虎維東，張靜，王小軍，趙燕霞，楊曉麗，胡建明

2009 年6 月11 日世界衛(wèi)生組織已宣布對甲型H1N1 流感的警戒級別升至6 級，意味著甲型H1N1流感的世界性大流行已形成［1-3］。本研究分析了2009年11月以來在甘肅省人民醫(yī)院、蘭州大學第二醫(yī)院收治的甲型H1N1 流感病人外周血中T 淋巴細胞亞群相關指標的改變。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2009 年11 月5 日至2017 年1月15 日甘肅省人民醫(yī)院及蘭州大學第二醫(yī)院所收治的73 例甲型H1N1 流感病人，年齡（50.09±23.35）歲，所有病例符合中國衛(wèi)生部疾病控制司發(fā)布的《甲型H1N1 流感診療方案（2009年第三版）》［4］。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2 診斷依據(jù)依據(jù)《甲型H1N1 流感診療方案（2009年第三版）》診斷［4-5］。

1.3 檢測方法所有病例均在診斷初期（病人發(fā)熱、咳嗽、咳痰、乏力、全身酸痛等癥狀明顯，胸片或CT 示雙肺出現(xiàn)新的浸潤性病變且進展迅速），入院后病人體溫達38.5 ℃以上時采血；緩解期（病人發(fā)熱、咳嗽、咳痰、乏力、全身酸痛等明顯緩解，胸片或CT 示雙肺浸潤性病開始吸收）體溫降至正常的第5～7 天采血；以及恢復期（癥狀消失，胸片或CT示雙肺浸潤性病變大部分吸收）病變大部分吸收后1 周內(nèi)采血，均為空腹采血，血液離體2 h 內(nèi)進行總T 淋巴細胞、CD4+T 淋巴細胞、CD8+T 淋巴細胞的檢測。

1.4 試劑和儀器T淋巴細胞亞群采用結(jié)合三色熒光素的免疫單克隆抗體直接標記后（試劑盒為美國R&DT-SUBSET），用多參數(shù)流式細胞儀，CELLQUEST流式數(shù)據(jù)獲取與分析軟件檢測。

1.5 統(tǒng)計學方法73例甲型H1N1流感病例資料均使用SPSS 10.0軟件進行錄入，計量資料以±s表示，采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。

2 結(jié)果

甲型H1N1 流感病人T 淋巴細胞亞群變化情況的比較在甲型H1N1流感病程診斷初期即有相當部分病人CD8+T淋巴細胞開始升高，至緩解期、恢復期時逐漸降低；診斷初期與恢復期相比差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而診斷初期與緩解期、緩解期和恢復期則差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；病程中總T淋巴細胞在診斷初期有不同程度下降，隨病情好轉(zhuǎn)逐漸回升，并且診斷初期和恢復期差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；CD4+T淋巴細胞變化趨勢和總T淋巴細胞相似，但診斷初期、緩解期、恢復期之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。甲型H1N1流感病人CD4+T淋巴細胞/CD8+T淋巴細胞變化情況的比較：CD4+T淋巴細胞與CD8+T淋巴細胞比值在診斷初期、緩解期、恢復期差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），但可以發(fā)現(xiàn)在恢復期有升高的趨勢。見表1。

表1 甲型H1N1流感73例病程中T淋巴細胞亞群的變化情況/±s

表1 甲型H1N1流感73例病程中T淋巴細胞亞群的變化情況/±s

病程診斷初期緩解期恢復期F 值P 值總T細胞（cells/ul）44.09±13.51 51.09±12.99 61.91±12.1 5.617 0.004 CD4+T細胞（cells/ul）47.27±7.73 46.91±7.44 50.55±12.84 0.018 0.930 CD8+T細胞（cells/ul）42.27±11.13 38.36±12.17 29.26±12.99 3.247 0.017 CD4+/CD8+1.33±0.39 1.33±0.39 1.73±0.79 0.508 0.027

3 討論

甲型H1N1 流感是一種新的傳染病，該病傳染性強，人類對它尚未完全認識［6］。在正常機體內(nèi)，淋巴細胞亞群之間以及與其他免疫細胞之間，在數(shù)量上保持著一定的比例，如果免疫細胞種類比例失調(diào)或者細胞亞群比例失調(diào)，體內(nèi)免疫功能則發(fā)生紊亂，將導致疾病的發(fā)生，特別是感染性疾病或自身免疫病［7-9］。T淋巴細胞是介導細胞免疫的主要細胞，根據(jù)其表面標志細胞黏附分子的不同，T淋巴細胞可分為CD4+細胞和CD8+細胞兩大亞群［10-11］。在正常情況下，T淋巴細胞亞群相互作用，平衡、穩(wěn)定地調(diào)節(jié)維持機體的免疫功能［12-13］。CD4+T淋巴細胞又稱輔助性T淋巴細胞，能促進B細胞、T淋巴細胞和其他免疫細胞的增殖與分化，協(xié)調(diào)免疫細胞間的相互作用［13］。CD8+細胞按其功能可分為細胞毒性T淋巴細胞和抑制性T淋巴細胞［14］，其中細胞毒性T淋巴細胞為主要部分，與抗病毒免疫、抗腫瘤免疫以及對移植物的移植排斥反應有關，是抗病毒感染的主要效應細胞；抑制性T 淋巴細胞可抑制免疫應答的活化期，其功能變化是引起各種免疫功能異常的重要原因。CD3+則代表著T淋巴細胞總數(shù)，一般為CD4+和CD8+細胞之和，CD4+/CD8+比值的動態(tài)恒定可以維持細胞免疫反應的平衡［15-16］。通過檢測T淋巴細胞亞群可以間接反映細胞免疫功能的狀態(tài)［17-18］。

本研究通過對甲型H1N1 流感病人外周血T 淋巴細胞亞群的測定，發(fā)現(xiàn)在病程診斷初期即有相當部分病人CD8+T 淋巴細胞開始升高，可能與病毒感染后機體的免疫應答有關。同時與Powell 等［19］的研究結(jié)果一致，發(fā)現(xiàn)在抗甲流病毒感染的免疫過程中，CD4+T 淋巴細胞的數(shù)量達峰后，CD8+T 淋巴細胞數(shù)仍持續(xù)增多，并且在疾病過程中，數(shù)量的降低比CD4+T 淋巴細胞要慢?？赡苁怯捎贑D4+T 和CD8+T 淋巴細胞執(zhí)行著不同的功能，受不同的機制調(diào)節(jié)所致。診斷初期總T 淋巴細胞下降，至緩解期、恢復期時逐漸恢復；CD4+T 淋巴細胞的變化趨勢和總T 淋巴細胞相似；CD4+T 淋巴細胞與CD8+T淋巴細胞比值雖然在診斷初期、緩解期、恢復期沒有統(tǒng)計學上的差異，但可以發(fā)現(xiàn)在恢復期有升高的趨勢。甲型H1N1 流感病人發(fā)病初期CD8+T 淋巴細胞的升高，CD4+T 淋巴細胞、總T 淋巴細胞及CD4+T淋巴細胞與CD8+T 淋巴細胞比值的降低，說明病人機體細胞免疫水平降低，這就可以解釋為什么甲型H1N1 流感病人容易反復發(fā)生肺部感染，進一步加重病情。