陳興財(cái) 梁瑞向

【摘要】探討免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法測(cè)定單克隆病患者血清免疫球蛋白結(jié)果的差異情況。方法 收集36例含不同濃度M蛋白的單克隆病患者和16例無M蛋白的健康體檢者（對(duì)照組）血清標(biāo)本，分別用免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法進(jìn)行免疫球蛋白定量檢測(cè)，對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 無M蛋白的正常對(duì)照組和當(dāng)M蛋白含量<29.3%時(shí)，兩種方法的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好r2=0.901，結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），當(dāng)M蛋白含量>29.3%時(shí)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異顯著（P<0.05）。結(jié)論 M蛋白含量>29.3%，免疫透射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果明顯高于電泳法檢測(cè)結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】免疫球蛋白;免疫透射比濁法;瓊脂糖電泳法;M蛋白

【中圖分類號(hào)】R392.7 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ?【文章編號(hào)】2107-2306（2020）03-234-02

血清免疫球蛋白（Ig）的檢測(cè)可以判斷機(jī)體體液免疫功能，是免疫性疾病特別是單克隆病輔助診斷和療效監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)。筆者在檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，在用免疫透射比濁法檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤或巨球蛋白血癥等單克隆病患者血清Ig時(shí)，常常出現(xiàn)Ig結(jié)果占球蛋白比例高達(dá)95%甚至超過球蛋白總量的情況，與血清蛋白電泳檢測(cè)的γ區(qū)免疫球蛋白結(jié)果也存在較大差異。因此，本文擬對(duì)兩種方法測(cè)得的單克隆病患者血清免疫球蛋白結(jié)果是否存在一致性進(jìn)行探討。

1 ?材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)對(duì)象 ?收集2019年4-12月在桂林市人民醫(yī)院檢測(cè)發(fā)現(xiàn)M蛋白的住院及門診復(fù)診患者36例。男15例，女21例，年齡18～88歲。 另外隨機(jī)選取同期在院檢測(cè)無M蛋白的患者16例，其中男7例，女9例，年齡22-76歲?；颊呔崭共裳?，2小時(shí)內(nèi)分離血清，排除溶血、脂血和黃疸標(biāo)本。

1.2儀器和試劑 ? 德國羅氏Cobas8000 c702全自動(dòng)生化分析儀，羅氏原裝IgA、IgG、IgM、TP試劑及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。法國Sebia 全自動(dòng)瓊脂糖電泳分析儀及配套血清蛋白瓊脂凝膠板和試劑，配套掃描儀和分析軟件。

1.3方法

1.3.1 化學(xué)法 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用免疫透射比濁法檢測(cè)，根據(jù)免疫球蛋白的組成特點(diǎn)，IgD和IgE在人血清中含量甚微，檢測(cè)IgA、IgG、IgM三種免疫球蛋白就基本可以代表血清免疫球蛋白水平。本文擬將血清中免疫球蛋白=IgA+IgG+IgM，同時(shí)用雙縮脲法檢測(cè)血清總蛋白（TP）。

1.3.2 瓊脂糖電泳法 ?用其專用的電泳梳，每標(biāo)本加樣10ul置全自動(dòng)電泳儀上自動(dòng)完成瓊脂糖電泳，烘干，氨基黑染色，脫色，再烘干。然后應(yīng)用專用掃描儀對(duì)電泳后的蛋白各組分掃描并算出ALB、α1、α2、β、γ球蛋白的百分比，將β區(qū)或γ區(qū)出現(xiàn)的集中濃染帶判讀為M蛋白陽性，根據(jù)其峰面積占總峰面積的比例計(jì)算百分比，再根據(jù)血清總蛋白濃度計(jì)算γ區(qū)球蛋白和M蛋白濃度。

1.3.3 結(jié)果差異計(jì)算 比濁法與瓊脂糖電泳法檢測(cè)血清免疫球蛋白的結(jié)果相對(duì)偏差=（化學(xué)法結(jié)果-電泳法結(jié)果）/電泳法結(jié)果×100%

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0和Excel 2007軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用中位數(shù)（M）[四分位數(shù)（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 ?結(jié)果

2.1 當(dāng)血清標(biāo)本無M蛋白或M蛋白含量較低時(shí)，免疫透射比濁法與電泳法檢測(cè)免疫球蛋白結(jié)果相關(guān)性良好，見圖1：

2.2 當(dāng)M蛋白含量>29.3%時(shí)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異顯著。見表1

3 討論

隨著老齡化人口的增加，單克隆丙種球蛋白異常的發(fā)生率也明顯上升 。單克隆免疫球蛋白是一種過度合成的單一類型或亞型的異常免疫球蛋白，它的準(zhǔn)確檢測(cè)有助于臨床疾病的診斷和在診療過程中的療效觀察，尤其是惡性單克隆丙種球蛋白血癥和免疫缺陷綜合征[1]。目前，免疫球蛋白的定量檢測(cè)主要有免疫透射比濁法和瓊脂糖電泳法。根據(jù)Ig的組成，IgD、IgE含量微小，通常檢測(cè)IgG、IgA、IgM這三類Ig就可以代表血清免疫球蛋白水平。而血清蛋白電泳的γ區(qū)也主要由IgG、IgA、IgM三種免疫球蛋白組成。

本實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)血清標(biāo)本無M蛋白或M蛋白含量較低時(shí)，免疫透射比濁法與電泳法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果相關(guān)系數(shù)r2=0.901，r=0.9386，回歸方程Y=1.0745x-0.7245，經(jīng)Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，P=0.374，>0.05差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而當(dāng)M蛋白濃度升高到一定程度后，兩種方法檢測(cè)免疫球蛋白的結(jié)果差異顯著（P<0.05）且相對(duì)偏差遠(yuǎn)大于免疫球蛋白檢測(cè)的允許TEa（IgG、IgA和IgM的TEa分別為11.98%、13.5%和16.8%[3]）。分析原因可能為：（1）單克隆免疫球蛋白是一種過度增殖的異常免疫球蛋白，其可能與各自的多克隆起源的多克隆免疫球蛋白在氨基酸組成和數(shù)量上有所不同，而這可能會(huì)影響其與抗體的結(jié)合，從而影響定量的準(zhǔn)確性;（2）相關(guān)學(xué)者[2]的研究表明在免疫透射比濁法中，異常增殖的IgG型，IgA型，IgM型M蛋白對(duì)其余2種免疫球蛋白的檢查均會(huì)產(chǎn)生干擾，且以正干擾為主，并有M蛋白濃度依賴性，即M蛋白濃度越高，干擾越大;（3）本研究用到的羅氏公司試劑采用的是預(yù)稀釋方法，即先對(duì)樣本進(jìn)行一定倍數(shù)稀釋后再加入試劑進(jìn)行反應(yīng)，如出現(xiàn)超過檢測(cè)線性范圍的還可以繼續(xù)再運(yùn)行固定倍數(shù)的稀釋，該法雖可避免因抗原過量導(dǎo)致的“鉤狀效應(yīng)”發(fā)生，獲得更寬的檢測(cè)范圍，但同時(shí)也可能因?yàn)闃?biāo)本稀釋破壞了抗原抗體反應(yīng)的基質(zhì)條件而引入了未知的誤差。而血清蛋白電泳是根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子量和分子形狀不同而在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度不一樣將蛋白質(zhì)區(qū)分開，且單克隆的免疫球蛋白也多是出現(xiàn)在γ區(qū)，所以電泳法在方法學(xué)上幾乎不受M蛋白的干擾。

總之，免疫透射比濁法在檢測(cè)單克隆病血清免疫球蛋白時(shí)易受M蛋白的干擾，當(dāng)M蛋白大量出現(xiàn)時(shí)可能導(dǎo)致不能獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果，但臨床實(shí)驗(yàn)室如果采用固定的標(biāo)本處理方式固定誤差，同時(shí)，必要時(shí)向臨床醫(yī)生解釋方法學(xué)的缺陷所引起的實(shí)驗(yàn)誤差，實(shí)際結(jié)果不會(huì)影響臨床醫(yī)生對(duì)病情趨勢(shì)的判斷，且化學(xué)法快速、方便、經(jīng)濟(jì)，更易開展。瓊脂糖電泳法雖受M蛋白干擾較小，但需要特殊儀器，且耗費(fèi)時(shí)間長，不利于基層醫(yī)院開展。因此建議建議臨床采用同一種方法進(jìn)行病情監(jiān)測(cè)。

參考文獻(xiàn)

[1]張?jiān)娫?，王薇，趙海建，等.我國特殊蛋白質(zhì)檢驗(yàn)指標(biāo)允許總誤差和允許不精密度的初步研究[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2016，34（7）：602-607.

[2]韓建華，程歆琦，吳潔，等. M蛋白對(duì)免疫透射比濁法和免疫散射比濁法檢測(cè)免疫球蛋白的干擾[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2019，34（3 ）：197-201