趙悅,張威,崔宇,尹慧絲

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院,沈陽 110032;2.北部戰(zhàn)區(qū)綜藝與北陵分院,沈陽 110000;3.遼寧大學(xué)醫(yī)院,沈陽 110000)

卒中包括腦梗死、腦出血等,屬于急性腦血管病,并且具有較高的致死致殘率,以局灶性神經(jīng)功能受損為主要特點,其中卒中后多合并肢體運動功能障礙,發(fā)病率較高,患者生活質(zhì)量明顯下降。肢體活動障礙多表現(xiàn)為肢體平衡能力及控制運動能力下降、肌張力減退、肢體痙攣。其中80%～90%患者會出現(xiàn)不同程度的肢體痙攣[1]。肢體痙攣若得不到有效控制會明顯影響預(yù)后。因此進(jìn)行早期康復(fù)治療可有效改善肢體活動平衡能力,降低并發(fā)癥出現(xiàn)。該病引起的腦組織損傷發(fā)病機制有多種因素參與,如腦組織氧化應(yīng)激損傷、興奮性氨基酸性中毒、炎癥反應(yīng)、異常能量代謝等,其中Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激通路對維持卒中后細(xì)胞內(nèi)氧化還原的平衡狀態(tài)有重要影響,該信號通路對下游因子如谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)進(jìn)行調(diào)控,可起到抗細(xì)胞凋亡、抗炎癥反應(yīng)損傷、降低鈣離子超載、抗氧化應(yīng)激的作用[2]。臨床中眼針療法得到廣泛應(yīng)用,因其具有操作簡便、療效突出等特點,可明顯緩解肌肉痙攣。NMES可通過對肢體外周運動神經(jīng)進(jìn)行低頻電流刺激,促進(jìn)肢體神經(jīng)恢復(fù)正常電刺激閾值,促進(jìn)肢體恢復(fù)運動控制能力較好[3],本研究采用眼針聯(lián)合肌肉神經(jīng)電刺激(NMES)方法治療卒中后肢體痙攣,探究眼針治療過程中 Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激通路的抗氧化應(yīng)激損傷的病理機制,為臨床治療卒中抗氧化應(yīng)激作用提供理論依據(jù)。

1 臨床資料

1.1 一般資料

收集2016年8月至2018年12月遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院康復(fù)科的80例卒中后肢體痙攣患者,隨機分為兩組(每組 40例),將患者從 1～80進(jìn)行編號,應(yīng)用Excel的隨機數(shù)字發(fā)生器產(chǎn)生隨機數(shù)并對隨機數(shù)進(jìn)行排序,排序后的隨機數(shù)對研究對象進(jìn)行分組。觀察組中男23例,女17例;年齡48～64歲,平均(54±6)歲;病程 15～35 d,平均(19.21±4.32)d;肌張力Ⅰ級6例,Ⅰ+級9例,Ⅱ級7例,Ⅲ級8例,Ⅳ級10例。對照組中男25例,女15例;年齡45～65歲,平均(55±8)歲;病程 16～29 d,平均(18.27±5.38)d;肌張力Ⅰ級4例,Ⅰ+級6例,Ⅱ級7例,Ⅲ級12例,Ⅳ級11例。兩組患者的基礎(chǔ)資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。本研究得到遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審核(倫理批件號1709021)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中國重癥腦血管病管理共識2015》[4]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn);中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》[5](中華人民共和國中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)ZY/T001.1-94)中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)

①滿足上述中醫(yī)、西醫(yī)相關(guān)卒中診斷標(biāo)準(zhǔn);②頭顱MRI、CT明確診斷;③Brunnstrom分期處于Ⅱ～Ⅳ期;④伴有肌張力增高、肢體痙攣癥狀;⑤年齡40～65歲,病程＜3個月;⑥患者未服用肌松劑、鎮(zhèn)靜藥;⑦改良Ashworth評定結(jié)果,患肢肌張力0級以上;⑧家屬簽署知情同意書。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)

①非卒中引起的神經(jīng)功能缺失;②肢體運動障礙因關(guān)節(jié)病變引起;③TIA發(fā)作;④神經(jīng)功能受損可逆;⑤服用肌松劑、鎮(zhèn)靜藥;⑥處于哺乳或妊娠期女性患者;⑦伴有肝腎及其他系統(tǒng)嚴(yán)重功能障礙;⑧患有精神疾病,神志異常。

2 治療方法

2.1 基礎(chǔ)治療

兩組均進(jìn)行常規(guī)對癥、支持治療并給予康復(fù)訓(xùn)練(參考Bobath技術(shù))[6]。

2.2 對照組

予NMES治療。應(yīng)用KX-90A型神經(jīng)肌肉電刺激儀(北京耀洋康達(dá)醫(yī)療儀器有限公司)[京藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2009第 2260204號,批號 20090310],輸出電流峰值,在500Ω負(fù)載下輸出l P均≤50 mA。軀體電流＜10 mA,頭部電流＜7.5 mA。時間設(shè)置為 10 min,緩慢調(diào)節(jié)電流提高至患者可耐受程度,一般以3～5 mA為適宜電流大小,最大電流≤7 mA。每日電刺激治療1次,每次持續(xù)15 min,共治療20 d。

2.3 觀察組

在對照組治療基礎(chǔ)上聯(lián)合眼針治療。眼針取穴參考《中華眼針》[7],取雙側(cè)上焦區(qū)、下焦區(qū)、肝區(qū)、腎區(qū),具體見圖 1。對施針區(qū)域皮膚進(jìn)行常規(guī)消毒,使用0.30 mm×15 mm華佗牌不銹鋼針灸針,于眼瞼處距離眼眶內(nèi)緣2 mm相應(yīng)針灸穴區(qū)進(jìn)行橫刺,從一側(cè)穴區(qū)刺入,斜向另一側(cè)穴區(qū),刺入皮下,維持針體留在穴區(qū)內(nèi)。對眼眶內(nèi)緣穴區(qū)用押手拇指輕輕扶起,進(jìn)針深度保持在(12±2)mm,進(jìn)針要求快、準(zhǔn)、穩(wěn),患者感到脹痛為適宜,不施以任何手法操作,留針時間30 min。予以眼針治療后,囑患者帶針在室內(nèi)進(jìn)行平地步行,或在家屬攙扶下在病房走廊緩慢步行,每次步行時間約為 10～20 min,不疲勞為適宜。家屬應(yīng)站在患側(cè),防止跌倒。每日治療1次,共治療20 d。

圖1 眼穴位置

3 治療效果

3.1 觀察指標(biāo)

3.1.1 PBMC中Keap1、Nrf2、ARE分子表達(dá)水平

應(yīng)用Western blot檢測,分別于治療前后采集患者清晨空腹外周靜脈血 5 mL,予以肝素抗凝,應(yīng)用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液在2 h內(nèi)完成外周血淋巴細(xì)胞的無菌分離,于1640培養(yǎng)液內(nèi)進(jìn)行2次洗滌,再經(jīng)過重懸后可收集到PBMC[8],將PBMC加入到配制的細(xì)胞裂解液中進(jìn)行裂解,4℃、12000 r/min離心15 min,收集離心后上清液,獲得總蛋白,根據(jù)BCA法對蛋白濃度進(jìn)行配平及測定。均取30 μL樣品進(jìn)行SDS-PAGE電泳,使用分離膠120 V、濃縮膠80 V,采用電轉(zhuǎn)移法將相應(yīng)蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上,室溫封閉2 h(使用5%脫脂牛奶封閉液),封閉后進(jìn)行 4℃孵育過夜,加入特異性一抗,第二天使用TBST進(jìn)行10 min洗滌,共洗滌3次,孵育二抗經(jīng)熒光標(biāo)記的羊抗兔二抗(1:10000)1 h后洗膜,再次使用TBST進(jìn)行洗滌(同前),采用ECL發(fā)光顯影。應(yīng)用 QuantityOne軟件對灰度值進(jìn)行測定,目標(biāo)分子相對表達(dá)水平=目標(biāo)蛋白條帶灰度值/內(nèi)條帶灰度值。MDA含量水平檢測采用放射免疫法,血清 SOD檢測應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法,血清GSH-Px檢測應(yīng)用二硫代二硝基苯甲酸法。

3.1.2 日常生活活動能力評分

應(yīng)用改良 Barthel指數(shù)(MBI)評分評估日?；顒幽芰?治療前后評估神經(jīng)功能缺失情況,由康復(fù)科及神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師共同參與評定,取兩者總分的平均值。

3.1.3 CSI量表評分

CSI量表從陣攣、肌張力、腱反射3方面進(jìn)行評定,總分16分,無痙攣為0～6分,輕度痙攣為7～9分,中度痙攣為10～12分,重度痙攣為13～16分。

3.1.4 MAS

MAS用來測量肌肉痙攣狀態(tài),將肌張力進(jìn)行分級(0～4級)。

3.1.5 FMA量表評分

FMA用以評估肢體運動功能,與日常生活功能關(guān)系密切,同時可以反映異常運動模式的變化,信度及效度較高。

3.2 療效標(biāo)準(zhǔn)[9]

主要觀察治療后卒中患者肌張力改善情況,參考MAS量表評分結(jié)果評定。

治愈:恢復(fù)正常肌張力水平。

顯效:肌張力下降≥2級。

有效:肌張力下降1級水平。

無效:肌張力治療后無改善或癥狀加重。

總有效率=[(治愈例數(shù)＋顯效例數(shù)＋有效例數(shù))/總病例數(shù)]×100%。

3.3 統(tǒng)計學(xué)方法

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS22.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行處理。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組內(nèi)比較采用配對t檢驗,組間比較使用獨立樣本t檢驗;不符合正態(tài)分布采用秩和檢驗。計數(shù)資料比較采用卡方檢驗;相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3.4 治療結(jié)果

3.4.1 兩組治療前后CSI量表評分比較

兩組治療前CSI量表評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞

0.05)。兩組治療后 CSI量表評分均較治療前降低(P＜0.05),且觀察組下降更為顯著(P＜0.05)。詳見表1。

表1 兩組治療前后CSI評分比較 (±s,分)

表1 兩組治療前后CSI評分比較 (±s,分)

注:與同組治療前比較1)P＜0.05;與對照組比較2)P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后 差值對照組 4011.26±1.066.90±1.251)3.34±1.02觀察組 4011.02±1.116.14±1.221)2)4.79±1.722)

3.4.2 兩組治療前后MAS分級比較

兩組治療前MAS分級比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。兩組治療后MAS分級比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。詳見表2。

表2 兩組治療前后MAS分級比較 (例)

3.4.3 兩組治療前后FMA量表評分比較

兩組治療前后FMA量表評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。兩組治療后FMA量表評分較治療前升高(P＜0.05),且觀察組高于對照組(P＜0.05)。詳見表3。

表3 兩組治療前后FMA量表評分比較 (±s,分)

表3 兩組治療前后FMA量表評分比較 (±s,分)

注:與同組治療前比較1)P＜0.05;與對照組比較2)P＜0.05

組別 例數(shù) 治療前 治療后對照組 4030.96±9.8559.13±9.121)觀察組 4031.06±10.3964.77±8.451)2)

3.4.4 兩組治療前后MBI量表評分比較

兩組治療前MBI量表評分比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。兩組治療10 d、治療后MBI評分與治療前比較均顯著升高(P＜0.05),且觀察組高于對照組(P＜0.05)。詳見表4。

3.4.5 兩組臨床療效比較

觀察組總有效率(85.0%)顯著高于對照組(70.0%),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。詳見表5。

表4 兩組治療前后MBI量表評分比較(每組40例)(±s,分)

表4 兩組治療前后MBI量表評分比較(每組40例)(±s,分)

注:與同組治療前比較1)P＜0.05;與對照組比較2)P＜0.05

組別 治療前 治療10 d 治療后對照組images/BZ_39_1473_655_1679_704.pngimages/BZ_39_1714_655_1939_704.pngimages/BZ_39_1982_655_2207_704.png觀察組images/BZ_39_1473_726_1679_775.pngimages/BZ_39_1714_726_1957_775.pngimages/BZ_39_1982_726_2226_775.png

表5 兩組臨床療效比較 [例(%)]

3.4.6 兩組治療前后Keap1、Nrf2、ARE分子水平及血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較

兩組治療前 Keap1、Nrf2、ARE分子水平及血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。兩組治療10 d、治療后Nrf2和ARE表達(dá)水平均顯著升高(P＜0.05),而Keap1表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05,P＜0.01),且觀察組明顯優(yōu)于對照組(P＜0.05);兩組治療10 d、治療后SOD和GSH-Px水平均明顯升高,而 MDA水平降低(P＜0.05,P＜0.01),且觀察組改善更明顯,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。詳見表6,wb條帶圖見圖1。

表6 兩組治療前后Keap1、Nrf2、ARE分子水平及血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較 (±s)

表6 兩組治療前后Keap1、Nrf2、ARE分子水平及血清MDA、SOD、GSH-Px水平比較 (±s)

注:與同組治療前比較1)P＜0.05,2)P＜0.01;與對照組比較3)P＜0.05,4)P＜0.01

組別 例數(shù) 時間images/BZ_39_1146_1737_1239_1785.pngimages/BZ_39_1569_1737_1644_1785.pngimages/BZ_39_1993_1737_2050_1785.png對照組 40治療前images/BZ_39_1082_1810_1307_1858.pngimages/BZ_39_1497_1810_1722_1858.pngimages/BZ_39_1912_1810_2137_1858.png治療10 d images/BZ_39_1082_1881_1307_1929.pngimages/BZ_39_1497_1881_1722_1929.pngimages/BZ_39_1912_1881_2137_1929.png治療后images/BZ_39_1082_1952_1326_2001.pngimages/BZ_39_1497_1952_1741_2001.pngimages/BZ_39_1912_1952_2155_2001.png觀察組 40治療前images/BZ_39_1082_2025_1307_2074.pngimages/BZ_39_1497_2025_1722_2074.pngimages/BZ_39_1912_2025_2137_2074.png治療10 d images/BZ_39_1082_2096_1326_2145.pngimages/BZ_39_1497_2097_1759_2145.pngimages/BZ_39_1912_2096_2174_2145.png治療后images/BZ_39_1082_2168_1345_2217.pngimages/BZ_39_1497_2168_1759_2217.pngimages/BZ_39_1912_2168_2174_2217.png組別 例數(shù) 時間 MDA(μmol/L) SOD(NU/mL)images/BZ_39_1937_2243_2144_2291.png對照組 40治療前images/BZ_39_1101_2315_1308_2364.pngimages/BZ_39_1516_2315_1722_2364.pngimages/BZ_39_1912_2315_2156_2364.png治療10 d images/BZ_39_1101_2386_1326_2435.pngimages/BZ_39_1516_2386_1722_2435.pngimages/BZ_39_1912_2386_2156_2435.png治療后images/BZ_39_1101_2458_1326_2507.pngimages/BZ_39_1516_2458_1741_2507.pngimages/BZ_39_1912_2458_2156_2507.png觀察組 40治療前images/BZ_39_1101_2531_1308_2579.pngimages/BZ_39_1516_2531_1722_2579.pngimages/BZ_39_1912_2531_2156_2579.png治療10 d images/BZ_39_1101_2602_1326_2651.pngimages/BZ_39_1516_2602_1741_2651.pngimages/BZ_39_1912_2602_2174_2651.png治療后images/BZ_39_1120_2674_1345_2722.pngimages/BZ_39_1497_2674_1759_2722.pngimages/BZ_39_1912_2674_2174_2722.png

3.4.7 兩組Keap1、Nrf2、ARE分子表達(dá)水平與MBI評分結(jié)果相關(guān)性分析

治療前后兩組Nrf2、ARE表達(dá)水平與MBI評分結(jié)果呈正相關(guān),Keap1與 MBI呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05,P＜0.01),詳見圖2。

3.4.8 兩組患者細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)與 Keap1表達(dá)水平相關(guān)性分析

治療前后兩組SOD、GSH-Px水平與Keap1表達(dá)均呈負(fù)相關(guān),MDA與 Keap1表達(dá)呈正相關(guān)(P＜0.05,P＜0.01),詳見圖3。

圖1 wb條帶圖

圖2 兩組Keap1、Nrf2、ARE分子表達(dá)水平與MBI評分結(jié)果相關(guān)性分析

圖3 兩組患者細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)與Keap1表達(dá)水平相關(guān)性分析

3.4.9 兩組患者細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)與Nrf2表達(dá)水平相關(guān)性分析

治療前后兩組SOD、GSH-Px水平與Nrf2表達(dá)均呈正相關(guān),MDA與Nrf2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05,P＜0.01),詳見圖4。

圖4 兩組患者細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)指標(biāo)與Nrf2表達(dá)水平相關(guān)性分析

4 討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中氧化應(yīng)激發(fā)病機制已成為研究熱點,研究證實卒中后Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激反應(yīng)信號調(diào)節(jié)通路可激活下游因子,從而起到抗炎、抗凋亡、抗氧化應(yīng)激損傷的作用。機體內(nèi)起到抗氧化應(yīng)激的重要調(diào)節(jié)中樞為Nrf2及接頭蛋白Keap1,抗氧化反應(yīng)元件(ARE)與 Nrf2具有相互協(xié)調(diào)效應(yīng),能誘導(dǎo)編碼抗氧化蛋白的Ⅱ相解毒酶進(jìn)行表達(dá),保護(hù)細(xì)胞損傷,當(dāng)機體受到氧化應(yīng)激刺激后,會立即修飾 Keap1半胱氨酸殘基,下調(diào) Nrf2穩(wěn)定性,進(jìn)而兩者發(fā)生解離,與核內(nèi)ARE進(jìn)行結(jié)合,同時與小Maf核蛋白進(jìn)行結(jié)合后形成異二聚體,會激活SOD、GSH、NQO1等下游基因的表達(dá),對抗氧化酶水平進(jìn)行調(diào)控[9],Keap1-Nrf2/ARE調(diào)節(jié)通路還參與體內(nèi)GSH合成、抗細(xì)胞凋亡、抗氧化應(yīng)激的調(diào)節(jié)[10]。

眼針為治療卒中或其他全身疾病的特色療法,主要在眼眶周圍進(jìn)行針刺達(dá)到治療目的?！端貑枴の宀厣伞分杏姓撌觥爸T脈皆屬于目”,提示眼部可作為頭面部的標(biāo)結(jié)穴區(qū)?！鹅`樞·大惑論》中記載:“五臟六腑之精氣,皆上注于目而為睛?！闭f明五臟六腑的精氣匯注于目,是人體魂魄、精神、氣血、營衛(wèi)之所藏,與臟腑經(jīng)絡(luò)氣血運行關(guān)系緊密[11]。因此在眼眶及眼球周圍施針,可起到調(diào)節(jié)臟腑氣血、安神定志、化瘀止痛、疏經(jīng)通絡(luò)的功效。眼睛與全身臟腑通過網(wǎng)絡(luò)全身、縱橫交錯的經(jīng)脈系統(tǒng)相互聯(lián)系,可通過眼針治療對上、下焦區(qū)產(chǎn)生刺激,進(jìn)而疏通上、下肢氣血,有助于肢體功能改善及恢復(fù)。研究[12]證實,卒中后肢體痙攣患者通過眼針治療卒中偏癱患者是整體與局部辨證結(jié)合的過程,作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),產(chǎn)生不同類型的生理刺激,進(jìn)而重組相關(guān)突觸鏈功能,起到“疏通氣血、調(diào)和經(jīng)脈、培本固元”的作用,改善癥狀?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,眼睛每個穴區(qū)內(nèi)含有大量豐富的感傳神經(jīng),通過刺激可將信號傳入大腦中樞,調(diào)節(jié)神經(jīng)功能達(dá)到治病效果。研究證實在左、右眼16個穴區(qū)皮下淺筋膜內(nèi)分布有豐富的血管網(wǎng)(含有內(nèi)臟感覺神經(jīng)末梢)及軀體感覺神經(jīng),通過針刺可沿各自的感覺神經(jīng)將沖動傳遞至中樞,這也是眼針穴區(qū)辨證與臟腑相互關(guān)聯(lián)的理論基礎(chǔ)。通過眼針治療卒中,腦組織血液循環(huán)改善明顯,缺血灶血供明顯增加,進(jìn)而起到治療目的[13]。有研究證實眼針可顯著改善關(guān)節(jié)功能、恢復(fù)肌張力,進(jìn)而提高日常生活能力[14]。臨床經(jīng)驗證明運用眼針治療符合人體運動、神經(jīng)生理,遵循Brunstrom偏癱治療的恢復(fù)原理,具有顯著療效[15]。

卒中后患肢肌會發(fā)生痙攣,主要由肌張力增高引起,隨著病情發(fā)展會降低,Bruustrom分級為Ⅲ級及Ⅳ級時是卒中后肢體功能恢復(fù)的關(guān)鍵時期[16]。本研究對這一時期的患者進(jìn)行治療,比較 CSI、FMA量表評分,眼針配合 NMES治療卒中后評分結(jié)果改善優(yōu)于單純NMES治療,并且治療總有效率較對照組顯著提高,提示治療卒中后肢體痙攣,眼針配合NMES具有明顯的臨床優(yōu)勢。并且在前期研究基礎(chǔ)上證實,通過眼針治療可以對卒中后的神經(jīng)功能缺失病理改變有促進(jìn)恢復(fù)作用,且有顯著抗炎作用,并對免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)[17],其治療機制可能為通過提高機體 SOD、GSH-Px生物學(xué)活性,而下調(diào)MDA含量,進(jìn)而起到拮抗氧自由基受損[18]。本研究結(jié)果提示,治療后觀察組 MBI評分較對照組顯著提高,臨床療效較好。觀察組經(jīng)治療后較對照組,PBMC中的Keap1水平明顯下降,Nrf2、ARE分子表達(dá)水平顯著提高,證明常規(guī)療法及眼針治療均可以對 Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激信號通路進(jìn)行調(diào)控,調(diào)節(jié)相關(guān)因子的表達(dá)水平。治療后與相同時間點比較,觀察組患者Keap1表達(dá)水平降低,PBMC中的Nrf2、ARE表達(dá)水平升高較對照組顯著,證明觀察組治療后的調(diào)控作用優(yōu)于對照組。并且相關(guān)性分析表明,Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激信號通路中相關(guān)因子表達(dá)水平與MBI評分結(jié)果呈明顯的相關(guān)性,表明PBMC中的Keap1、Nrf2、ARE分子表達(dá)水平可以反映機體細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的嚴(yán)重程度,也證明PBMC中的Keap1-Nrf2/ARE氧化應(yīng)激信號通路中的相關(guān)因子在卒中發(fā)病機制中起到重要影響。SOD可以清除機體內(nèi)的氧自由基,與各種疾病及生理病理變化聯(lián)系緊密,具有抗衰老、抗福射、抗病毒、抗炎的作用[19]。SOD一直是臨床研究的熱點,已經(jīng)成為氧化應(yīng)激致病的治療新靶點。SOD由蛋白質(zhì)與金屬輔酶構(gòu)成,根據(jù)金屬輔酶可分為不同亞型(ZnSOD、CuSOD、MnSOD)。SOD有3種(SOD1-3)存在形式,ZnSOD、胞漿內(nèi)Cu-SOD,線粒體內(nèi)MnSOD,細(xì)胞外MnSOD?？勺饔糜谄缁磻?yīng)過程,轉(zhuǎn)化超氧自由基為水、H2O2,在GSH-Px作用下H2O2可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為水,起到抗氧化應(yīng)激損傷的作用[20]。MDA為不飽和脂肪酸、氧自由基的過氧化產(chǎn)物,其含量水平可反映出氧自由基的表達(dá)含量,同時可用來評估抗氧化治療的療效,因此監(jiān)測體內(nèi) MDA含量對卒中患者有重要意義,而且降低氧化自由基含量成為治療卒中新靶點。兩組治療后SOD、GSH-Px水平均明顯升高而MDA水平降低,且觀察組改善更明顯,同時兩組SOD、GSH-Px水平與Nrf2表達(dá)水平呈正相關(guān),與Keap1呈負(fù)相關(guān);兩組 MDA水平與 Nrf2表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān),與Keap1呈正相關(guān),表明Keap1、Nrf2、ARE分子表達(dá)水平可以反映機體細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的嚴(yán)重程度,也表明 Keap1-Nrf2/ARE通路調(diào)節(jié)相關(guān)因子在卒中后抗氧化應(yīng)激發(fā)病機制中起到重要影響。

綜上,眼針配合NMES治療在改善卒中患者運動功能、肢體痙攣狀態(tài)等方面優(yōu)勢明顯,可有效提高生活質(zhì)量,有助于肢體功能的恢復(fù),機制可能為通過眼針治療,干預(yù)Keap1-Nrf2/ARE通路調(diào)節(jié),上調(diào)Nrf2、ARE等機體保護(hù)因子,下調(diào)Keap1等有害性因子表達(dá)水平,進(jìn)而改善腦組織缺血再灌注損傷,減輕機體細(xì)胞氧化損傷,促進(jìn)日常生活能力恢復(fù)。