mg/L）、25%溴菌腈WP（有效成分含量250 mg/L）、3%噻霉酮WP（有效成分含量20mg/L）、33.5%喹啉銅SC（有效成分含量223.33 mg/L）以及清水對(duì)照。每試驗(yàn)處理3個(gè)小區(qū)（重復(fù)），每小區(qū)3棵桃樹，共27個(gè)小區(qū)（重復(fù)）。桃樹大小一致，各小區(qū)隨機(jī)排列，并插地牌。桃樹落花后開始施藥，連續(xù)噴施4次，每次間隔14 d左右。

本次試驗(yàn)分別于最后1次施藥后5、13 d進(jìn)行病情調(diào)查，調(diào)查所有試驗(yàn)桃樹，每棵桃樹調(diào)查10根新梢上的全部葉片。按東、南、西、北、中方向，每個(gè)方位隨機(jī)調(diào)查2根新梢。分級(jí)方法（以葉片為單位）為0級(jí)：葉片上無細(xì)菌性穿孔病斑；1級(jí)：葉片上病斑極少，不足5%葉面積；3級(jí)：葉片上病斑較少，占6%～10%葉面積；5級(jí)：葉片上病斑較多，占11%～25%葉面積；7級(jí)：葉片上病斑較重，占26%～50%葉面積；9級(jí)：葉片上病斑很多很重，占50%以上葉面積。病葉率、病情指數(shù)、病葉防效、病指防效，按式（2）～（5）計(jì)算。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力

由表1可見，化學(xué)農(nóng)藥中氯溴異氰尿酸對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力最強(qiáng)，EC50值為0.055 9 mg/L，最小抑菌濃度為27 mg/L；噻唑鋅的EC50值為0.116 6 mg/L，毒力次之；再者是溴菌腈、噻霉酮和喹啉銅，對(duì)應(yīng)的EC50值分別為1.528 7、2.171 6和3.031 5 mg/L。葉枯唑、氫氧化銅對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力較差，EC50分別接近100 mg/L和達(dá)到400 mg/L以上，而噻菌銅對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌完全沒有抑制作用。

表1 化學(xué)殺菌劑對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力

由表2可知，在供試的生物農(nóng)藥中，梧寧霉素和農(nóng)用硫酸鏈霉素對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力最強(qiáng)，EC50值分別為0.065 1、0.069 8 mg/L；中生菌素的毒力次之，EC50值為1.242 2 mg/L；乙蒜素的毒力很差，EC50值超過了500 mg/L。梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素和中生菌素完全抑制病菌的最低抑菌濃度分別為12.500 0、38.880 0和14.343 8 mg/L，而丁子香酚則對(duì)病菌沒有抑制作用。

表2 生物農(nóng)藥對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力

2.2 不同藥劑對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病的田間防效

田間小區(qū)試驗(yàn)表明，除3%噻霉酮WP的防治效果較差外，其他試驗(yàn)藥劑對(duì)細(xì)菌性穿孔病都有較好的防效。第4次藥后5 d的病葉防效為45.88%～93.20%，病指防效為56.15%～94.73%，其中20%噻唑鋅SC的防效最好（病葉和病指防效均在90%以上）；其次是25%溴菌腈WP、33.5%喹啉銅SC，3%中生菌素WP和0.3%梧寧霉素AS。藥后13 d的病葉防效為44.13%～91.38%，病指防效為56.41%～93.84%，其中72%農(nóng)用硫酸鏈霉素SP防效最好，其次是0.3%梧寧霉素AS、33.5%喹啉銅SC、3%中生菌素WP和50%氯溴異氰尿酸SP（表3）。此外，20%噻唑鋅SC和25%溴菌腈WP藥后13 d的防效明顯低于其藥后5 d的防效，而50%氯溴異氰尿酸SP和33.5%喹啉銅SC的防效較穩(wěn)定。

表3 不同藥劑對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病的田間防效

3 結(jié)論與討論

毒力測(cè)定表明，化學(xué)農(nóng)藥氯溴異氰尿酸、生物農(nóng)藥梧寧霉素和農(nóng)用硫酸鏈霉素對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力強(qiáng)，EC50值分別為0.055 9、0.065 1和0.069 8 mg/L；其次是噻唑鋅，EC50值為0.116 6 mg/L；而中生菌素、溴菌腈、噻霉酮和喹啉銅對(duì)病菌也有較好的抑制作用?；瘜W(xué)農(nóng)藥氫氧化銅、葉枯唑、波爾多液以及生物農(nóng)藥乙蒜素、寧南霉素的抑菌效果較差，EC50值均超過50 mg/L。丁子香酚和噻菌銅對(duì)病菌沒有抑制作用，前者可能具有誘導(dǎo)抗病作用，而后者具有雙重殺菌機(jī)理。噻唑基團(tuán)和銅離子都對(duì)細(xì)菌有較好的防治作用[10]，但對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌無抑菌活性還需進(jìn)一步研究。一般含銅制劑都是植物細(xì)菌性病害的首選防治藥劑，由于生產(chǎn)上含銅制劑的頻繁使用，已出現(xiàn)了桃細(xì)菌性穿孔病菌等植物病原細(xì)菌的銅耐受性和抗性[11-12]，本研究氫氧化銅對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的抑菌作用較差（EC50值為425.751 7 mg/L），而噻菌銅則對(duì)病菌沒有抑菌活性，這或許與桃細(xì)菌性穿孔病菌中銅耐受性或抗性有關(guān)，其中可能存在其他機(jī)制，并不是Xanthomonas中的copLAB基因簇決定的[11]。

田間小區(qū)防治試驗(yàn)表明，氯溴異氰尿酸、噻唑鋅、喹啉銅、溴菌腈等化學(xué)農(nóng)藥，梧寧霉素、農(nóng)用硫酸鏈霉素、中生菌素等生物農(nóng)藥對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病都有較好的防治效果，藥后5d的病葉防效為45.88%～93.2%，藥后13 d的病葉防效為44.13%～91.38%。50%氯溴異氰尿酸SP對(duì)水稻白葉枯病和細(xì)菌性條斑病[13]、水稻細(xì)菌性基腐病[14]、黃瓜細(xì)菌性角斑病[15]、月季根癌病[16]等都有較好或一定的防治效果。氯溴異氰尿酸低毒、易分解，具有內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，溶于水后能釋放出次溴酸和次氯酸，具有殺滅細(xì)菌和真菌的能力，釋放后形成的三嗪二酮和均三嗪仍有較強(qiáng)的殺菌作用。此外，50%氯溴異氰尿酸SP的生產(chǎn)原料富含尿素、鉀鹽及微量元素群，也具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用[16]。因此在桃細(xì)菌性穿孔病防治上可考慮使用氯溴異氰尿酸。梧寧霉素（又稱四霉素）是一種高效低毒、內(nèi)吸的農(nóng)用抗生素，對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌均有極強(qiáng)的殺滅作用，對(duì)柑橘潰瘍病菌[17]、煙草青枯病菌[18]具有較強(qiáng)的毒力，對(duì)白菜軟腐病也有較好的防效[19]，因此也可用于桃細(xì)菌性穿孔病的防治。農(nóng)用硫酸鏈霉素對(duì)桃細(xì)菌性穿孔病菌的毒力及田間防效均較好，但已不再登記及續(xù)展，不能再用于細(xì)菌病害的防治。本研究篩選出來的生物農(nóng)藥梧寧霉素及中生菌素或可替代農(nóng)用硫酸鏈霉素應(yīng)用于田間植物細(xì)菌病害的防治。因此，氯溴異氰尿酸、梧寧霉素、噻唑鋅、中生菌素、喹啉銅、溴菌腈等農(nóng)藥在桃細(xì)菌性穿孔病防治上具有較好的應(yīng)用前景。因筆者只采用一種濃度進(jìn)行桃細(xì)菌性穿孔病田間防治試驗(yàn)，所以在這些藥劑的劑量、使用時(shí)間和次數(shù)以及這些藥劑的組合等方面還需要進(jìn)一步試驗(yàn)和探索，同時(shí)這些化學(xué)農(nóng)藥和生物農(nóng)藥的復(fù)配也需進(jìn)一步研究，以減少化學(xué)農(nóng)藥的使用。