馬春芳，張金東，馬 莉，張寶玉，戶曉靜，單于德

(寧夏張氏回醫(yī)正骨醫(yī)院，寧夏 銀川 750001)

“仁寶張氏”“生肌膏”是寧夏張氏回醫(yī)正骨家傳秘方，并在此基礎(chǔ)上，歷經(jīng)四代人的不斷總結(jié)和完善研制而成的傳統(tǒng)回藥膏劑，是由血竭、兒茶、赤石脂、乳香等幾味藥組成，具有行氣活血、化瘀止痛、祛腐生肌、收濕斂瘡之功效。為提高藥品的質(zhì)量控制要求，采用薄層色譜法鑒別張氏仁寶生肌膏中的血竭、兒茶，以期為其他制劑中血竭、兒茶的鑒別提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

XS205電子天平(梅特勒-托利多公司)；HH-SY21-Ni4電熱恒溫水浴鍋(北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠)；硅膠G薄層板[青島海洋化工廠生產(chǎn)，規(guī)格100 mm×100 mm，厚度0.20～0.25 mm，批號(hào)：20170212；煙臺(tái)化工工業(yè)研究所生產(chǎn)，規(guī)格100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批號(hào)：20171101]；預(yù)制硅膠H板薄層板[青島海洋化工廠生產(chǎn)，規(guī)格100 mm×100 mm，厚度0.20 mm～0.25 mm，批號(hào)：20170212；煙臺(tái)化工工業(yè)研究所生產(chǎn)，規(guī)格為100 mm×100 mm，厚度(0.20±0.03)mm，批號(hào)：20171101]；血竭對(duì)照藥材(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：960-9607)；兒茶素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120927-201714)；張氏仁寶生肌膏(寧夏張氏回醫(yī)正骨醫(yī)院提供，批號(hào) 20171201、20171202、20171203)；所用藥材購(gòu)自寧夏明德中藥飲片有限公司；所用試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 血竭的定性鑒別

2.1.1 供試品溶液制備 取本品30 g，加乙醇40 mL，置水浴上攪拌溶化，放冷，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用乙醚20 mL振搖提取，分取乙醚層，蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 另取血竭對(duì)照藥材0.01 g，加乙醇1 mL使溶解，作為對(duì)照藥材溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液制備 缺血竭的模擬處方陰性樣品由本院制劑室配制，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2 薄層定性鑒別

照薄層色譜法[1]試驗(yàn)，吸取“2.1.1”項(xiàng)下各溶液5 mL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(19∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.3 結(jié)果

供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，無相同顏色的斑點(diǎn)，見圖1。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察 取供試品3批，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備，吸取張氏仁寶生肌軟膏供試品溶液、血竭陰性對(duì)照溶液和血竭對(duì)照藥材溶液各5 μL，按“2.2”項(xiàng)下薄層色譜條件試驗(yàn)，結(jié)果陰性對(duì)照無干擾，見圖1。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.血竭對(duì)照藥材；5：張氏仁寶生肌膏血竭陰性樣品

2.4.2 耐用性 不同薄層板的比較：取青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制硅膠G板與煙臺(tái)化工工業(yè)研究所生產(chǎn)的預(yù)制硅膠G板，分別按上述方法試驗(yàn)，結(jié)果2種預(yù)制板無明顯差別，見圖2。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.血竭對(duì)照藥材；5.張氏仁寶生肌膏血竭陰性樣品

不同溫度比較：取點(diǎn)樣后的薄層板，分別在6℃和28℃中展開，置日光下檢視，斑點(diǎn)清晰。結(jié)果表明在6～28℃范圍內(nèi)試驗(yàn)，對(duì)鑒別無明顯影響，見圖3。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.血竭對(duì)照藥材

不同濕度比較：取點(diǎn)樣后的薄層板，分別在用硫酸調(diào)節(jié)相對(duì)濕度32%和88%的層析缸中展開，置日光下檢視，斑點(diǎn)清晰。結(jié)果表明在相對(duì)濕度32%～88%之間試驗(yàn)，對(duì)鑒別無明顯影響，見圖4。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.血竭對(duì)照藥材

經(jīng)上述方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明血竭的薄層色譜鑒別方法在方法學(xué)驗(yàn)證要求的變動(dòng)因素下對(duì)鑒別無明顯影響，且重現(xiàn)性良好，操作簡(jiǎn)便，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，陰性對(duì)照無干擾，證明此方法具有專屬性及可行性，適用于本品中血竭的鑒別。

2.5 兒茶的定性鑒別

2.5.1 溶液的制備 供試品溶液的制備：取本品10 g，加甲醇50 mL超聲30 min，放冷，濾過，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，取上清液，作為供試品溶液。對(duì)照品溶液的制備：另取兒茶素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。陰性對(duì)照溶液的制備：缺兒茶的模擬處方陰性樣品由本院制劑室配制，按供試品溶液的制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5.2 薄層定性鑒別 按照薄層色譜法[1]試驗(yàn)，吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，于日光下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.5.3 結(jié)果 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，無相同顏色的斑點(diǎn)，見圖5。

2.5.4 方法學(xué)驗(yàn)證 專屬性考察。取供試品3批，按“2.1”項(xiàng)方法制備各溶液，吸取供試品溶液、兒茶對(duì)照品溶液和兒茶陰性對(duì)照溶液各2 μL，按“2.2”項(xiàng)下的薄層色譜條件試驗(yàn)，結(jié)果陰性對(duì)照無干擾，見圖5。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.兒茶素對(duì)照品；5.張氏仁寶生肌膏兒茶陰性樣品

耐用性考察。不同薄層板的比較：取青島海洋化工廠生產(chǎn)的預(yù)制硅膠G板與煙臺(tái)化工工業(yè)研究所生產(chǎn)的預(yù)制硅膠H板，分別按“2.2”項(xiàng)下的薄層色譜條件試驗(yàn)，結(jié)果2種預(yù)制板無明顯差別，見圖6。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.兒茶素對(duì)照品

不同溫度的比較：取點(diǎn)樣后的薄層板，分別在6 ℃和28 ℃中展開，置日光燈下檢視，斑點(diǎn)清晰。結(jié)果表明在6～28 ℃范圍內(nèi)試驗(yàn)，對(duì)鑒別無明顯影響，見圖7。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.兒茶素對(duì)照品

不同濕度的比較：取點(diǎn)樣后的薄層板，分別在用硫酸調(diào)節(jié)相對(duì)濕度32%和88%的層析缸中展開，置日光燈下檢視，斑點(diǎn)清晰。結(jié)果表明在相對(duì)濕度32～88%之間試驗(yàn)，對(duì)鑒別無明顯影響，見圖8。

1.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171201；2.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171202；3.張氏仁寶生肌膏，批號(hào)20171203；4.兒茶素對(duì)照品

上述薄層色譜鑒別方法學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，本制劑兒茶的薄層色譜鑒別方法在方法學(xué)驗(yàn)證要求的變動(dòng)因素下對(duì)鑒別無明顯影響，且重現(xiàn)性良好，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，陰性對(duì)照無干擾，證明此方法具有專屬性及可行性，適用于本品中兒茶的鑒別。

3 討論

3.1 血竭

張氏仁寶生肌膏處方中以血竭、兒茶為君藥，《回回藥方》云：“‘檐木阿黑云’為阿拉伯語‘血竭’的音譯名，回藥用其散瘀定痛，止血生肌[2]。本實(shí)驗(yàn)采用乙醇溶解去除植物油基質(zhì)，再用水和乙醚萃取，棄去水相中水溶性成分，乙醚提取血竭有效成分[3]，提取率較好，所得溶液重現(xiàn)性好，可使其展開后顯色更為明顯。參照《中國(guó)藥典》[4]血竭項(xiàng)下以三氯甲烷-甲醇(19∶1)為展開劑，采用上行展開，結(jié)果表明展開情況好，各斑點(diǎn)分離良好，且主斑點(diǎn)Rf值適中。

3.2 兒茶

兒茶有清熱收濕、生肌作用，為生肌斂瘡之佳品[2]。其主要成分為兒茶素，屬于黃烷醇類化合物，在甲醇中溶解，故本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用甲醇超聲提取樣品中的有效成分，發(fā)現(xiàn)其提取效果良好。本實(shí)驗(yàn)參考文獻(xiàn)資料[5]中兒茶薄層鑒別的展開劑，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(6∶5∶0.8)為展開劑，采用上行展開方式，結(jié)果表明展開情況良好，各斑點(diǎn)分離良好，且主斑點(diǎn)Rf值適中。

4 結(jié)論

張氏仁寶生肌膏含有藥味較多，成分較復(fù)雜，且因基質(zhì)為植物油，制劑較為黏稠、流動(dòng)性差、不易稱取，提取較困難，在本實(shí)驗(yàn)中，通過有效的前處理，除去干擾雜質(zhì)，使薄層色譜分離效果好，并且設(shè)置陰性對(duì)照，用3批樣品實(shí)驗(yàn)確證，該方法專屬性強(qiáng)，血竭、兒茶中有效成分斑點(diǎn)清晰，易于判斷、重現(xiàn)性好，能反映該制劑的質(zhì)量，可用于該制劑的質(zhì)量控制。