藍(lán)夢柳,楊利利,嚴(yán)桂杰,朱懷昌,李小艷,許 文,2,,吳水生,
(1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,福建 福州 350122;2.福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心,福建 福州 350122)
澤瀉(Alisma orientale(Sam.) Juzep.)為澤瀉科澤瀉屬多年水生草本植物,首次作為藥物被記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[1],列為上品,曰“澤瀉,味甘,寒……”。漢末時(shí)期的《名醫(yī)別錄》[2]記:“生汝南池澤,五月、六月、八月采根,陰干,主補(bǔ)虛損……。葉,五月采,主治大風(fēng)……。實(shí),九月采。主治風(fēng)痹……”。明確澤瀉的根、葉、果實(shí)均可入藥。后《本草經(jīng)集注》[3]《新修本草》[4]《證類本草》[5]《本草綱目》[6]等均有澤瀉根、葉、果實(shí)入藥的記載,澤瀉食用的記錄始于明代《救荒本草》[7]“救饑采嫩葉煠熟水浸淘凈油鹽調(diào)食”。民國時(shí)期的《建甌縣志》[8]也有相關(guān)記載,“澤瀉藥品亦食品也,花出水面清潔可食”,也有文獻(xiàn)報(bào)道[9-10],澤瀉與香菇以淮揚(yáng)菜的烹飪方法做成藥膳,具有調(diào)節(jié)血脂和抗氧化延緩衰老的作用,還有澤瀉荷葉粥[11]、澤瀉茶[12]等具有降血脂功效的藥膳,可見澤瀉自古便有藥食兩用的基礎(chǔ),食用歷史久遠(yuǎn)且藥食種類豐富、功效獨(dú)特,是極佳的食療保健品。
藥典中收錄的澤瀉藥用部位為地下干燥塊莖,主要成分為三萜類和倍半萜類,現(xiàn)代研究表明澤瀉具有降血糖、降血脂、抗炎以及利尿[13-16]等功效,而澤瀉地上部分如花苔、嫩莖、葉則被用作蔬菜食用[17],與蓮籽、水蕹(各地通稱水空心菜)、仙人草共稱為“吉陽四寶”,目前國內(nèi)外學(xué)者對澤瀉的研究多集中于澤瀉塊莖的藥用[18-20],對澤瀉地上部分的研究鮮有報(bào)導(dǎo),藥理活性僅侯少偉等[21]探討了澤瀉苔對高脂血癥大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用和課題組前期對其抗氧化活性的研究[22],另有關(guān)于澤瀉花苔栽培技術(shù)和田間管理技術(shù)的研究[17,23-24],對其花苔營養(yǎng)成分、化學(xué)成分研究報(bào)道較少。蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸、多糖、黃酮和多酚是評價(jià)澤瀉營養(yǎng)成分的重要指標(biāo),而萜類成分則是澤瀉塊莖發(fā)揮藥效的主要活性成分。易醒等[25]依照國家標(biāo)準(zhǔn)對澤瀉梗的蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪含量進(jìn)行測定。課題組前期采用硫酸-苯酚法對澤瀉塊莖多糖含量進(jìn)行測定[26],但鮮見澤瀉地上部分含量的研究報(bào)導(dǎo),因此選用以上方法對澤瀉不同部位的營養(yǎng)成分含量進(jìn)行測定比較,前期研究表明澤瀉不同部位均具有抗氧化活性,而黃酮、多酚則是具有顯著抗氧化活性的指標(biāo),目前對于澤瀉不同部位黃酮、多酚含量比較鮮見相關(guān)研究。對于澤瀉萜類成分的測定,課題組前期積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)[27-29]。本實(shí)驗(yàn)選取倍半萜(環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇)和三萜類(澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、11-去氧澤瀉醇B)5 種代表性成分在澤瀉不同部位中的含量進(jìn)行比較,為闡明澤瀉地上部分的食用價(jià)值,探究澤瀉不同部位的營養(yǎng)成分及活性成分。本研究采集10 批食用期(花苔長30~40 cm,花為花蕾時(shí)采收[23])的澤瀉,對其蛋白、脂肪、氨基酸、多糖、黃酮和多酚及活性萜類成分含量進(jìn)行測定比較,以期為澤瀉地上部分后續(xù)的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。
澤瀉不同部位10 批樣品均采自福建澤瀉道地藥材基地建甌吉陽,其中食用期地上部分的取樣時(shí)間為澤瀉花苔抽苔期,地下塊莖取樣為同地塊澤瀉采收后的收獲期藥用澤瀉。經(jīng)過福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院范世明高級實(shí)驗(yàn)師鑒定,為澤瀉科植物澤瀉(Alisma orientale(Sam.)Juzep.),樣本存放于福建中醫(yī)藥大學(xué)生物醫(yī)藥研發(fā)中心標(biāo)本室。
澤瀉不同部位見圖1,澤瀉塊莖為澤瀉地下部分,削去表面根須,澤瀉地上部分從塊莖基部向上,莖為塊莖基部到與葉相連的長葉柄部分,澤瀉葉呈橢圓形至卵形,澤瀉花苔為地上部分抽生的花莖,以上部位均洗凈、烘干,粉碎并過80 目篩,置于4 ℃冰箱保存。
葡萄糖(批號SLBV7620) 美國Sigma公司;蘆丁(批號100080-201610)、沒食子酸(批號110831-201605)、23-乙酰澤瀉醇B(批號111846-201504)中國食品藥品檢定研究院;環(huán)氧澤瀉烯(批號MUST-14101616)、澤瀉醇B(批號MUST-17032208)、11-去氧澤瀉醇B(批號155073-73-7) 成都曼思特生物科技有限公司;澤瀉烯醇(批號87827-55-2) 昆明植物研究所云南西力生物技術(shù)股份有限公司;以上標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于98%。甲醇、乙腈(均為色譜純) 德國Merck公司;其余試劑均為分析純。
圖1 澤瀉不同部位Fig.1 Different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
UV-1800紫外分光光度計(jì) 日本島津公司;ACQUITY UPLC system超高效液相色譜儀 美國Waters公司;CPA225D型十萬分之一分析天平 德國Sartorius公司;KQ-500E臺式超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;FY135型中草藥粉碎機(jī) 天津市泰斯特儀器有限公司;Milli-Q超純水儀 美國Millipore公司。
1.3.1 總蛋白含量測定
參照GB 5009.5—2016《食品中蛋白質(zhì)的測定》(第一法)[30],稱取樣品粉末于消化管,再加入0.4 g硫酸銅、6 g硫酸鉀及20 mL硫酸于消化爐進(jìn)行消化。消化后于自動定氮儀進(jìn)行自動加液、蒸餾、滴定,記錄滴定數(shù)據(jù)。由福建省質(zhì)檢院委托檢測。
1.3.2 總脂肪含量測定
參照GB 5009.6—2016《食品中脂肪的測定》(第二法)[31],采用酸水解法測定脂肪含量,取樣品粉末加入鹽酸,70 ℃水浴消化,消化液加入10 mL乙醇轉(zhuǎn)移至具塞量筒,加入無水乙醚提取脂肪,將上清液轉(zhuǎn)移至稱量瓶,回收無水乙醚,干燥至恒質(zhì)量。由福建省質(zhì)檢院委托檢測。
1.3.3 氨基酸含量測定
參照GB 5009.124—2016《食品中氨基酸的測定》[32],水解管中加入樣品粉末、6 mol/L的鹽酸、苯酚,冷凍后抽真空并充入氮?dú)?,放入水解爐水解22 h,水解后干燥,用檸檬酸緩沖液溶解,0.22 μm濾膜過濾,注入氨基酸自動分析儀,以外標(biāo)法計(jì)算氨基酸濃度。由福建省質(zhì)檢院委托檢測。
1.3.4 總多糖含量測定
取樣品粉末,加入10 倍量水,超聲30 min,過濾,濾液加乙醇至80%,沉淀過夜。離心后將沉淀置于100 mL容量瓶,加水至刻度,搖勻,得到樣品溶液。參照文獻(xiàn)[26]的方法,以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品,用硫酸-苯酚法測定總多糖含量并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同法測定樣品多糖含量,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。
1.3.5 總黃酮含量測定
取1 g樣品粉末,加入25 mL甲醇,超聲30 min,過濾,取續(xù)濾液,得樣品溶液。參照文獻(xiàn)[33]的方法,以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品,測定總黃酮含量并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同法測定樣品黃酮含量,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。
1.3.6 總多酚含量測定
取1 g樣品粉末,加入25 mL 70%甲醇溶液,超聲30 min,過濾,取續(xù)濾液,得樣品溶液。參照GB/T 8313—2018《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》[34],以沒食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品,測定總多酚含量并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同法測定樣品多酚含量,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。
1.3.7 色譜條件
Syncronis aQ色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.7 μm);流動相:乙腈(B)-水(A),流速0.25 mL/min,柱溫35 ℃;進(jìn)樣量5 μL;梯度洗脫:0~2 min,68% A,32% B;2~2.5 min,45% A,55% B;2.5~6.5 min,27% A,73% B;6.5~9.5 min,21% A,79% B;9.5~15 min,21% A,79% B;15~18 min,10% A,90% B;18~18.1 min,68% A,32% B;18.1~21 min,68% A,32% B;檢測波長208 nm。
1.3.8 溶液的制備
1.3.8.1 對照品溶液的制備
取環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B對照品適量,精密稱定,加入50%乙腈溶液分別制備質(zhì)量濃度為0.408、0.400、1.004、0.99 mg/mL和1.056 mg/mL的單一對照品儲備液。將單一對照品制備成環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B分別為20.4、100.0、100.4、405.9、200.6 μg/mL的混合對照品溶液,并以50%乙腈稀釋得系列質(zhì)量濃度對照品混合液。
1.3.8.2 供試品溶液制備
取干燥粉末約1 g,精密稱定,置于具塞三角瓶中,精密加入乙腈25 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲提取30 min(功率250 W,頻率50 kHz),放冷,再稱定質(zhì)量,補(bǔ)足失質(zhì)量,搖勻,0.22 μm濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。
所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2016進(jìn)行處理,采用GraphPad Prism 7.0軟件作圖,液相色譜圖像采集和數(shù)據(jù)處理由Empower 3(美國Waters公司)軟件完成。
2.1.1 總蛋白、總脂肪、總氨基酸含量測定結(jié)果
圖2 澤瀉不同部位營養(yǎng)成分比較Fig.2 Comparison of nutritional components of different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
如圖2所示,澤瀉不同部位均含有蛋白、脂肪、氨基酸等成分,其含量在澤瀉不同部位中表現(xiàn)一致,均為澤瀉花苔>澤瀉塊莖>澤瀉葉>澤瀉莖,其中花苔的營養(yǎng)成分含量顯著高于其他部位,澤瀉花苔總蛋白含量達(dá)到(328.0±19.1)mg/g,相較于澤瀉塊莖的總蛋白含量高51%,比澤瀉莖、葉分別高出228%和188%,花苔總脂肪含量為(48.0±11.5)mg/g,相較于澤瀉塊莖、莖、葉的總脂肪含量高77%、166%和92%,花苔的總氨基酸含量達(dá)到(219.7±10.5)mg/g,相較于澤瀉塊莖、莖、葉分別高16%、225%和171%。
2.1.2 氨基酸含量
表1 澤瀉不同部位氨基酸含量Table 1 Comparison of amino acid contents of different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.mg/g
如表1所示,澤瀉不同部位中均含有氨基酸,共檢測到17 種氨基酸,種類多且含量豐富。以澤瀉花苔中氨基酸含量顯著高于其他各個部位,總氨基酸含量依次為澤瀉花苔>澤瀉塊莖>澤瀉葉>澤瀉莖。其中天冬氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸和脯氨酸在澤瀉花苔中含量最高,蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸、組氨酸和精氨酸的含量則在澤瀉塊莖中最高,澤瀉花苔次之,而澤瀉莖、葉中各類氨基酸的含量均較低,由此可見,澤瀉不同部位氨基酸含量存在一定差異,澤瀉花苔具有較高的氨基酸營養(yǎng)價(jià)值。
圖3 澤瀉不同部位總多糖含量Fig.3 Comparison of total polysaccharide contents of different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
按照1.3.4節(jié)方法,得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.007 9x-0.060 2,r=0.999 2,線性范圍為52.3~418.4 μg/mL。如圖3所示,澤瀉塊莖、莖、葉和花苔總多糖含量分別為(9.26±0.86)、(5.16±0.59)、(4.03±0.04)mg/g和(7.27±0.88)mg/g。澤瀉塊莖和花苔中多糖含量較高,總多糖含量依次為澤瀉塊莖>澤瀉花苔>澤瀉莖>澤瀉葉。
圖4 澤瀉不同部位總黃酮含量Fig.4 Comparison of total flavonoid contents of different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
按照1.3.5節(jié)方法,得蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.020 5x-0.010 7,r=0.999 1,線性范圍為3.984~39.840 μg/mL。如圖4所示,澤瀉塊莖、莖、葉和花苔總黃酮含量分別為(2.07±0.12)、(0.66±0.04)、(0.99±0.09)mg/g和(1.77±0.12)mg/g。澤瀉塊莖和花苔中總黃酮含量較高,總黃酮含量依次為澤瀉塊莖>澤瀉花苔>澤瀉葉>澤瀉莖。
按照1.3.6節(jié)方法,得沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.002 5x+0.065 4,r=0.999 6,線性范圍為50.0~500.0 μg/mL。如圖5所示,澤瀉塊莖、莖、葉和花苔總多酚含量分別為(5.62±0.82)、(14.03±0.84)、(8.70±0.65)mg/g和(17.63±0.60)mg/g。澤瀉花苔和澤瀉莖中多酚含量較高,澤瀉塊莖多酚含量最低。總多酚含量依次為澤瀉花苔>澤瀉莖>澤瀉葉>澤瀉塊莖。
圖5 澤瀉不同部位總多酚含量Fig.5 Comparison of total polyphenol contents of different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
2.5.1 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)
分別精密吸取混合對照品溶液、澤瀉不同部位供試品溶液各5 μL,按照1.3.7節(jié)色譜條件分析,環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B五種化合物在相應(yīng)測定波長下與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5,理論塔板數(shù)均大于5 000,見圖6。
圖6 混合對照品溶液(A)和澤瀉不同部位(B~E)色譜圖Fig.6 UPLC profiles of mixed reference material (A) and five anthraquinones from different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.(B-E)
2.5.2 線性范圍
將制備的不同梯度質(zhì)量濃度混合對照品溶液依次注入液相色譜儀,按1.3.7節(jié)色譜條件分析并記錄5 個成分的峰面積,分別以各個成分的峰面積(Y)對各個化合物質(zhì)量濃度(X)作線性回歸,求線性方程及相關(guān)系數(shù)r,見表2。
表2 5 種萜類成分的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍Table 2 Calibration equations with linear ranges and correlation coefficients for five anthraquinones
2.5.3 精密度結(jié)果
取混合對照品溶液適量,1 d內(nèi)按照1.3.7節(jié)方法連續(xù)進(jìn)樣6 次,記錄環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B 5 個成分的峰面積,計(jì)算其峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)分別為2.38%、1.12%、0.46%、0.94%、0.68%,結(jié)果表明儀器精密度良好。
2.5.4 穩(wěn)定性結(jié)果
取同一批次的澤瀉粉末,按1.3.8節(jié)方法制備供試品溶液,按照1.3.7節(jié)方法于0、1、2、4、8、12 h和24 h分別進(jìn)樣5 μL,記錄5 個成分的峰面積,計(jì)算RSD分別為1.23%、2.73%、2.59%、1.89%、1.35%,結(jié)果表明供試液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.5.5 重復(fù)性結(jié)果
精密稱取同一批次澤瀉樣品6 份,按1.3.8節(jié)方法制備供試品溶液,按照1.3.7節(jié)方法進(jìn)樣分析,分別記錄5 個成分的峰面積,并計(jì)算各個成分的含量分別為0.106、0.050、0.111、0.735、0.319 mg/g, RSD分別為1.70%、2.35%、2.29%、2.88%、2.89%,表明本方法的重復(fù)性良好。
2.5.6 回收率結(jié)果
取同一批次的澤瀉樣品6 份,各精密稱取0.5 g,按照高、中、低3 個水平分別加入各個對照品,按1.3.6節(jié)方法制備供試品溶液,按照1.3.7節(jié)方法進(jìn)樣分析,計(jì)算各個成分的回收率和RSD,結(jié)果見表3,表明方法回收率良好,符合分析的要求。
表3 澤瀉中5 種萜類成分的回收率和RSD(n=6)Table 3 Recoveries and RSDs (n= 6) of five anthraquinones from spiked samples
精密稱定不同批次澤瀉粉末各1 g,按1.3.8節(jié)方法制備供試品溶液,按照1.3.7節(jié)方法進(jìn)樣分析,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其含量,結(jié)果見表4。環(huán)氧澤瀉烯的含量以澤瀉花苔最高,為(0.158±0.056)mg/g,其他部位(塊莖、莖、葉)中環(huán)氧澤瀉烯的含量均未超過0.10 mg/g,11-去氧澤瀉醇B在澤瀉塊莖和花苔中均有較高的含量,分別為(0.870±0.202)mg/g和(0.871±0.303)mg/g,除此之外,其他3 種活性萜類成分均以澤瀉塊莖中含量最高,含量依次為(0.145±0.031)、(0.514±0.066)、(3.749±0.430) mg/g,其次為澤瀉花苔,含量依次為(0.097±0.039)、(0.316±0.114)、(1.698±0.621)mg/g,澤瀉莖、葉中活性萜類成分含量較低,萜類成分總量依次為澤瀉塊莖>澤瀉花苔>澤瀉莖>澤瀉葉。
表4 澤瀉不同部位中5 種萜類成分的含量Table 4 Contents of five anthraquinones in different parts of A.orientale (Sam.) Juzep.
澤瀉不同部位(塊莖、莖、葉、花苔)均含有氨基酸、蛋白、脂肪類成分。氨基酸為澤瀉的主要成分之一,高喜鳳[35]對比了不同產(chǎn)地澤瀉氨基酸的種類和含量,并認(rèn)為氨基酸含量與澤瀉的功效密切相關(guān)。經(jīng)測定,在澤瀉不同部位中共檢測出17 種氨基酸,種類多且含量豐富。從不同部位看,澤瀉花苔氨基酸含量最高,達(dá)到219.7 mg/g,占總質(zhì)量的21.97%。其次為澤瀉塊莖,總氨基酸含量達(dá)189.2 mg/g,澤瀉莖、葉中氨基酸含量為67.7 mg/g和81.1 mg/g。從氨基酸種類看,澤瀉花苔有蘇氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸6 種人體必需氨基酸共58.6 mg/g,占總氨基酸的26.67%,花苔中天冬氨酸含量最高,達(dá)到72.0 mg/g,占總氨基酸的32.77%,谷氨酸含量占總氨基酸的11.23%,甘氨酸和丙氨酸含量分別占總氨基酸的4.67%和6.55%。天冬氨酸和谷氨酸能增加食物的鮮味,甘氨酸和丙氨酸能使食物具有甜味。這些氨基酸在澤瀉花苔中含量很高,這可能是澤瀉花苔味道鮮美的原因。蛋白質(zhì)含量檢測說明,不同部位蛋白質(zhì)含量存在較大差異,其中澤瀉花苔蛋白質(zhì)含量最高,澤瀉塊莖次之,澤瀉莖、葉相對較低,這也與氨基酸的檢測結(jié)果一致。同時(shí),澤瀉花苔中脂肪的含量只有48.0 mg/g,占總質(zhì)量的4.8%。
相比于其他水生蔬菜,澤瀉的蛋白質(zhì)、氨基酸含量均表現(xiàn)出明顯的優(yōu)勢。肖南等[36]對比了蓮藕及馬蹄蓮的營養(yǎng)成分含量,含量最高的蓮藕鮮品蛋白質(zhì)含量為25.6 mg/g,氨基酸含量為15.47 mg/g,含水量為75.86%,折算成干品含量分別為106.0 mg/g和64.1 mg/g。蔣露[37]對比不同品種的蓮子,蛋白質(zhì)含量分別為77 mg/g,折算成干品含量為220 mg/g。黎志彬等[38]對比了不同品種的茭白,氨基酸含量為11.8 mg/g。而澤瀉花苔干品的蛋白質(zhì)和氨基酸含量達(dá)到了328.0 mg/g和219.7 mg/g。由此可見,澤瀉是一種高蛋白、高氨基酸的蔬菜,具有很高的營養(yǎng)價(jià)值。
澤瀉不同部位均含有多糖、黃酮、多酚類對人體有益的活性成分,其中多糖和多酚含量相對較高,黃酮含量最低。從總多糖含量看,澤瀉塊莖中總多糖含量最高,達(dá)到9.26 mg/g,澤瀉花苔的總多糖含量僅次于塊莖,為7.27 mg/g,澤瀉莖、葉的總多糖含量分別為5.16 mg/g和4.03 mg/g。從總黃酮含量看,澤瀉塊莖中總黃酮含量最高,達(dá)到2.07 mg/g,澤瀉花苔的總黃酮含量為1.77 mg/g,澤瀉莖、葉的總黃酮含量分別為0.66 mg/g和0.99 mg/g。從總多酚含量看,澤瀉花苔總多酚含量最高,達(dá)到了17.63 mg/g,其次是澤瀉莖,含量為14.03 mg/g,澤瀉葉和塊莖總多酚含量分別為8.70 mg/g和5.62 mg/g。從不同部位看,澤瀉塊莖中總多糖和總黃酮含量最高,澤瀉花苔次之,而總多酚含量則以澤瀉花苔最高,黃酮、多酚類物質(zhì)具有顯著的抗氧化活性,澤瀉不同部位中這2 種活性成分含量測定結(jié)果與前期抗氧化能力[22]測定結(jié)果一致。而研究報(bào)導(dǎo)多糖具有抗炎、降血糖血脂等[39-40]活性,澤瀉花苔含有以上活性成分,可用于功能性食品開發(fā)。
本研究參照2015版藥典[41]對澤瀉樣品進(jìn)行前處理,選用超聲提取作為樣品制備的方法。進(jìn)一步考察提取溶劑、提取時(shí)間、料液比、提取次數(shù)對5 個成分提取的影響。最終優(yōu)化條件為1 g樣品粉末加入25 mL乙腈,超聲30 min,提取1 次??疾霤ORTECS UPLC C18(2.1 mm×100 mm,1.6 μm)、ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)、Uitimate UHPLC AQ-C18(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)和Syncronis aQ(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)4 種色譜柱對成分分離的影響。最終優(yōu)選Syncronis aQ(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色譜柱,并優(yōu)化流速為0.25 mL/min。流動相比較了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸和乙腈-0.1%甲酸,發(fā)現(xiàn)乙腈-水的分離效果最好。通過全波長掃描,發(fā)現(xiàn)環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B五個成分在波長208 nm處均有較大吸收,故選擇波長208 nm作為檢測波長。
經(jīng)測定,澤瀉不同部位中均含有環(huán)氧澤瀉烯、澤瀉烯醇、澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B和11-去氧澤瀉醇B 5 個成分,其中塊莖中5 個成分的總量最高,達(dá)到了5.315 mg/g,反映以澤瀉塊莖入藥的合理性,澤瀉地上部分也含有以上5 個成分,花苔、莖和葉含量分別為3.139、2.417 mg/g和1.395 mg/g。23-乙酰澤瀉醇B為澤瀉的一個特征性成分,2015版藥典采用23-乙酰澤瀉醇B的含量測定對澤瀉質(zhì)量進(jìn)行控制[41],且現(xiàn)代藥理研究表明23-乙酰澤瀉醇B具有降血糖、血脂等作用[13],實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明澤瀉地上部分也均含有23-乙酰澤瀉醇B,含量分別為1.689(花苔)、1.458(莖)、0.896(葉)mg/g,總量與澤瀉塊莖相當(dāng)。且澤瀉花苔環(huán)氧澤瀉烯的含量最高,達(dá)到0.158 mg/g,為澤瀉塊莖的2.67 倍,最新研究表明環(huán)氧澤瀉烯具有降血糖的作用[42]。以上結(jié)果提示澤瀉地上部分可能具有類似澤瀉塊莖的降血脂、降血糖等作用,是一種具有一定藥用價(jià)值的蔬菜,有很好的開發(fā)的前景。
本實(shí)驗(yàn)對澤瀉不同部位的營養(yǎng)成分和活性萜類成分進(jìn)行測定,其中蛋白、氨基酸、脂肪和多酚在澤瀉花苔中含量最高,表明澤瀉花苔具有較高的食用價(jià)值,黃酮、多糖和活性萜類成分則在澤瀉塊莖中含量最高,這與嵌入對澤瀉塊莖的研究基本一致,而澤瀉花苔這些成分的含量僅次于塊莖,推測其可能具有一定的藥用價(jià)值,澤瀉莖、葉中也含有所測營養(yǎng)成分和部分活性萜類成分,值得進(jìn)一步深入研究。本實(shí)驗(yàn)立足于澤瀉非藥用部位資源的綜合開發(fā),系統(tǒng)比較了澤瀉不同部位營養(yǎng)成分和活性萜類成分的含量,為其資源開發(fā)提供理論依據(jù)。