胡伊豆 宋麗麗 李潔玭 陶敏賢

現(xiàn)階段，在臨床上，大腸癌是消化系統(tǒng)最為常見的一種惡性腫瘤。對大腸癌進(jìn)行治療，雖然可以采取綜合性的措施，但大腸癌患者的死亡率和發(fā)病率仍然呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢[1-3]。造成大腸癌患者死亡的主要原因就是腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移，而針對大腸癌進(jìn)行早期診斷以及預(yù)測在臨床上目前仍然缺乏行之有效的方法。人表皮生長因子受體(HER-2)和表皮生長因子受體(EGFR)都屬于受體酪氨酸激酶HER/erbB。EGFR參與細(xì)胞損傷修復(fù)、介導(dǎo)細(xì)胞黏附、侵襲、遷移、生存、分化以及激活重要的細(xì)胞信號通路等。在結(jié)構(gòu)和功能上，有近50%同源性的HER-2和EGFR均相似，具有酪氨酸激酶的活性，可刺激細(xì)胞增殖，并接受表皮生長因子樣物質(zhì)的信息。而目前為止發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生成因子就是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示，VEGF、HER-2以及EGFR的過表達(dá)與多種實體瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲密切相關(guān)。與此同時，臨床上已經(jīng)研制并開始進(jìn)行驗證針對三者的分子靶向治療藥物。然而，關(guān)于三者在大腸癌侵襲、轉(zhuǎn)移中作用的報道目前國內(nèi)綜合研究的較少?；诖耍敬窝芯吭谖以哼x取了72例大腸癌患者作為研究對象，對大腸癌中EGFR、HER-2和VEGF表達(dá)及其對大腸癌分子靶向治療的意義進(jìn)行了相應(yīng)的探究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

在我院選取了2018年1月至2019年1月收治的72例大腸癌患者作為研究對象，對72例大腸癌患者的腫瘤組織進(jìn)行切除，固定時采用甲醛和石蠟包埋的方式，確認(rèn)時則利用HE染色組織學(xué)。本次研究中，72例大腸癌患者均未接受過放化療治療，其中女性34例、男性38例，年齡34～76歲，平均年齡(68.27±6.84)歲，腫瘤大小2.1～14.8 cm，平均腫瘤大小(4.98±3.76)cm；經(jīng)Dukes分期，12例D期，14例C期，34例B期，12例A期。

1.2 方法

取72例大腸癌患者5 μm厚切片的病理組織，并運用兔抗人VEGF、HER-2以及EGFR單克隆抗體。進(jìn)行測試時借助PV-9000二步法免疫組化法，選用購自北京中杉公司的試劑盒，實施時按照試劑盒要求嚴(yán)格來進(jìn)行操作。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

VEGF定位在細(xì)胞膜，EGFR定位在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，HER-2定位在細(xì)胞質(zhì)。計算VEGF與EGFR時均根據(jù)染色強(qiáng)度以及陽性細(xì)胞數(shù)，判斷依據(jù)則可以將其得分作為參照。陽性細(xì)胞數(shù)評分標(biāo)準(zhǔn)：1分(≤25%)；2分(26%～50%)；3分(51%～74%)；4分(≥75%)。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn)：1分(淡棕色)；2分(棕黃色)；3分(棕褐色)。綜合評分標(biāo)準(zhǔn)：0～1分(-)；2～3分(+)；4～5分(++)；6～7分(+++)，其中+～+++為陽性。

2 結(jié)果

2.1 在大腸癌腫瘤組織中VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)

VEGF呈現(xiàn)為棕褐色顆粒狀，主要在胞膜上表達(dá)；EGFR呈現(xiàn)為棕黃色細(xì)顆粒，主要在胞膜和細(xì)胞質(zhì)上表達(dá)；HER-2呈現(xiàn)為棕褐色顆粒狀，主要在胞膜上表達(dá)。腫瘤的間質(zhì)均未著色。陽性結(jié)果顯示，61.11%(44/72)為EGFR陽性率，69.44%(50/72)為HER-2陽性率，61.11%(44/72)為VEGF陽性率。

2.2 大腸癌病理特點與VEGF、HER-2、EGFR表達(dá)的關(guān)系

淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵襲深度以及腫瘤大小與VEGF、HER-2、EGFR表現(xiàn)有較大關(guān)聯(lián)。見表1。

表1 VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)與大腸癌病理特點的關(guān)系/例

3 討論

EGFR是生物體正常機(jī)制得以實現(xiàn)的基礎(chǔ)，參與細(xì)胞損傷修復(fù)、介導(dǎo)細(xì)胞黏附、侵襲、遷移、生存、分化以及激活如JAK/STAT通路、PLC-γ通路等重要的細(xì)胞信號通路，是HER/erbB的重要成員，也是原癌基因HER的產(chǎn)物。相關(guān)文獻(xiàn)研究表明[4-6]：腫瘤細(xì)胞的增殖和腫瘤的發(fā)生都有EGFR的過表達(dá)參與，且EGFR的過表達(dá)參與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移時可以蛋白脂酶的活化以及對細(xì)胞骨架的表達(dá)、移動、黏附、重構(gòu)等多種機(jī)制。本次研究中，陽性結(jié)果顯示，61.11%為EGFR陽性率；有44例EGFR陽性患者，這說明了在大腸癌的轉(zhuǎn)移、侵襲和生長等生物學(xué)行為中均有EGFR的參與，且EGFR起著非常重要的作用。所以，要想抑制大腸癌的轉(zhuǎn)移、侵襲和增殖則需要對EGFR的信號通路進(jìn)行抑制?，F(xiàn)階段，在臨床上，腫瘤學(xué)的熱點就是針對EGFR的靶向治療及其藥物的研發(fā)[7-9]。EGFR靶向藥物根據(jù)不同的藥物作用機(jī)制可以分為以下五類：第一，可封閉配體分子對EGFR的激活，如ABX-EGF，EMD72000以及西妥昔單抗等針對EGFR胞外域部分的mAb；第二，抑制EGFR激酶活性，競爭結(jié)合于EGFR的TK區(qū)的作為ATP的類似物，如AG21478、OSI-774以及ZD1839等小分子激酶活性抑制劑，且主要針對EGFR激酶區(qū)；第三，對EGFR進(jìn)行特異性降解，利用RNAi作用機(jī)制的；第四，對富含EGFR腫瘤細(xì)胞選擇性殺死，能識別EGFR的放射性粒子、細(xì)胞殺傷因子、細(xì)胞毒素等；第五，抑制EGFR的激活，對EGFR的二聚化/寡聚化起到阻礙作用。對于晚期轉(zhuǎn)移性大腸癌的解救治療現(xiàn)階段主要采用的藥物就是EGFR靶向藥物。相對于乳腺癌的內(nèi)分泌治療而言，排除臨床認(rèn)知不一致、藥物價格昂貴等因素，在早期大腸癌與進(jìn)展期大腸癌中是否可以把EGFR靶向藥物作為EGFR過表達(dá)的一種重要的治療措施，還需要進(jìn)行多學(xué)科、多方面的探索。

HER-2與EGFR都是HER/erbB的成員，在結(jié)構(gòu)和功能上，有近50%同源性，具有酪氨酸激酶的活性，可刺激細(xì)胞增殖，并接受表皮生長因子樣物質(zhì)的信息。HER-2和EGFR具有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，其結(jié)構(gòu)或表達(dá)調(diào)控會在受到體內(nèi)外某些因素作用后失常從而被激活，而HER-2在一般情況下則處于非激活狀態(tài)，主要參與細(xì)胞生長分化的調(diào)節(jié)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)現(xiàn)實，EGFR的酶解肽段與HER-2原癌基因在鳥紅細(xì)胞增多癥病毒中的產(chǎn)物具有極大的相似性。HER-2原癌基因哪怕是在不存在配體的情況下，也可以造成腫瘤的發(fā)生，使細(xì)胞生長失控，對EGFR的蛋白激酶也可以進(jìn)行持續(xù)的激活。在臨床上，現(xiàn)階段在乳腺癌領(lǐng)域應(yīng)用HER-2及其靶向治療已經(jīng)很廣泛，只是仍然未被廣泛用于大腸癌領(lǐng)域。本次研究中，陽性結(jié)果顯示，有50例HER-2陽性患者，69.44%為HER-2陽性率，這說明了在大腸癌的轉(zhuǎn)移、侵襲和生長等生物學(xué)行為中均有HER-2的參與，且HER-2起著非常重要的作用。所以，大腸癌由于HER-2過表達(dá)的侵襲和轉(zhuǎn)移，從理論上講，也可以被HER-2的靶向藥物所抑制。在乳腺癌由于HER-2過表達(dá)的靶向治療中應(yīng)用曲妥珠單抗的臨床效果已經(jīng)被公認(rèn)，然而進(jìn)展期大腸癌的治療以及HER-2過表達(dá)的晚期大腸癌也能否進(jìn)行應(yīng)用，就需要進(jìn)行深入探索。

腫瘤生長可促使VEGF產(chǎn)量增加，新生血管則可使腫瘤繼續(xù)生長，VEGF可以增加血管通透性，促使新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞成活，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，而目前為止發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生成因子就是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)[10-13]。腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲和增殖等生物學(xué)行為的基礎(chǔ)就是血管生成。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)顯示，在大部分人類腫瘤中，VEGF均有過表達(dá)，且患者的腫瘤預(yù)后與VEGF及其受體的表達(dá)密切相關(guān)。本次研究中，陽性結(jié)果顯示，有44例VEGF陽性患者，61.11%為VEGF陽性率，這說明了在大腸癌的轉(zhuǎn)移、侵襲和生長等生物學(xué)行為中均有VEGF的參與，且VEGF起著非常重要的作用[14]。所以，大腸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和增殖，從理論上講，也可以被VEGF及其受體的靶向藥物所抑制。在臨床上，現(xiàn)階段對腫瘤區(qū)域血管的形成進(jìn)行抑制時，阻斷VEGF受體的活化時通過與VEGF受體的特異性結(jié)合，作用于VEGF的人源化mAb則應(yīng)用的是貝伐單抗。PTK787/ZK222584、索拉非尼以及SU11248等均是針對VEGF受體的藥物。在臨床上，廣泛應(yīng)用這些藥物可以為治療大腸癌患者增添新的選擇。通過本次研究，我們可以得出，大腸癌腫瘤組織中VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)可以作為篩選高危轉(zhuǎn)移患者、判斷大腸癌預(yù)后的有效指標(biāo)，且在大腸癌腫瘤組織中對VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)進(jìn)行聯(lián)合檢測與傳統(tǒng)化療藥物在不良反應(yīng)和作用機(jī)制方面并不重復(fù)。因此，對于大腸癌患者而言，針對VEGF、HER-2、EGFR的靶向治療藥物可以為其提供一個個體化、綜合的、有效的治療方案。但是，在臨床上對大腸癌進(jìn)行靶向治療時，以下問題依然需要解決：第一，篩查分子生物學(xué)指標(biāo)的問題，在臨床上，現(xiàn)階段多是采用免疫組化方法來檢測VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)，這種方式雖然容易操作、簡單方便，但是卻無法定量檢測，其檢測結(jié)果也容易受到操作水平、抗體試劑的質(zhì)量等因素的影響，這也是造成VEGF、HER-2、EGFR的陽性表達(dá)率在21.4%～74.1%的較大區(qū)間浮動的原因。為了對上述免疫組織化學(xué)檢測方法的缺陷進(jìn)行預(yù)防，是否可以使用如固定克隆系、固定廠商等統(tǒng)一試劑標(biāo)準(zhǔn)或者采用如定量PCR、FISH等更穩(wěn)定的篩查方法值得進(jìn)一步探究；第二，VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)與大腸癌靶向藥物治療之間的關(guān)系需要進(jìn)一步明確，且大腸癌靶向治療的適應(yīng)證如何來制定統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，且以VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)情況為依據(jù)也是值得探究的；第三，在對大腸癌進(jìn)行治療時使用靶向藥物的最佳劑量和時機(jī)也需要進(jìn)行確定；第四，多種分子靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用以及放療、化療、手術(shù)與靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用也需要進(jìn)行不斷的探索。

總而言之，VEGF、HER-2、EGFR的表達(dá)與大腸癌的轉(zhuǎn)移、生長、侵襲都有著較大關(guān)聯(lián)，因此，VEGF、HER-2、EGFR三者的聯(lián)合篩查可以為靶向治療提供用藥指導(dǎo)，且更利于高?；颊叩脑缙谂袛唷?/p>