張府君，郝晶晶，藥雅俊，甄會(huì)賢

(山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031)

金錢草的原植物為報(bào)春花科珍珠菜屬植物過(guò)路黃(LysimachiachristinaeHance)，藥用部位為全草[1]。又名過(guò)路黃、連線草、鏡面草。全草含槲皮素、山柰素等黃酮類化合物以及無(wú)機(jī)鹽多糖等成分。具有清熱解毒，抑菌[2]，抗血栓[3]，散瘀消腫，抗炎[4]，利濕退黃之功效，可用于熱淋，沙淋，尿澀作痛[5]等癥，因此其具有良好的藥用價(jià)值。但金錢草傳統(tǒng)藥材的使用需要進(jìn)行正確煎煮，不僅過(guò)程繁瑣，而且對(duì)煎煮器具、時(shí)間等都有要求，將藥材飲片制備成配方顆粒后可以省略自行煎煮(提取)過(guò)程，是一種使用方便、安全有效的制劑。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)金錢草配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究，為金錢草配方顆粒的標(biāo)準(zhǔn)化制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Waters 2695高效液相色譜儀，Waters 2998檢測(cè)器，Empower色譜工作站，美國(guó)沃特世公司；AB135-S電子天平(十萬(wàn)分之一)，瑞士METTLER公司；HANGPING FA2104型(萬(wàn)分之一天平)，上海精科；YC-015噴霧干燥機(jī)；SB-800DTD型超聲波清洗機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；硅膠G板(批號(hào)：20170626)，青島譜科分離材料有限公司；WD-9403C紫外儀，北京六一生物科技有限公司；RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮機(jī)器廠。

1.2 試劑與試藥

金錢草飲片(批號(hào)：160901)，河北智嘉藥業(yè)有限公司，經(jīng)甄會(huì)賢副教授鑒定均為《中國(guó)藥典》(2015版)收載品種；槲皮素對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)：100081-201610)、山柰素對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)：110861-201611)，中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇(批號(hào)：Lot No 161104290004)，瑞典歐森巴克化學(xué)公司；乙腈(批號(hào)：Lot No.12960217)，天津賽孚瑞科技有限公司；娃哈哈純凈水。其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 金錢草配方顆粒的制備工藝

稱取金錢草飲片適量，加水浸泡30 min，加熱回流提取兩次，每次1 h，第一次加水10倍，第二次加水8倍，濾出藥液，合并濾液。將濾液置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中60 ℃減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.10，噴霧干燥(參數(shù)：進(jìn)風(fēng)溫度200 ℃；出風(fēng)溫度60 ℃；進(jìn)樣流速5.0 mL/min)，即得。

2.2 薄層色譜鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備

取金錢草配方顆粒1 g，參照文獻(xiàn)[6]制備供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

分別稱取槲皮素、山柰素對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含槲皮素0.20 mg、山柰素0.10 mg的對(duì)照品溶液。

2.1.3 薄層色譜鑒別

照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取供試品溶液20 μL，槲皮素對(duì)照品5 μL，山柰素對(duì)照品20 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠 G 薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10:8:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105 ℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見圖1)。

圖1 金錢草配方顆粒薄層色譜板

2.2 含量測(cè)定[7]

(1)色譜條件。色譜柱：BDS HYPERSIL C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(60:40)；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

(2)對(duì)照品溶液的制備。取槲皮素對(duì)照品和山柰素對(duì)照品適量，加 80%甲醇制成每 1 mL各含槲皮素200 μg、山柰素100 μg的混合溶液，即得。

(3)供試品溶液的制備。取本品粉末0.5 g，精密稱定，參照文獻(xiàn)[1]制備供試品溶液。

(4)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀測(cè)定(對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次)，考察系統(tǒng)適用性，結(jié)果理論塔板數(shù)為2600(金錢草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求理論板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500)、重復(fù)性RSD=1.21%、分離度5.30、拖尾因子0.97、均符合要求(槲皮素、山柰素對(duì)照品、金錢草配方顆粒、金錢草飲片色譜圖見圖2～圖5)。

圖2 槲皮素對(duì)照品HPLC圖(1 槲皮素)

圖3 山柰素對(duì)照品HPLC圖(2 山柰素)

圖4 金錢草配方顆粒HPLC圖

圖5 金錢草飲片HPLC色譜圖

(5)樣品含量測(cè)定。分別精密吸取對(duì)照品溶液與3批供試品溶液各10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 含量測(cè)定結(jié)果

2.3 指紋圖譜的初步研究

2.3.1 流動(dòng)相的考察

本試驗(yàn)比較了甲醇-0.1%磷酸水與乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脫的方法。本試驗(yàn)對(duì)文獻(xiàn)資料的兩種流動(dòng)相進(jìn)行了考察。(1)甲醇(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脫(表2)，結(jié)果見圖6，此色譜條件下金錢草膏出峰，但出峰效果極差，且分離效果不好。(2)乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脫(表3)，結(jié)果見圖7，此色譜條件下供試品的色譜峰分離效果良好。故選擇表3的梯度洗脫條件，該條件下，供試品出峰，各成分達(dá)到基線分離，峰型對(duì)稱，分離效果較好。

表2 梯度洗脫條件

圖6 金錢草配方顆粒指紋圖譜(表2條件)

表3 梯度洗脫條件

圖7 金錢草配方顆粒HPLC圖(表3條件)

2.3.2 指紋圖譜的建立

色譜條件。色譜柱：BDS HYPERSIL C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脫(表3)，流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：360 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

參照物溶液的制備。取槲皮素對(duì)照品和山柰素對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1 mL各含槲皮素200 μg、山柰素100 μg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備。同2.2.2含量測(cè)定項(xiàng)下“供試品溶液的制備”。

測(cè)定法。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10 μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄60 min的色譜圖，即得。槲皮素、山柰素對(duì)照品，金錢草配方顆粒HPLC圖(見圖8～圖10)。

圖8 槲皮素參照物溶液HPLC圖

圖9 山柰素參照物溶液HPLC圖

圖10 金錢草配方顆粒HPLC指紋圖譜

3 結(jié) 論

薄層色譜鑒別以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(10:8:1)為展開劑，得到的薄層色譜圖斑點(diǎn)顯色清晰，分離良好，金錢草配方顆粒樣品與槲皮素、山柰素對(duì)照品在相應(yīng)位置顯相同顏色熒光斑點(diǎn)。含量測(cè)定試驗(yàn)中，在參考文獻(xiàn)[8]的基礎(chǔ)上，對(duì)流動(dòng)相中磷酸濃度以及甲醇、磷酸的不同比例進(jìn)行了對(duì)比，結(jié)果顯示當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液(60:40)時(shí)，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)均符合藥典規(guī)定，專屬性強(qiáng)，分離度好。指紋圖譜考察了甲醇-0.1%磷酸水和乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脫的方法，通過(guò)比較確定了用乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，初步確定了金錢草配方顆粒的HPLC指紋圖譜測(cè)定條件。

本文的薄層色譜鑒別法、含量測(cè)定和指紋圖譜建立的測(cè)定方法簡(jiǎn)便可行、準(zhǔn)確、快速，樣品處理及色譜條件簡(jiǎn)單，方法可靠?？捎糜诮疱X草配方顆粒的制備，為后期的制劑工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供參考。