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        血凝和血凝抑制試驗

        2020-10-15 03:37:44陳美艷羅福斌
        云南農(nóng)業(yè) 2020年9期
        關(guān)鍵詞:血清

        陳美艷,羅福斌,任 芬

        (1.新平縣動物疫病預(yù)防控制中心,云南新平 653400;2.新平縣畜牧站,云南新平 653400)

        血凝、血凝抑制試驗是目前獸醫(yī)實驗室用于禽疫苗免疫抗體水平監(jiān)測技術(shù),也可用已知標(biāo)準(zhǔn)陽性血清(抗體)監(jiān)測是否有該病毒(抗原)的存在。實驗室用血凝、血凝抑制試驗檢測雞血清中禽流感和新城疫抗體,其血凝反應(yīng)(HA)可以理解為,禽流感病毒和新城疫病毒或其血凝素能和雞紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)致使紅細(xì)胞不能自然沉降。血凝抑制反應(yīng)(HI)理解為,當(dāng)禽流感和新城疫工作抗原和血清樣品中抗體反應(yīng)后,則紅細(xì)胞就不能再與工作抗原發(fā)生反應(yīng),這時紅細(xì)胞就呈現(xiàn)出自然沉降現(xiàn)象,當(dāng)血清樣品抗體不足以和工作抗原反應(yīng)時,工作抗原就和紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)。

        1 材料與方法

        1.1 供試材料和試劑

        96孔U型微量反應(yīng)板、移液槍及配套滴頭,禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原、禽流感病毒H9亞型陽性血清、陰性血清、體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液、滅菌生理鹽水和加樣槽。

        1.2 試驗方法

        為避免出現(xiàn)紅細(xì)胞自凝現(xiàn)象,一般選用至少3只健康公雞分別采血,并清洗紅細(xì)胞后配制成體積分?jǐn)?shù)為10%紅細(xì)胞懸液,最后配制成體積分?jǐn)?shù)為1%紅細(xì)胞懸液。若1%雞紅細(xì)胞懸液用量大于100 mL時也可直接配制。一般按照等比例混勻體積分?jǐn)?shù)為1%雞紅細(xì)胞懸液,如在試驗過程中遇到特殊情況,無法滿足等量比例混合時也可適當(dāng)調(diào)整比例。整個試驗過程只能使用同1份雞紅細(xì)胞懸液,并保持混勻以確保紅細(xì)胞均勻;如有紅細(xì)胞破裂或者被污染情況,試驗無效。

        1.2.2 血凝(HA)試驗,即抗原效價

        按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血凝試驗,根據(jù)熟練程度選擇平行測定抗原血凝效價,一般選擇3個平行測定,U型微量反應(yīng)孔反應(yīng)體系為0.075 mL混合液。使用抗原:禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原,批號:2018006,生產(chǎn)日期:20181228,有效期至20201227,生產(chǎn)廠家:哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司。

        1.2.3 4HAU抗原標(biāo)定試驗

        選用4單位抗原、2單位抗原、1單位抗原,1/2單位抗原、1/4單位抗原和1組生理鹽水對照進(jìn)行標(biāo)定。U型微量反應(yīng)孔反應(yīng)體系為0.05 mL混合液。

        1.2.4 血凝抑制試驗(HI)

        按照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行血凝抑制試驗,U型微量反應(yīng)孔反應(yīng)體系為0.075 mL混合液。使用陽性血清名稱:禽流感病毒H9亞型陽性血清,批號:2018002,生產(chǎn)日期:20180906,有效期至20200907。生產(chǎn)廠家:哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 抗原血凝(HA)試驗

        室溫23 ℃下靜置40 min觀察結(jié)果。圖1、圖2為禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原血凝試驗結(jié)果。

        以完全血凝(將反應(yīng)板傾斜時紅細(xì)胞不滑落)的抗原最高稀釋倍數(shù)為一個血凝單位(HAU)為判定標(biāo)準(zhǔn),該試驗對照孔上層清亮,紅細(xì)胞完全沉降,故將上述抗原血凝的終點滴度判定為1∶512,則4HAU工作抗原的稀釋倍數(shù)為1∶128。同時也配制稀釋倍數(shù)為1∶64 的工作抗原。

        全內(nèi)臟反位(Situs Inversus Viscerum)又稱“鏡面人”或“鏡像人”,是指人的心臟、 肝臟、脾臟、膽囊、腎臟、胃、腸等器官的解剖位置與正常人完全相反。此種病例極其罕見,最近本院脊柱外科收治1例“鏡面人”合并腰椎間盤突出癥病例,采用經(jīng)Quadrant通道系統(tǒng)椎間孔腰椎椎間融合術(shù)(Mis-TLIF)治療,現(xiàn)將診治過程報道如下。

        2.2 4HAU抗原標(biāo)定試驗

        將上述抗原血凝的終點滴度判定為1∶512,4HAU工作抗原的稀釋倍數(shù)為1∶128,即0.1 mL抗原懸液混入12.7 mL生理鹽水中充分混勻。

        標(biāo)定結(jié)果如圖3、圖4。4單位抗原、2單位抗原完全凝集,1單位抗原少于85%凝集,1/2單位抗原紅細(xì)胞流淌,判定工作抗原液中抗原稍微偏少,所測血清抗體滴度可能偏高。

        將上述抗原血凝的終點滴度判定為1∶256,4HAU工作抗原的稀釋倍數(shù)為1∶64,即0.1 mL抗原懸液混入6.3 mL生理鹽水中充分混勻。

        標(biāo)定結(jié)果如圖5、圖6。4單位抗原、2單位抗原、1單位抗原完全凝集,1/2單位抗原約為60%凝集,判定工作抗原液中抗原稍微偏多,所測血清抗體滴度可能偏低。

        將1∶128的工作抗原和1∶64的工作抗原進(jìn)行1∶1(5 mL+5 mL)混勻標(biāo)定結(jié)果如圖7、圖8。4單位抗原,2單位抗原,1單位抗原完全凝集,1/2單位抗原約為50%凝集,判定4HAU工作抗原液配制準(zhǔn)確。

        2.3 血凝抑制試驗(HI)

        本次試驗所測陰性血清滴度小于1 log2,陽性血清滴度大于說明書1個滴度,試驗結(jié)果有效。圖9為本次試驗所測陰性血清滴度,圖10、圖11為所測陽性血清滴度。將反應(yīng)板傾斜時3種4HAU工作抗原所測陽性血清都是第8孔和生理鹽水對照孔中紅細(xì)胞的流淌狀態(tài)一致。

        3 結(jié) 論

        3.1 抗原血凝的終點滴度判定以紅細(xì)胞不流淌為標(biāo)準(zhǔn)

        所配制4HAU工作抗原標(biāo)定時,1單位抗原孔中紅細(xì)胞沒有達(dá)到100%凝集。工作抗原液中抗原稍微偏少,其所測血清抗體滴度可能會偏高。

        3.2 抗原血凝的終點滴度判定以紅細(xì)胞出現(xiàn)沉降為標(biāo)準(zhǔn)

        所測抗原血凝效價為1∶512,所配制的4HAU工作抗原標(biāo)定時,1/2單位抗原大于50%以上凝集,且1/4單位抗原孔中紅細(xì)胞流淌狀態(tài)沒有達(dá)到生理鹽水對照孔中紅細(xì)胞的流淌標(biāo)準(zhǔn)。判定工作抗原液中抗原稍微偏多,所測血清抗體滴度可能會偏低。

        3.3 將兩種工作抗原懸液以1∶1比例混勻后標(biāo)定

        4HAU工作抗原液標(biāo)定時完全符合工作抗原標(biāo)定要求。

        3.4 將3種工作抗原懸液用于測定禽流感病毒H9亞型陽性血清

        其HI滴度完全一致并無差異。

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