劉麗敏

(黑龍江省第六地質(zhì)勘查院實驗室，黑龍江 佳木斯 154000)

近些年，水資源污染問題成為社會各界關(guān)注的焦點，尤其是生活飲用水質(zhì)量直接關(guān)系著人體健康，備受人們重視?？偞竽c菌群檢測是評價生活飲用水衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，所以切實做好總大腸菌群的檢測工作具有重要的現(xiàn)實意義。

1 檢測材料

為了更好地剖析常見的三種總大腸菌群檢測方法的優(yōu)缺點，使其得到更為有效的應(yīng)用，隨機(jī)選取120份生活飲用水，其中包括40份自來水、40份深井水、40份二次供水，并嚴(yán)格按照國標(biāo)規(guī)范的相關(guān)要求進(jìn)行操作，使其成為本次實驗的檢測樣品。

在檢測試劑與材料的選擇上，主要包括0.85%的生理鹽水、單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、腦心浸出液、煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)液、品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、革蘭染色液、恒溫培養(yǎng)箱、水過濾裝置、生物顯微鏡、一次性膜杯套裝。

2 三種檢測方法

第一，多管發(fā)酵法。根據(jù)在適宜的溫度下大腸菌群能夠發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的基本原理，實驗過程中將無菌取出的10 mL水樣加至10 mL的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，再將無菌取出的1 mL水樣以及按照1∶10比例稀釋的稀釋液1 mL加至10 mL單料乳糖蛋白胨的培養(yǎng)液中，每一稀釋度都要進(jìn)行接種，總計接種5管即可。將所有的培養(yǎng)管放入培養(yǎng)箱24 h，培養(yǎng)箱的溫度控制在37℃。若24 h以后培養(yǎng)管沒有出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則可以報告總大腸菌群陰性，若發(fā)生了產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則繼續(xù)按照步驟予以實驗。即：將發(fā)生變化的培養(yǎng)管分別置于伊紅美蘭培養(yǎng)基上進(jìn)行接種，觀察菌落的實際形態(tài)，培養(yǎng)時間為24 h，培養(yǎng)箱的溫度不變。24 h后要對可疑的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢及證實實驗，經(jīng)過染色鏡檢結(jié)果為革蘭陰性無芽孢桿菌的，需要再加至乳糖蛋白胨的培養(yǎng)管中進(jìn)行接種，培養(yǎng)24 h后，產(chǎn)酸產(chǎn)氣則可以證實其存在總大腸菌群。

第二，煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法。實驗過程中，將無菌取出的10 mL水樣加至10 mL的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中。將無菌取出的水樣1 mL以及按照1∶10比例稀釋的稀釋液1 mL加至10 mL單料乳糖蛋白胨的培養(yǎng)液中，每一稀釋度都要進(jìn)行接種，總計接種5管即可。將所有的培養(yǎng)管均放入培養(yǎng)箱中24 h，培養(yǎng)箱溫度控制在37℃。若24 h后培養(yǎng)管沒有出現(xiàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則可以報告總大腸菌群陰性，若發(fā)生了產(chǎn)酸產(chǎn)氣現(xiàn)象，則繼續(xù)按照步驟予以實驗。即：將發(fā)生變化的培養(yǎng)管在煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液中接種24 h，培養(yǎng)箱的溫度不變。24 h后，培養(yǎng)管若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，那么則可以證實其存在總大腸菌群。

第三，濾膜法。實驗過程中，將無菌取出的100 mL無菌水樣置于孔徑為0.45 μm的濾膜上進(jìn)行過濾，借助無菌鑷子將細(xì)菌面朝上的濾膜轉(zhuǎn)移到品紅亞硫酸鈉平板上，并確保其完全貼合于培養(yǎng)基上，將平皿倒置，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，培養(yǎng)箱溫度控制在37℃。24 h后對可疑的菌落進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢，經(jīng)過染色鏡檢結(jié)果為革蘭陰性無芽孢桿菌的，需要在乳糖蛋白胨的培養(yǎng)管中進(jìn)行接種，培養(yǎng)24 h以后，產(chǎn)酸產(chǎn)氣則可以證實其存在總大腸菌群。

3 實驗結(jié)果

在統(tǒng)計學(xué)處理上，實驗利用SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件，用%來表示計數(shù)資料，χ2檢驗，P<0.05則差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

在生活飲用水總大腸菌群檢測過程中使用多管發(fā)酵法、煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法及濾膜法，分別檢測120份無菌取出的水樣，其中多管發(fā)酵法與煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法得到了相同的陽性率。對三種檢測方法得到的陽性率進(jìn)行比較，P>0.05，差異不具備統(tǒng)計學(xué)意義，如表1所示。但是，從實際的檢驗時間上來看，煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法所用的時間最少，檢測時間明顯縮短了24 h。

表1 三種檢測方法檢測生活飲用水總大腸菌群的結(jié)果Tab.1 Results of three testing methods in testing total coliform group in domestic drinking water

而在不同水樣的總大腸菌群檢測上，利用三種檢測方法得出的結(jié)果如表2所示。其中，在自來水的檢測上使用濾膜法得到的陽性率要明顯高于其他兩種檢測方法，但是在三種檢測方法的陽性率比較上，P>0.05，差異仍不具備統(tǒng)計學(xué)意義。

表2 三種檢測方法檢測不同水樣總大腸菌群的結(jié)果Tab.2 Results of three testing methods in testing total coliform group in different water samples

4 結(jié)論

多管發(fā)酵法的最大優(yōu)勢在于實驗成本相對較低，對檢測設(shè)備沒有較高的要求，且對操作人員本身的專業(yè)素養(yǎng)要求較低，只要經(jīng)過微生物學(xué)的基本培訓(xùn)即可開展操作，可以用于濁度相對較大的水樣檢測中。但是多管發(fā)酵法的實驗周期較長，檢驗工作量較大，需要通過MPN表檢索、計算，方可得到實驗結(jié)果。若總大腸桿菌的實際數(shù)量相對較少，那么很有可能造成漏檢問題，精確性一般，在自來水的檢測上不太適用。

煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法的優(yōu)勢在于檢測范圍較大，實驗周期較短，操作較為簡單，可對大量的樣本進(jìn)行批量快速檢測，缺點是實驗成本偏高。

濾膜法適合應(yīng)用在自來水等相對濁度較低的水樣中進(jìn)行檢測，其最大優(yōu)勢是可定量計算，能夠?qū)Υ笈康臉悠穼嵤z測。缺點是實驗過程中必須要具備抽濾設(shè)備，且操作人員必須在無菌環(huán)境下開展作業(yè)，對于那些容易造成濾孔堵塞、濁度雜質(zhì)較大的水樣不適用，所獲得的結(jié)果也極易受到非大腸菌群細(xì)菌的影響，所以檢測結(jié)果需要進(jìn)一步確定。確認(rèn)結(jié)果通常需要2～3 d，不適合應(yīng)用于突發(fā)性的公共衛(wèi)生事件。

可見，深井水等濁度較高的水樣中適用多管發(fā)酵法與煌綠乳糖膽鹽培養(yǎng)液法，自來水等濁度較低的水樣則適用濾膜法?；途G乳糖膽鹽培養(yǎng)液法更適合應(yīng)用于突發(fā)公共衛(wèi)生事件。為了最大限度保證總大腸菌群的準(zhǔn)確性，還應(yīng)該結(jié)合水樣的實際情況，選擇最為適宜的檢測方法。