何宗林 杜先智 鄧 嘉 張國越

非小細胞肺癌(NSCLC)的發(fā)生發(fā)展，能夠導致患者近期生活質量的顯著下降，并能夠影響到患者的總體生存時間[1]。部分地區(qū)的報道研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC的發(fā)病率或者致殘率均呈現(xiàn)出了明顯的上升趨勢[2]。臨床上在探討NSCLC的發(fā)病機理的過程中，越來越多的研究關注到基因水平的改變對于NSCLC的發(fā)生影響。黑色素瘤抗原A3 mRNA(MAGE-A3 mRNA)的表達濃度的上升，能夠通過影響到癌細胞的上游轉錄活性，促進癌細胞內(nèi)不同信號通路的激活，最終參與到肺癌的病情進展過程[3-4]。為了揭示MAGE-A3 mRNA的表達與肺癌患者的病情關系，從而為臨床上肺癌的診療提供參考，選取我院病例中心收集的80例NSCLC組織及其對應的癌旁組織中作為研究對象，探討了MAGE-A3 mRNA的表達及其與肺癌的臨床病例特征關系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2015年1月至2018年5月收集的80例NSCLC組織及其對應的癌旁組織中作為研究對象。80例NSCLC患者，年齡44～75歲，平均(56.5±9.0)歲，性別：男性49例、女性31例，TNM分期：Ⅰ期22例、Ⅱ期34例、Ⅲ期18例、Ⅳ期6例；腫瘤分化程度：高分化20例、中分化35例、低分化25例；病灶最大徑≥3.0 cm 36例、<3.0 cm 44例；淋巴結轉移陽性37例；病理學類型：鱗癌10例、腺癌70例；吸煙27例。入選標準：①NSCLC患者的診斷標準參考中華醫(yī)學會制定的標準[5]；②患者年齡≤79歲；③患者手術前經(jīng)胸部CT、MRI、纖支鏡取活組織病檢或者手術后病理學檢查證實；④獲取病理學標本前，患者未接受放化療、免疫學治療；⑤納入研究對象的各類資料完整。

排除標準：①合并免疫系統(tǒng)疾病；②合并其他部位惡性腫瘤；③具有放化療史；④未經(jīng)病理學檢查證實。

1.2 qRT-PCR檢測方法

采用組織研磨的方法進行組織細胞中RNA的提取，在無酶的操作條件下加入焦炭酸二乙酯，測量RNA濃度后，逆轉錄成cDNA后進行基因擴增，應用primer 5軟件進行檢測基因的合成和引物設計，采用GADPH作為內(nèi)參，MAGE-A3 mRNA引物5'CAAGGACCAACTACAACC 3':下游5'TGCCTCTTCTTTAATTG3'，經(jīng)歷45個循環(huán)后進行曲線溶解，每個孔設置3個復孔，取平均值。Bio-Rad iQ5實時熒光定量PCR儀購自美國伯樂公司。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 NSCLC組織和癌旁組織中MAGE-A3 mRNA表達的差異

NSCLC組織中MAGE-A3 mRNA表達水平顯著高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

2.2 MAGE-A3 mRNA表達與NSCLC組織臨床病理學參數(shù)的關系

在不同TNM分期、是否發(fā)生淋巴結轉移的NSCLC組織中MAGE-A3 mRNA表達水平比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；在不同年齡、性別、病理學類型、腫瘤分化程度、不同病灶直徑、是否吸煙患者NSCLC組織中MAGE-A3 mRNA表達水平比較，差異均不具有統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表1 NSCLC組織和癌旁組織中的MAGE-A3 mRNA表達差異

表2 NSCLC組織中MAGE-A3 mRNA表達與其臨床病理學參數(shù)的關系

3 討論

MAGE-A3 mRNA是黑色素瘤相關家族成員，其能夠通過提高癌細胞內(nèi)黑色素瘤轉錄調(diào)控基因的激活程度，最終促進癌基因的異常轉錄，提高了癌細胞的增殖速度。MAGE-A3 mRNA還能夠通過提高癌細胞內(nèi)MAPK的激活程度，促進癌細胞凋亡抑制和分化成熟的障礙，促進上皮細胞的異常病變?；A領域的研究還認為，MAGE-A3 mRNA對于癌細胞癌基因錯配修復能力的影響，能夠顯著干預到癌基因突變比例的改變，加劇癌基因的激活和抑癌基因的沉默[6]。部分研究者探討了MAGE-A3 mRNA的表達與消化系統(tǒng)腫瘤的關系，認為在消化系統(tǒng)腫瘤患者中，MAGE-A3 mRN的表達明顯上升[7-8]，并認為MAGE-A3 mRNA的表達上升與消化系統(tǒng)惡性腫瘤臨床病理特征的進展密切相關，但在NSCLC患者中的分析較少。

本次研究通過基因分析的方法，探討了MAGE-A3 mRNA在肺癌患者中的表達情況，發(fā)現(xiàn)在肺癌病灶組織中，MAGE-A3 mRNA的表達水平明顯的上升，高于肺癌癌旁組織，統(tǒng)計學差異顯著，表明MAGE-A3 mRNA的高表達考慮影響到了肺癌的早期發(fā)生或者病情進展過程。MAGE-A3 mRNA的表達上升，不僅能夠通過影響到基因轉錄水平的改變，同時還能夠通過提高癌浸潤和粘附能力的改變，最終促進惡性腫瘤的病情進展。劉幫助等研究者也一致認為，在肺癌患者中，MAGE-A3 mRNA的表達程度可上升3～4倍，同時MAGE-A3 mRNA的表達還具有明顯的病情依賴性，在中晚期肺癌或者合并有明顯遠處轉移的肺癌患者中，MAGE-A3 mRNA的表達可進一步上升[9]。在探討MAGE-A3 mRNA的表達與肺癌患者臨床病例特征的關系中，發(fā)現(xiàn)在淋巴結轉移較為明顯或者肺癌臨床分期較晚的患者中，MAGE-A3 mRNA的表達水平較高，表明MAGE-A3 mRNA的表達與肺癌的臨床病例特征密切相關，這主要考慮由于MAGE-A3 mRNA的表達上升，能夠通過提高癌細胞淋巴結粘附分子adherin的表達，進而促進了淋巴結的粘附[10]；同時MAGE-A3 mRNA的表達還能夠增加癌細胞上皮間質轉換的風險，最終促進腫瘤浸潤深度和臨床分期的進展。但在不同病理學類型或者中分化程度的患者中，MAGE-A3 mRNA的表達并無明顯的差異，表明MAGE-A3 mRNA的表達并不會影響到肺癌的癌細胞分化來源，不會影響到肺癌細胞的分化成熟能力。

綜上所述，在NSLCL患者中，MAGE-A3 mRNA的表達水平明顯上升，同時MAGE-A3 mRNA的表達與肺癌患者的臨床分期或者淋巴結轉移密切相關。對于MAGE-A3 mRNA的表達在肺癌診斷過程中的價值仍然需要研究。本次研究的局限性在于未能夠通過PCR電泳的方法探討MAGE-A3 mRNA的表達情況，希望后續(xù)研究可以跟進。