任龍龍 柴 臻 高 智

骨巨細(xì)胞瘤(giant cell tumor of bone，GCTB)是一種常見(jiàn)的原發(fā)骨腫瘤，約占臨床全部骨腫瘤的6%。GCTB的腫瘤組織主要由多核巨細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞組成，好發(fā)于長(zhǎng)骨干骺端與胸椎、骶骨處[1-2]，在臨床上主要表現(xiàn)為局部持續(xù)性疼痛、神經(jīng)功能受損等[3]。該病也是一種潛在惡性或介于良惡性之間的溶骨性腫瘤，術(shù)后復(fù)發(fā)率比較高，部分患者可發(fā)生腫瘤轉(zhuǎn)移，因此患者死亡率比較高[4-5]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，研究表明骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展為多基因參與和多階段協(xié)同作用的結(jié)果，其具有永久增殖能力及刺激單核細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞的能力，某些蛋白的異常表達(dá)可使細(xì)胞具有惡性特征，促使細(xì)胞分化和無(wú)限制生長(zhǎng)[6-7]。乙酰肝素共聚合酶(exostoses，EXT)編碼具有746個(gè)氨基酸殘基的蛋白，為位于高爾基體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的跨膜蛋白[8-9]。EXT有可能通過(guò)影響表皮生長(zhǎng)因子受體糖基化來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期或細(xì)胞分化，增加表皮生長(zhǎng)因子和表皮生長(zhǎng)因子受體復(fù)合體的內(nèi)吞作用，從而影響細(xì)胞的下游信號(hào)[10-11]。本文具體探討了EXT表達(dá)在骨巨細(xì)胞瘤中的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2014年7月至2019年1月選擇在本院診治的骨巨細(xì)胞瘤患者101例作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：病理組織學(xué)證實(shí)為骨巨細(xì)胞瘤；臨床資料與病理資料完整；入院前未行任何治療；研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)；患者簽署了知情同意書(shū)；年齡20～80歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：精神疾病患者；妊娠與哺乳期患者；其他惡性腫瘤轉(zhuǎn)移患者；合并嚴(yán)重心肝腎異?；颊摺?/p>

在101例患者中，男性61例，女性40例；轉(zhuǎn)移情況：淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，肺轉(zhuǎn)移20例，肝轉(zhuǎn)移11例；年齡最小26歲，最大78歲，平均年齡(56.22±5.29)歲；發(fā)病部位：肱骨9例，橈骨21例，尺骨20例，髂骨10例，股骨30例，脛骨10例，腓骨1例；平均體重指數(shù)為(20.42±2.13)kg/m2；組織學(xué)分化：高分化40例，低分化40例，中分化21例；Jaffe病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)60例，Ⅱ級(jí)30例，Ⅲ級(jí)11例。

1.2 免疫組化檢測(cè)

取所有患者的病灶組織標(biāo)本與瘤旁組織(距瘤腫邊緣2 cm以外細(xì)胞組織)標(biāo)本，所有標(biāo)本術(shù)后均經(jīng)4%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。

采用二步法免疫組化染色，一抗為兔抗人EXT單克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，二抗為二步法檢測(cè)試劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)，一抗用PBS稀釋?zhuān)ぷ鞯味葹?∶200。石蠟切片脫蠟、水化，采用枸櫞酸抗原修復(fù)液進(jìn)行抗原修復(fù)；蒸餾水沖洗2次，每次5 min；滴加3%雙氧水50 μl，37 ℃孵育20 min；PBS沖洗3次，每次5 min；滴加一抗，4 ℃孵育過(guò)夜；PBS沖洗3次，每次5 min；滴加二抗，37 ℃孵育30 min；PBS沖洗3次，每次5 min；DAB顯色，蘇木精中染色；酒精梯度脫水，中性樹(shù)膠封片，鏡下觀察。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

EXT表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞呈棕黃色，定位于瘤組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞上。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)區(qū)域，放大倍數(shù)為200倍，根據(jù)陽(yáng)性信號(hào)的強(qiáng)弱和面積判斷結(jié)果，乘積之和≥2分判斷為陽(yáng)性。調(diào)查所有患者的臨床病理特征，包括淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分化、Jaffe病理分級(jí)等。同時(shí)隨訪到2019年8月，統(tǒng)計(jì)患者的生存率。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 20.00軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用例數(shù)或者百分比表示，計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，對(duì)比為t檢驗(yàn)與四格表卡方χ2檢驗(yàn)法等，多因素分析采用多元回歸logistic分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 EXT表達(dá)陽(yáng)性對(duì)比

在101例患者中，病灶組織的EXT表達(dá)陽(yáng)性率為66.3%(67/101)，顯著高于瘤旁組織的9.9%(10/101)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=68.187，P=0.000)。

2.2 EXT表達(dá)陽(yáng)性率與臨床病理特征的相關(guān)性

在骨巨細(xì)胞瘤的病灶組織中，EXT表達(dá)陽(yáng)性率與Jaffe病理分級(jí)、分化情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 骨巨細(xì)胞瘤中EXT的表達(dá)與其臨床病理特征的相關(guān)性(例，%)

2.3 生存情況

隨訪到2019年8月，101例患者中生存87例，死亡14例，死亡率為13.9%。

2.4 影響因素分析

在101例患者中，以預(yù)后隨訪死亡作為因變量，以臨床資料、病理特征與EXT表達(dá)陽(yáng)性率作為自變量進(jìn)行多元回歸logistic分析，結(jié)果顯示肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、Jaffe病理分級(jí)與EXT表達(dá)陽(yáng)性率為影響骨巨細(xì)胞瘤預(yù)后死亡的主要因素(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 影響骨巨細(xì)胞瘤患者預(yù)后的因素分析(n=101)

3 討論

骨巨細(xì)胞瘤是一種常見(jiàn)的骨原發(fā)性腫瘤，包括多核巨細(xì)胞、單核細(xì)胞樣細(xì)胞及單核基質(zhì)細(xì)胞，早期多為良性腫瘤[12]，但是其具有一定的侵襲性，易復(fù)發(fā)，有潛在惡變的可能。骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)病年齡多在20～60歲之間，其病變主要見(jiàn)于骨骺與四肢，腫瘤富含細(xì)胞，由單核基質(zhì)細(xì)胞和彌散分布其中的多核巨細(xì)胞組成[13]。該病的復(fù)發(fā)率比較高，少數(shù)患者會(huì)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移與肝轉(zhuǎn)移，因此患者的死亡率比較高[14]。

當(dāng)前骨巨細(xì)胞瘤發(fā)生和發(fā)展的信號(hào)通路尚待闡明。EXT的表達(dá)和細(xì)胞周期密切相關(guān)，在細(xì)胞分化階段，如果EXT在成熟細(xì)胞中活性很高，可以降低細(xì)胞和基質(zhì)間粘著，可促使細(xì)胞產(chǎn)生癌變，同時(shí)出現(xiàn)早期的分化抗原[15]。本研究顯示在101例患者中，病灶組織的EXT表達(dá)陽(yáng)性率為66.3%，顯著高于瘤旁組織的9.9%，表明骨巨細(xì)胞瘤患者多伴隨有EXT的高表達(dá)，其作用機(jī)制可能在于EXT能夠引起多種細(xì)胞因子的釋放，從而促進(jìn)骨巨細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖和抗凋亡作用，進(jìn)而導(dǎo)致骨巨細(xì)胞瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移[16-17]。

骨巨細(xì)胞瘤來(lái)源于骨髓中的間葉細(xì)胞，其中巨細(xì)胞腫瘤基質(zhì)細(xì)胞C具有永久增殖能力及刺激單核細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞的能力，為此構(gòu)成骨巨細(xì)胞瘤的主要腫瘤細(xì)胞成分[18]。EXT可促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附與增殖，增加細(xì)胞間及細(xì)胞與細(xì)胞基質(zhì)間的黏附作用，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的通透性[19]。本研究顯示在骨巨細(xì)胞瘤的病灶組織中，EXT表達(dá)陽(yáng)性率與Jaffe病理分級(jí)、分化情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移都有顯著相關(guān)性，表明骨巨細(xì)胞瘤的EXT表達(dá)與臨床病理特征顯著相關(guān)。當(dāng)前也有研究顯示EXT可以抑制p38細(xì)胞分裂素活化蛋白激酶磷酸化，從而促使多種促血管生成因子、炎癥因子的表達(dá)，從而發(fā)揮促癌作用[20-21]。

當(dāng)前骨巨細(xì)胞瘤在生物學(xué)發(fā)展過(guò)程仍需進(jìn)一步研究，為此需要從病理生物學(xué)和分子生物學(xué)角度來(lái)確定骨巨細(xì)胞瘤的特點(diǎn)[22]。本研究隨訪到2019年8月，101例患者中生存87例，死亡14例，死亡率為13.9%；多元回歸logistic分析顯示肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、Jaffe病理分級(jí)與EXT表達(dá)陽(yáng)性率為影響骨巨細(xì)胞瘤預(yù)后死亡的主要因素。EXT為單拷貝基因，是高度糖基化的分子[23]。EXT蛋白是由胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞質(zhì)區(qū)等組成，胞外區(qū)含有特征性的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。活化的EXT可通過(guò)其胞質(zhì)區(qū)與p59細(xì)胞形成復(fù)合物進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞局部黏附聚集，參與了血管新生中內(nèi)皮細(xì)胞的黏附、增殖和遷移[24]。并且EXT的高表達(dá)還可主動(dòng)攻擊與之接觸的免疫活性細(xì)胞，通過(guò)表達(dá)EXT傳導(dǎo)信號(hào)殺傷浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞，并最終導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，從而影響患者的生存期[25]。本研究也存在一定的不足，隨訪時(shí)間比較短，且納入樣本數(shù)量少，調(diào)查分析資料還不夠，因此后續(xù)研究將擴(kuò)大樣本進(jìn)行深入分析。

總之，EXT在骨巨細(xì)胞瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，與患者的臨床病理特征密切相關(guān)，可以作為預(yù)測(cè)骨巨細(xì)胞瘤患者預(yù)后的有效指標(biāo)。