喬喬，余小紅，陳斌，晏飛，曹陽，黃順旺，曹明成

琥珀酸多西拉敏是一種乙醇類抗組胺藥，具有抗組胺作用、抗膽堿作用和顯著的鎮(zhèn)靜作用，適用于多種過敏性鼻炎、過敏性皮膚病、枯草熱、哮喘性支氣管炎等，也可作為催眠藥用于失眠的短期治療［1-4］。1978 年 10 月美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)CHATTEM 公司的琥珀酸多西拉敏25 mg片劑上市，用于幫助減輕入睡困難［5-9］。1979年琥珀酸多西拉敏成為OTC（非處方藥）。琥珀酸多西拉敏作為輔助治療睡眠的OTC抗組胺藥物，臨床安全有效，總體反應(yīng)率高，耐受性好［10-14］，在國內(nèi)尚未批準(zhǔn)上市，因其療效確切，服用方便，日益受到關(guān)注。

USP40標(biāo)準(zhǔn)［15］未對琥珀酸多西拉敏制劑有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行控制，EP 9.0與BP 2016［16-17］只對原料藥中雜質(zhì)進(jìn)行控制。另有文獻(xiàn)報道了琥珀酸多西拉敏原料有關(guān)物質(zhì)的檢測方法［18-19］，對于制劑的有關(guān)物質(zhì)檢測方法尚未見文獻(xiàn)報道。本研究于2017年10月至2018年9月，通過篩選和優(yōu)化色譜條件，并參照中國藥典（四部）收錄的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗證指導(dǎo)原則［20］，對已知雜質(zhì)中雜質(zhì)A、B、C、E、G進(jìn)行了方法學(xué)驗證研究。本方法可有效檢出琥珀酸多西拉敏片中各已知雜質(zhì)，實現(xiàn)了主峰與相鄰雜質(zhì)的良好分離。各已知雜質(zhì)均為中間體或降解途徑產(chǎn)生，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜系統(tǒng)：島津LC-20AT泵單元，島津SPD-20A 紫外檢測器，Labsolutions DB版色譜數(shù)據(jù)工作站。

圖1 EP 9.0收錄琥珀酸多西拉敏片中的已知雜質(zhì)：A為N，N-二甲基-2-［1-苯基-1-（4-吡啶）乙氧基］乙胺、B為4-吡啶基苯基甲基甲醇、C為N，N-二甲基-2-［1-苯基-1-（2-吡啶）甲氧基］乙胺、E為N，N-二甲基-2-［1-苯基-1-（2-吡啶）乙氧基］乙胺氮氧化物、G為N-甲基-2-［1-苯基-1-（2-吡啶）乙氧基］乙胺

雜質(zhì)A（批號20180302，純度99.02%）、雜質(zhì)B（批號 20180703，純度 97.91%）、雜質(zhì) C（批號20180413，純度98.12%）、雜質(zhì)E（批號20180427，純度99.38%）、雜質(zhì)G（批號20180401，純度99.76%）均為自制對照品；供試用制劑（批號20180801、20180802、20180803）為自制制劑；參比制劑（Unisom?，批號15110）來源于CHATTEM 公司；乙腈為色譜純；水為超純水；磷酸二氫鉀、三乙胺、磷酸及其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備精密稱取雜質(zhì)A、B、C、E、G各適量，加流動相定量稀釋制成每1 mL 含雜質(zhì)A、B、C、E、G 各約為10μg 的混合溶液，作為混合對照品溶液。取琥珀酸多西拉敏與雜質(zhì)A、B、C、E、G 對照品各適量，加流動相定量稀釋制成每1 mL含琥珀酸多西拉敏約為2 mg、含雜質(zhì)A、B、C、E、G 各約為10 μg的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于琥珀酸多西拉敏50 mg），精密稱定，置25 mL 量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密量取供試品溶液0.5 mL 置100 mL 量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性以雜質(zhì)A、B、C、E、G及主成分峰保留時間、主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度為考察指標(biāo)，對其色譜條件進(jìn)行了篩選，試驗方法及結(jié)果如下：色譜柱：苯基硅烷鍵合硅膠柱（如：Polar-Phenyl，250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.01 M磷酸二氫鉀溶液（稱取1.36 g 磷酸二氫鉀，加水1 000 mL 溶解，加三乙胺溶液3 mL，用磷酸調(diào)節(jié)pH 至3.0）-乙腈（89∶11）；檢測波長：262 nm，柱溫：35 ℃，流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：20 μL，記錄至琥珀酸多西拉敏主峰保留時間的3倍。在選定的色譜條件下，琥珀酸多西拉敏峰保留時間適中，主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰及雜質(zhì)峰之間的分離度均達(dá)到要求。照“2.1”項下配制系統(tǒng)適用性溶液，精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖2所示。系統(tǒng)適用性溶液中，已知雜質(zhì)A、B、C、E、G與琥珀酸多西拉敏峰分離度良好，專屬性高。各雜質(zhì)峰分離度均＞1.5，理論塔板數(shù)均大于2 000，符合系統(tǒng)適用性要求。

圖2 琥珀酸多西拉敏與已知5種雜質(zhì)系統(tǒng)適用性試驗高效液相色譜圖

2.3 專屬性為了考察本分析方法對琥珀酸多西拉敏降解產(chǎn)物的分離情況，對其進(jìn)行了破壞性試驗。取琥珀酸多西拉敏片粉（批號20180801，約相當(dāng)于琥珀酸多西拉敏50 mg），置25 mL量瓶中，分別加入1 mol/L鹽酸溶液1 mL，1 mol/L氫氧化鈉1 mL，室溫放置15 d，調(diào)至中性，用流動相稀釋至刻度，照“2.1”項下后續(xù)步驟即得酸、堿降解樣品；取琥珀酸多西拉敏片粉（約相當(dāng)于琥珀酸多西拉敏50 mg），置25 mL 量瓶中，分別加入30%過氧化氫溶液1 mL，室溫放置1 d，用流動相稀釋至刻度，照“2.1”項下后續(xù)步驟即得氧化降解樣品；取琥珀酸多西拉敏片粉（約相當(dāng)于琥珀酸多西拉敏50 mg），置25 mL量瓶中，80 ℃水浴放置15 d，用流動相稀釋至刻度，照“2.1”項下后續(xù)步驟即得高溫降解樣品；取置光照度為（4 500±500）lx 的環(huán)境下放置15 d 的琥珀酸多西拉敏片粉（約相當(dāng)于琥珀酸多西拉敏50 mg），置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，照“2.1”項下后續(xù)步驟即得光照降解樣品。量取上述溶液各20μL，分別進(jìn)樣測定。

本品在酸、堿、光照條件下破壞后，琥珀酸多西拉敏的有關(guān)物質(zhì)含量無明顯增加；而經(jīng)高溫（80 ℃水浴，15 d）和30%過氧化氫（室溫放置1 d）氧化破壞后，雜質(zhì)含量明顯增加，新增了一些極性較小、保留時間較長的雜質(zhì)。各條件下色譜圖見圖3。說明琥珀酸多西拉敏片的生產(chǎn)及貯藏時應(yīng)盡量避免高溫環(huán)境，并進(jìn)行密閉保存。

圖3 琥珀酸多西拉敏專屬性試驗色譜圖：A為未破壞，B為酸破壞，C為堿破壞，D為氧化破壞，E為高溫破壞，F(xiàn)為光照破壞

2.4 定量限、檢測限、線性范圍分別稱取琥珀酸多西拉敏對照品、雜質(zhì)A、B、C、E、G 對照品適量，配制成含琥珀酸多西拉敏對照品、雜質(zhì)A、B、C、E、G對照品約為0.5、1、2、5、10、20 μg/mL 的混合溶液。同時以信噪比（S/N）約為3 作為檢測限；以信噪比（S/N）約為10 作為定量限。精密量取定量限濃度溶液及上述對照品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果見表1。

表1 琥珀酸多西拉敏與各已知雜質(zhì)定量限、檢測限與線性范圍

結(jié)果表明：琥珀酸多西拉敏濃度在0.08～20.36μg/mL范圍內(nèi)，雜質(zhì)A濃度0.08～20.14μg/mL，雜質(zhì)B濃度0.05～19.85μg/mL，雜質(zhì)C濃度0.10～20.66μg/mL，雜質(zhì)E濃度0.25～20.39μg/mL，雜質(zhì)G濃度0.05～22.63μg/mL，其濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度與準(zhǔn)確度精密度：按“2.1”項下方法制備供試品6 份，在“2.2”色譜條件下，以高效液相色譜儀進(jìn)行測定，計算各雜質(zhì)含量RSD。6 份樣品中，超過報告限度（0.05%）的雜質(zhì)含量RSD不大于10%，總雜RSD 不大于10%，本方法精密度良好。

準(zhǔn)確度：精密量取混合對照品貯備液，加入供試品中，制成加入各已知雜質(zhì)為限度的80%、100%、120%的回收率樣品，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，計算各已知雜質(zhì)回收率。雜質(zhì)A、B、C、E 與G 的平均回收率依次為99.62%、98.87%、101.68%、102.85%和100.41%，RSD 依次為0.67%、0.76%、0.63%、0.62%和0.65%，本方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性按“2.1”項下制備混合對照品溶液，25℃放置，并于0、2、4、6、8、12h分別取樣進(jìn)樣分析，記錄色譜圖?；旌蠈φ掌啡芤?2 h內(nèi)雜質(zhì)A、B、C、E、G 的峰面積RSD 分別為0.07%、0.09%、0.10%、0.12%和0.09%。供試品溶液12小時內(nèi)，各雜質(zhì)的峰面積RSD均不大于10%。表明混合對照品溶液與供試品溶液分別放置在室溫條件下12 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7 耐用性通過分別調(diào)整色譜條件中的柱溫（±2 ℃）、波長（±2 nm）、流速（±0.05 mL/min）及pH（±0.05）等來考察雜質(zhì)與主成分之間分離度的影響及大于0.05%雜質(zhì)含量變化。與正常條件比較，各條件下雜質(zhì)檢出個數(shù)一致，大于0.05%單雜、總雜含量RSD符合要求，表明本方法耐用性良好。

2.8 樣品測定按上述已確定的色譜條件及方法，檢查本品中試3批及參比制劑（Unisom?）1批樣品的有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見圖4、表2。

圖4 琥珀酸多西拉敏片劑中試三批樣品與參與比制劑有關(guān)物質(zhì)檢測色譜圖：A為批號20180801，B為批號20180802，C為批號20180803，D為參比制劑15110

表2 琥珀酸多西拉敏片有關(guān)物質(zhì)檢測結(jié)果（n=3）/%

3 討論

色譜條件優(yōu)化時，選擇苯基硅烷鍵合硅膠柱，主峰與各雜質(zhì)峰峰型良好，保留時間適宜；流動相水相中添加0.3%的三乙胺，可有效改善主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度，并改善拖尾，故選用上述各條件并確定了最終的色譜條件。由檢測結(jié)果可知，所測樣品均能檢出已知雜質(zhì)或未知雜質(zhì)，表明該分析方法能有效控制本品的有關(guān)物質(zhì)，為琥珀酸多西拉敏片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了試驗依據(jù)。

因為國內(nèi)外琥珀酸多西拉敏的生產(chǎn)工藝不盡相同，琥珀酸多西拉敏制劑的輔料及工藝也不同，所以應(yīng)根據(jù)各國生產(chǎn)的實際情況制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本品用法用量為每次1 片，每日1 次。根據(jù)《化學(xué)藥物雜質(zhì)研究技術(shù)指導(dǎo)原則》附件2：制劑雜質(zhì)限度，本品的鑒定限度為0.2%（最大日劑量＞10～2 g），質(zhì)控限度為0.5%（最大日劑量＞10～100 mg）。根據(jù)小試、中試及工藝驗證各3 批樣品有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果，初步擬定本品有關(guān)物質(zhì)限度為：已知雜質(zhì)A、B、C、E、G均≤0.5%，未知雜質(zhì)≤0.2%，總雜≤3.0%。

本研究建立的琥珀酸多西拉敏片的有關(guān)物質(zhì)檢測方法快速簡便、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，有利于藥品質(zhì)量控制。