楊宋一莎，聶詩(shī)明，劉藝瑩，余晗，劉艷菊，宋天寶

(1.湖北中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，武漢 430061；2.武漢大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，武漢 430071)

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤(rùn)腸滑腸功效，為臨床使用頻率最高的中藥之一。醋當(dāng)歸僅見(jiàn)于名老中醫(yī)用藥及古籍記載，醋制的意圖在清代《本草述鉤元》中記載：“如吐衄崩下藥中，須醋炒過(guò)，少少用之，多則反能動(dòng)血[1]。”清《本草必用》：“酒洗去節(jié)，入止血藥中醋炒。”古人認(rèn)為醋制緩當(dāng)歸辛烈之性而專(zhuān)于止血，為止血崩或治吐血可醋炒用之。醋當(dāng)歸飲片并未列入《中華人民共和國(guó)藥典》，筆者未見(jiàn)炮制工藝研究及相關(guān)現(xiàn)代研究，基于古代用藥經(jīng)驗(yàn)及中醫(yī)處方用藥需求，有必要對(duì)其探討開(kāi)展相關(guān)研究，以更好地傳承祖國(guó)醫(yī)學(xué)。筆者在本實(shí)驗(yàn)通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)法，以鞣質(zhì)、阿魏酸和揮發(fā)油含量為考察指標(biāo)，研究醋當(dāng)歸炮制工藝，以期為醋當(dāng)歸飲片生產(chǎn)企業(yè)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 安捷倫1260液相色譜儀(美國(guó) Agilent公司，UV檢測(cè)器)；HP色譜工作站 (美國(guó)Agilent公司)；BP121S分析天平(德國(guó)Sartorius公司，感量：0.1 mg)；BP211D分析天平(德國(guó)Sartorius公司，感量：0.01 mg)；PM PLUS 型紅外測(cè)溫儀 (美國(guó) Raytek 公司) ；C18色譜柱(Thermo，4.6 mm×250 mm，5 μm)；圓底燒瓶；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(SFG-02.500)；PTHW型普通恒溫電熱套；KQ-400KDB 型高功率數(shù)控超聲波清洗器 (江蘇昆山市超聲儀器有限公司)；CY-640型炒藥機(jī)(周口制藥機(jī)械廠(chǎng)有限公司，設(shè)備參數(shù)：50～180 kg·h-1，28 kW)。

1.2試藥 當(dāng)歸藥材{湖北天濟(jì)中藥飲片有限公司，經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室楊紅兵教授鑒定為傘形科植物當(dāng)歸[Angelicasinensis(Oliv.)Diels]的干燥根}。老陳醋[山西水塔醋業(yè)股份有限公司，濃度：6 g·(100 mL)-1]，阿魏酸對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：H27J7L16718)，沒(méi)食子酸對(duì)照品(上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)： YA0505YA14，20 mg，含量≥98%)，乙腈(色譜純，Thermo)，磷酸，超純水(優(yōu)普超純水器制備，UPCII-20T)，其余試劑均為分析純級(jí)別。

2 方法與結(jié)果

2.1因素水平的設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)與相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合實(shí)際，針對(duì)炮制工藝對(duì)飲片質(zhì)量的影響，主要因素為輔料用量、炮制時(shí)間、炮制溫度，因此選取醋用量、炒制溫度、炒制時(shí)間3個(gè)因素，進(jìn)行L9(34)正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)考察，以確定其合理炮制工藝條件參數(shù)。其因素水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

表1 因素水平

2.2實(shí)驗(yàn)方法 取凈當(dāng)歸片9 份，每份400 g，按表1設(shè)定組合條件，均用電熱炒藥機(jī)炒制，炒制溫度通過(guò)紅外測(cè)溫儀監(jiān)測(cè)控制鍋底溫度。具體操作方法如下： 取凈當(dāng)歸400 g，加醋拌勻，悶潤(rùn)1 h，炒制，取出，放涼，篩去碎屑，封口袋密封，即得1～9號(hào)樣品。

2.3檢測(cè)項(xiàng)目 根據(jù)中藥炮制存性的基本要求，當(dāng)歸為調(diào)血之要藥，現(xiàn)代研究表明其活血化瘀主要活性成分為阿魏酸、揮發(fā)油等，所含鞣質(zhì)則具有較確切的止血功能，因此，將阿魏酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)作為考察指標(biāo)，分析不同炮制條件的影響。

2.3.1鞣質(zhì)含量測(cè)定 將醋當(dāng)歸樣品粉碎，過(guò)三號(hào)篩(篩孔內(nèi)徑297 μm)，取粉末適量，精密稱(chēng)定，按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版(四部)通則2202測(cè)定鞣質(zhì)含量，同時(shí)進(jìn)行干酪素吸附空白實(shí)驗(yàn)，計(jì)算扣除空白值。結(jié)果見(jiàn)表 2。

2.3.2阿魏酸含量測(cè)定 將醋當(dāng)歸樣品粉碎，過(guò)三號(hào)篩(篩孔內(nèi)徑297 μm)，取粉末適量，精密稱(chēng)定，按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版(一部)當(dāng)歸項(xiàng)下含量測(cè)定法測(cè)定樣品阿魏酸含量。

2.3.3揮發(fā)油含量測(cè)定 將經(jīng)不同炮制方法處理的醋當(dāng)歸樣品粉碎，使能通過(guò)二號(hào)至三號(hào)篩(篩孔內(nèi)徑297 μm)，取粉末適量，稱(chēng)定質(zhì)量，按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版(四部)通則2204揮發(fā)油測(cè)定法乙法測(cè)定，讀取揮發(fā)油量，并計(jì)算醋當(dāng)歸中揮發(fā)油的含量(%)。

2.4評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 筆者在本實(shí)驗(yàn)采用多指標(biāo)加權(quán)評(píng)分法處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)：對(duì)應(yīng)每個(gè)成分以含量最高的樣品定為100分，其余各次的試驗(yàn)依次換算成相應(yīng)的指標(biāo)分?jǐn)?shù)(計(jì)算公式為a/b×100%，其中a為實(shí)際值，b為9個(gè)值中最大值)。權(quán)重的分配，鞣質(zhì)易與蛋白質(zhì)結(jié)合，使創(chuàng)傷組織表面形成痂膜，減少分泌與血漿滲出，其藥理作用表現(xiàn)為能在血管破損處形成硬塊而止血。鞣質(zhì)在內(nèi)服或外用時(shí)，均具有止血和收斂的功效[2]。研究報(bào)道止血功效與炮制后鞣質(zhì)含量增加呈正相關(guān)[3]。因此，將醋當(dāng)歸中鞣質(zhì)含量的權(quán)重設(shè)為60%；阿魏酸和揮發(fā)油作為當(dāng)歸的主要有效成分，且2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定其為評(píng)價(jià)當(dāng)歸質(zhì)量的指標(biāo)性成分，其作用與當(dāng)歸主要功效一致：阿魏酸具有抗炎、止痛、抗血栓形成等藥理作用[4-5]；當(dāng)歸揮發(fā)油的主要成分藁本內(nèi)酯，具有抗血栓、抑制血小板聚集、抗貧血、緩解平滑肌痙攣等作用[6-8]。因此各給予20%權(quán)重。

綜合質(zhì)量評(píng)分=(各樣品中揮發(fā)油含量/9個(gè)樣品中揮發(fā)油最高含量)×20%+ (各樣品中阿魏酸含量/9個(gè)樣品中阿魏酸最高含量)×20%+(各樣品中鞣質(zhì)含量/9個(gè)樣品中鞣質(zhì)最高含量)×60%。

2.5結(jié)果 揮發(fā)油、阿魏酸、鞣質(zhì)含量正交實(shí)驗(yàn)成分測(cè)定和評(píng)分結(jié)果見(jiàn)表2，正交綜合評(píng)分方差分析表見(jiàn)表3。

方差分析表明，3個(gè)影響因素順序?yàn)锽>A>C，在給定的水平條件下，即炒制溫度>醋用量>炒制時(shí)間，其中炒制溫度對(duì)炮制工藝的影響有顯著差異。結(jié)合直觀(guān)分析，優(yōu)選工藝可定為A3B1C2，即15%醋，在進(jìn)藥鍋溫為120 ℃下炒制6.5 min。

2.6驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按優(yōu)選的炮制工藝條件制備3批醋當(dāng)歸樣品，對(duì)其進(jìn)行揮發(fā)油、阿魏酸和鞣質(zhì)含量測(cè)定。綜合評(píng)分均值為95.33，且各指標(biāo)的RSD<0.5%(n=3)，說(shuō)明制備出的醋當(dāng)歸質(zhì)量穩(wěn)定，優(yōu)選出的工藝穩(wěn)定、可行、合理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。

2.7中試驗(yàn)證 取3批生當(dāng)歸各1.7 kg，按優(yōu)選的炮制工藝進(jìn)行中試試驗(yàn)，由于參數(shù)放大，藥材炒制效率降低，根據(jù)實(shí)際中試炒制情況，因已達(dá)到工廠(chǎng)所用儀器生產(chǎn)的批量要求，故將炒制時(shí)間延長(zhǎng)至13.5 min。結(jié)果見(jiàn)表5，綜合評(píng)分均值為96.21，且各指標(biāo)的RSD<1%(n=3)，說(shuō)明優(yōu)選的工藝能適合于工業(yè)化生產(chǎn)。見(jiàn)表5。

3 討論

鞣質(zhì)、阿魏酸和揮發(fā)油為當(dāng)歸理血功效的活性成分，且含量受炮制條件的影響。因此，筆者在正交實(shí)驗(yàn)中選擇鞣質(zhì)、阿魏酸和揮發(fā)油含量(均以干燥品計(jì)算)作為正交實(shí)驗(yàn)的主要評(píng)價(jià)指標(biāo)。評(píng)分采用各指標(biāo)當(dāng)次實(shí)驗(yàn)實(shí)際值占9次實(shí)驗(yàn)最高值的比值按百分制進(jìn)行打分，再通過(guò)不同權(quán)重進(jìn)行統(tǒng)合計(jì)分，經(jīng)統(tǒng)計(jì)得到優(yōu)選工藝，即醋當(dāng)歸的炮制工藝，確定為用15%醋，在120 ℃下炒制6.5 min。驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)和中試實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，優(yōu)選的炮制工藝條件制備的醋當(dāng)歸質(zhì)量穩(wěn)定，說(shuō)明優(yōu)選出的工藝穩(wěn)定、合理、可行。

表2 揮發(fā)油、阿魏酸、鞣質(zhì)含量正交實(shí)驗(yàn)成分測(cè)定和評(píng)分結(jié)果

表3 正交綜合評(píng)分方差分析

表4 揮發(fā)油、阿魏酸、鞣質(zhì)含量和綜合評(píng)分結(jié)果

表5 揮發(fā)油、阿魏酸、鞣質(zhì)中試含量和綜合評(píng)分結(jié)果

研究顯示，影響當(dāng)歸醋制效果的因素順序?yàn)槌粗茰囟?醋用量>炒制時(shí)間，其中醋當(dāng)歸的炒制溫度對(duì)炮制品質(zhì)量有顯著性影響，應(yīng)給予重視。炒制溫度導(dǎo)致?lián)]發(fā)性成分散失、阿魏酸含量減少、鞣質(zhì)類(lèi)成分增加，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9-10]。

本實(shí)驗(yàn)以鞣質(zhì)、阿魏酸和揮發(fā)油3項(xiàng)指標(biāo)加權(quán)評(píng)分醋當(dāng)歸的質(zhì)量，能較好地體現(xiàn)醋當(dāng)歸的質(zhì)量?jī)?nèi)涵，評(píng)級(jí)方法合理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。優(yōu)選的工藝為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。

醋當(dāng)歸的處方應(yīng)用已有較長(zhǎng)的歷史，但當(dāng)今僅見(jiàn)于少數(shù)名中醫(yī)的用藥經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)行中藥飲片缺乏該品種，更無(wú)醋當(dāng)歸的炮制方法和飲片標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)傳統(tǒng)炮制中藥特點(diǎn)就是通過(guò)炮制，從而達(dá)到改變藥性、擴(kuò)大用藥范圍的目的。鑒于目前對(duì)于醋制當(dāng)歸的炮制方法、炮制原理、臨床應(yīng)用等方面的研究不足，總結(jié)歷史用藥經(jīng)驗(yàn)，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)，開(kāi)展相關(guān)研究和探討，對(duì)傳承祖國(guó)醫(yī)學(xué)、傳承我國(guó)古代炮制經(jīng)驗(yàn)、炮制理論及豐富中醫(yī)臨床用藥具有重要意義。