包英才，Daariimaa Khurelbat，Davaadagva Damdinjav

(1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.蒙古國立醫(yī)科大學(xué)，蒙古 烏蘭巴托市 000000)

傳統(tǒng)蒙藥秘方shimshin-6是蒙醫(yī)傳統(tǒng)臨床用藥，蒙醫(yī)結(jié)合了蒙古民族的游牧文化和生活經(jīng)驗(yàn)，是蒙古族偉大智慧結(jié)晶[1-4]。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

藥物：傳統(tǒng)秘方Shimshin-6粉由蒙古國國立醫(yī)科大學(xué)提供。儀器及試劑：高效液相色譜儀。動物：成年雄性 SPF 級 SD 大鼠(200±20 g)，購于常春實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)期間動物保持自由飲水和進(jìn)食，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周。動物實(shí)驗(yàn)獲得蒙古國國立醫(yī)科大學(xué)論理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

分組、造模及給藥。將大鼠隨機(jī)分為3組，每組15只大鼠。對照組(CG)、模型組(MG)和給藥組(AG)。對所有的大鼠皮下注射氫化克的松，以引發(fā)閉經(jīng)模型。分別以大、中、小劑量濃度對Shimshin-6皮下給予AG 21 d。分別給CG和MG動物0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液。在第22 d，通過腹膜內(nèi)注射10%水合氯乙酸，使來自CG、MG和AG的所有大鼠安樂死。從腹主動脈中采集血樣，分離血清并保存在-80℃溫度下。

代謝組學(xué)方法：將所有樣品在4℃的冰上融化，然后取100 μL的每個樣品并置于Eppendorf(EP)管中，然后與400 μL的萃取液(甲醇∶乙腈=1∶1)渦旋30 s，然后超聲處理5 min。將樣品在4℃下以12 000 rpm離心15 min，將上清液轉(zhuǎn)移到EP管中。使用真空濃縮器干燥樣品。加100 μL乙腈和水，將樣品渦旋30 s，在4℃水浴中超聲10 min。將EP在12 000 rpm下離心15 min，最后上清液轉(zhuǎn)移至2 mL LC/MS玻璃小瓶中。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

獲得了10個閉經(jīng)模型大鼠的兩組血液樣品的總離子色譜圖。分析并選擇了血液水平顯著變化的代謝物，結(jié)果如圖1和表1。

圖1 A組與F組的層次聚類分析熱圖Fig.1 Heatmap of hierarchical clustering analysis for group A vs F

表1 simxing-6的模型大鼠和未服用S-6的模型大鼠之間的血清代謝譜差異列表Table.1 List of differential serum metabolic profiles between model rats admin simxing-6 and model rats without S-6.

3 結(jié)果與討論

通過對潛在生物標(biāo)志物進(jìn)行生化和通路分析，結(jié)果表明，主要與丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，色氨酸代謝，苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸生物合成有關(guān)。綜上，simixing-6對大鼠閉經(jīng)有明顯的改善作用，起效機(jī)制涉及能量代謝、腸道穩(wěn)態(tài)、氧化應(yīng)激和免疫功能[5-6]。