鄭翠玲,李博偉,程焱,崔巍

(國家癌癥中心&國家腫瘤臨床醫(yī)學(xué)研究中心&中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院腫瘤醫(yī)院檢驗科，北京 100021)

全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果為臨床疾病診斷和治療提供重要的參考依據(jù)，可以應(yīng)用全自動血細(xì)胞分析流水線進(jìn)行靜脈血檢測，具有速度快、精密度高、操作簡單、報告時間短等優(yōu)點(diǎn)。合格的靜脈血標(biāo)本是保證其結(jié)果準(zhǔn)確性的前提。在日常工作中，由于采樣困難或采樣不規(guī)范而導(dǎo)致標(biāo)本不合格的情況頻繁發(fā)生，其中采血量不足是重要原因之一[1-3]。大量研究表明，采血量不足會對凝血項目、臨床生化檢驗項目結(jié)果產(chǎn)生影響，但關(guān)于采血量影響全血細(xì)胞分析結(jié)果的研究少見。本研究通過評估靜脈血樣本量對全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的影響，制定本實驗室全血細(xì)胞分析可接受的樣本量。

1 材料與方法

1.1研究對象 以2018年8月于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤醫(yī)院就診的20例健康志愿者為研究對象，排除1例采血不順利，1例標(biāo)本溶血，1例采血量不符合要求后，共入選17例健康志愿者，其中男9例，女8例，年齡(35.0±8.0)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：自覺健康，近期未曾手術(shù)或服用藥物，近期未曾獻(xiàn)血、輸血或大量失血，無慢性理化損傷(如長期暴露于電離輻射環(huán)境)或長期接觸化學(xué)物質(zhì)(苯等)，女性無月經(jīng)量過多、未處于妊娠或哺乳期。排除標(biāo)準(zhǔn)：血液系統(tǒng)疾病(貧血、白血病、血小板異常疾病等)，心腦血管疾病(心肌梗死、高血壓、腦梗死等)，惡性腫瘤，呼吸系統(tǒng)疾病(肺結(jié)核、慢性阻塞性肺疾病等)，泌尿系統(tǒng)疾病(尿路感染、腎小球腎炎、腎病綜合征等)，消化系統(tǒng)疾病(腸炎、慢性腹瀉、消化性潰瘍等)。

1.2儀器與試劑 XN-9000全自動血細(xì)胞分析流水線及其配套的校準(zhǔn)物、質(zhì)控物和試劑(日本Sysmex公司)，2 mL乙二胺四乙酸二鉀(EATD-K2)真空采血管(美國BD公司)，一次性使用蝶翼式采血針(浙江康德萊公司)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 采血前，非標(biāo)準(zhǔn)量(1.8 mL、1.6 mL、1.4 mL、1.2 mL和1.0 mL)通過校準(zhǔn)的移液器吸取相應(yīng)體積的EDTA-K2抗凝血而確定。所有受檢者在晨起、空腹、靜息狀態(tài)下由經(jīng)驗豐富的采血人員用蝶翼式采血針采集標(biāo)準(zhǔn)量(2 mL)和非標(biāo)準(zhǔn)量抗凝血標(biāo)本。顛倒混勻后置于室溫，0.5～2 h內(nèi)完成檢測。

1.3.2全血細(xì)胞分析 標(biāo)本檢測前確保XN-9000全自動血細(xì)胞分析流水線使用狀態(tài)正常，室內(nèi)質(zhì)控在控，室間質(zhì)量評價合格。取上述17例健康志愿者不同采血量的標(biāo)本充分混勻后上機(jī)檢測，進(jìn)行全血細(xì)胞分析。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測白細(xì)胞(white blood cell，WBC)，采用鞘流阻抗法檢測紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)及血小板(platelet，PLT)，采用SLS血紅蛋白法檢測血紅蛋白(hemoglobin，Hb)。記錄全血細(xì)胞計數(shù)中的WBC、RBC、PLT、Hb、紅細(xì)胞比容(hematocrit，HCT)、平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscular volume，MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量(mean corpuscular hemoglobin，MCH)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC)共計8項結(jié)果。以2.0 mL采血量的全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)量組，將非標(biāo)準(zhǔn)量的結(jié)果與其進(jìn)行比較。

1.4數(shù)據(jù)分析 比較標(biāo)準(zhǔn)量和非標(biāo)準(zhǔn)量標(biāo)本的WBC、RBC、HCT、Hb、PLT、MCV、MCH和MCHC的相對偏差。WBC、RBC、HCT、Hb、PLT的相對偏差標(biāo)準(zhǔn)參照美國臨床實驗室改進(jìn)修正法案(CLIA′88)，規(guī)定允許誤差的1/2作為臨床允許誤差(WBC≤7.5%、RBC≤3.0%、HCT≤3.0%、Hb≤3.5%、PLT≤12.5%)；MCV、MCH、MCHC 的相對偏差標(biāo)準(zhǔn)則參照WS/T406-2012“臨床血液學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量要求”，以允許誤差為可接受標(biāo)準(zhǔn)(MCV≤3.5%、MCH≤3.5%、MCHC≤3.5%)[2]。各參數(shù)相對偏差符合率≥80%為臨床可接受。

2 結(jié)果

2.1不同樣本量全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果差異比較 不同樣本量全血細(xì)胞計數(shù)中的WBC、RBC、HCT、Hb、PLT、MCV、MCH和MCHC指標(biāo)結(jié)果見表1。非標(biāo)準(zhǔn)量標(biāo)本的各項指標(biāo)與2.0 mL標(biāo)準(zhǔn)量組相比，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。進(jìn)一步對不同采血量的全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果進(jìn)行組間兩兩比較，結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)。

表1 不同采血量的全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果之間的比較

2.2不同樣本量全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的相對偏差符合率 不同采血量的WBC、RBC、Hb、HCT、PLT、MCV、MCH、MCHC結(jié)果的相對偏差符合率見表2。在所分析的8個參數(shù)中，PLT、MCV和MCH的相對偏差符合率最高，均達(dá)到100%；WBC、Hb、MCHC的相對偏差符合率較高；而RBC和HCT的相對偏差符合率較低。

表2 全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果相對偏差符合率(%)

3 討論

全血細(xì)胞分析應(yīng)盡可能使用靜脈穿刺方式采集樣本[3-4]。國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)推薦使用1.5～2.2 mg/mL 的EDTA-K2抗凝劑，標(biāo)準(zhǔn)采血量為2 mL，而“采血不足”最影響樣本穩(wěn)定性[5-6]。我院患者因放化療導(dǎo)致血管損傷、部分患者病情危重或老年患者自身靜脈狀態(tài)不佳等原因，經(jīng)常出現(xiàn)樣本量低于2 mL的情況。因此，實驗室制定可接受的樣本量對于保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和減少檢驗性失血具有重要的意義。

為了減少其他因素對全血細(xì)胞分析的影響，本研究采取了以下措施：(1)由同一名抽血人員進(jìn)行標(biāo)本采集；(2)使用同一批號的采血針和真空采血管；(3)由同一名檢測人員在XN-9000全血細(xì)胞分析流水線的同一個模塊上嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行檢測；(4)選擇健康志愿者而非患者，以排除疾病本身或治療措施對于全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的影響。本研究結(jié)果顯示，非標(biāo)準(zhǔn)量與標(biāo)準(zhǔn)量相比，全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，且其相對偏差均在臨床可接受范圍內(nèi)。國內(nèi)文獻(xiàn)對于靜脈血全血細(xì)胞分析樣本量的結(jié)論并不一致。章小紅[7]發(fā)現(xiàn)1.5 mL采血量與2 mL采血量的結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，0.5 mL和1.0 mL與2.0 mL采血量的MCV、PLT結(jié)果差異均有統(tǒng)計學(xué)意義； 0.5 mL和1.0 mL的負(fù)壓管其WBC、RBC、HGB和PLT的結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P≤0.01);去除負(fù)壓后0.5 mL管與2.0 mL管的MCV和PLT結(jié)果差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而張弛[8]在考慮0.5 mL采血量結(jié)果不精密度偏高以及對異常分析結(jié)果需要復(fù)查及復(fù)檢等因素后,建議臨床上使用1.0 mL采血量進(jìn)行全血細(xì)胞分析。本實驗室所使用的XN-9000全自動血細(xì)胞分析儀進(jìn)行全血細(xì)胞分析的必要樣本量為1 mL，結(jié)合本研究的結(jié)果，我們制定靜脈血最低采血量為1.0 mL，可接受樣本量為1.0～2.0 mL，<1.0 mL的標(biāo)本應(yīng)拒收。經(jīng)過2018年9月至今的臨床應(yīng)用，1.0～2.0 mL的樣本量對于全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的影響在臨床上是可以接受的。本研究也存在一些不足之處，如僅納入健康志愿者作為研究對象，而腫瘤及其他疾病的患者未納入，且研究例數(shù)相對較少。因此，后續(xù)應(yīng)擴(kuò)大樣本量，同時納入不同疾病類型的患者，進(jìn)一步研究不同疾病情況下不同采血量是否會對全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響，從而制定不同人群的全血細(xì)胞分析的可接受采血量。在不影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性的情況下，盡可能減少患者尤其是慢性疾病患者的檢驗性失血。綜上所述，采血量會影響靜脈血的全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果，制定本實驗的可接受樣本量及標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)，既可確保全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性，又可減少檢驗性失血。