陳薛靜，秦文杰，薛慧清，楊曉寧

經(jīng)典名方沙參麥冬湯特征圖譜及含量測定研究

陳薛靜1，2，秦文杰2，薛慧清1，楊曉寧2

1.山西中醫(yī)藥大學，山西 晉中 030619；2.北京振東光明藥物研究院，北京 100085

按古籍方法制備沙參麥冬湯物質(zhì)基準，建立特征圖譜及指標成分檢測方法，完善其質(zhì)量控制體系。采用HPLC建立15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準的特征圖譜，使用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012A版）計算相似度，按2015年版《中華人民共和國藥典》“甘草”項下方法測定15批物質(zhì)基準中甘草苷的含量和轉(zhuǎn)移率。以甘草苷為參照峰，沙參麥冬湯特征圖譜共標定20個共有峰，指認出2個共有峰，15批物質(zhì)基準相似度均大于0.9。15批物質(zhì)基準甘草苷含量為0.053%～0.478%，轉(zhuǎn)移率為38.92%～60.98%。本研究建立的方法所得數(shù)據(jù)真實可靠，可為沙參麥冬湯物質(zhì)基準的質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)。

經(jīng)典名方；沙參麥冬湯；物質(zhì)基準；特征圖譜；含量測定

沙參麥冬湯始載于清代吳鞠通《溫病條辨》，由北沙參、麥冬、玉竹、天花粉、甘草、桑葉、白扁豆組成。沙參麥冬湯臨床治療呼吸系統(tǒng)疾病具有良好效果，可下調(diào)血清缺氧誘導因子-1α、誘導型一氧化氮合酶、血管生成素-2水平，用于治療干咳、急性感染性疾病恢復期和腫瘤放化療損傷等[1-4]。

沙參麥冬湯臨床應(yīng)用廣泛，收錄于國家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》[5]，其物質(zhì)基準的開發(fā)研究應(yīng)按照原處方及制法要求展開，并保證藥材-飲片-物質(zhì)基準的一致性，主要解決提取工藝和質(zhì)量表征兩方面的問題[6]，以期為其制劑的開發(fā)提供標準[7]。沙參麥冬湯方中藥味較多，且成分多為糖類、蛋白質(zhì)、黃酮類和皂苷類，本研究前期對方中各單味藥水煎液進行DAD全波長掃描結(jié)果顯示，君藥（北沙參、麥冬）、臣藥（玉竹、天花粉）、佐藥（白扁豆）中成分在測定條件下響應(yīng)值小，多數(shù)成分為末端吸收，且不同成分有不同的最大吸收波長，很難保證在同一波長條件下檢測所有成分。因此，結(jié)合方義及臨床療效，選擇煎煮后溶出率較高且檢測結(jié)果穩(wěn)定的甘草苷、甘草酸銨作為指標成分[8]，并采用波長切換法，以免影響色譜峰響應(yīng)值及檢測結(jié)果[9]。本研究建立沙參麥冬湯物質(zhì)基準特征圖譜，通過分析制備過程的量值傳遞關(guān)系，評價沙參麥冬湯物質(zhì)基準制備工藝的合理性、可行性和質(zhì)量檢測方法的科學性。

1 儀器與試藥

YD-A80型電砂鍋，潮州市湘橋區(qū)雅德陶瓷五金電器廠；B-290型噴霧干燥機，瑞士BUCHI公司；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗機，昆山市超聲儀器有限公司；Agilent 1260高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；YP1002N型電子天平（d＝0.01 g）、ME204/02型電子天平（d＝0.1 mg）、XSE205DU型電子天平（d＝0.01 mg），瑞士METTLER TOLEDO公司；Milli-Q型超純水儀，美國MILLIPORE公司。

甘草苷對照品（批號111610-20160）、甘草酸銨對照品（批號111731-21720），中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇為色譜純（默克公司）；磷酸為分析純（北京化工廠）。15批沙參麥冬湯藥物飲片來源見表1，經(jīng)中國食品藥品檢定研究院張繼主任藥師鑒定，均符合2015年版《中華人民共和國藥典》標準。

表1 15批沙參麥冬湯組方藥物飲片來源信息

編號北沙參 麥冬 玉竹 天花粉 桑葉 白扁豆 甘草 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 批號產(chǎn)地 S1YP1702內(nèi)蒙古 YC1207四川 YP2201湖南 YP2401四川 YC1203廣西 YC1603云南 YP1407內(nèi)蒙古 S2YP1701內(nèi)蒙古 YC0901山東 YP2606浙江 YP2410河北 YC1002江蘇 YC0306四川 YP1302新疆 S3YP1001山東 YC1201四川 YP2202湖南 YP2406河北 YC1205廣西 YC1605云南 YP0503甘肅 S4YP2012內(nèi)蒙古 YC0902山東 YP2602遼寧 YP2901山西 YC0601云南 YC1604云南 YP0502甘肅 S5YP2008河北 YC1206四川 YP2601遼寧 YP2403四川 YC0602云南 YC1601云南 YP1406內(nèi)蒙古 S6YP2007河北 YC0904山東 YP2609浙江 YP2409河北 YC3001安徽 YC1602云南 YP1502內(nèi)蒙古 S7YP2006河北 YC1205四川 YP2002湖南 YP2407河北 YC0605浙江 YC0309四川 YP1405新疆 S8YP1002山東 YC1202四川 YP1901湖南 YP2802山西 YC1005江蘇 YC0307四川 YP1304新疆 S9YP1705內(nèi)蒙古 YC1208四川 YP2605遼寧 YP2701山西 YC1006江蘇 YC0308四川 YP1301新疆 S10YP2010河北 YC1404湖北 YP2607浙江 YP2801山西 YC0603云南 YC0103云南 YP0501甘肅 S11YP1101山東 YC0905山東 YP1902湖南 YP2408河北 YC1006江蘇 YC0310四川 YP1401新疆 S12YP1201山東 YC1203四川 YP2001湖南 YP2402四川 YC0606云南 YC0603云南 YP1404新疆 S13YP2011河北 YC1401湖北 YP2603遼寧 YP2405河北 YC0604云南 YC0605云南 YP1403新疆 S14YP1704內(nèi)蒙古 YC1204四川 YP2608浙江 YP2702山西 YC1201廣西 YC0602云南 YP1303新疆 S15YP1102山東 YC0903山東 YP2610浙江 YP2902山西 YC1004江蘇 YC1601云南 YP1402新疆

2 方法與結(jié)果

2.1 物質(zhì)基準制備

按照《古代經(jīng)典名方中藥復方制劑簡化注冊審批管理規(guī)定》[10]要求制備沙參麥冬湯物質(zhì)基準。按古方劑量折合現(xiàn)代劑量1錢＝3.75 g，稱取北沙參11.25 g、麥冬11.25 g、甘草3.75 g、玉竹7.50 g、桑葉5.63 g、天花粉5.63 g、白扁豆5.63 g，以1杯水300 mL計，加水5杯，浸泡30 min，煮至2杯，趁熱過濾（100目），濾液精密吸取50 mL，測定出膏率，剩余濾液濃縮至100～200 mL，噴霧干燥，收集干燥粉末，即得。

2.2 特征圖譜建立

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～30 min，3%～18%A；30～50 min，18%～30%A；50～60 min，30%～62%A；60～70 min，62～95%A）；檢測波長：0～52 min，314 nm；52～59 min，252 nm；59～65 min，314 nm；流速：1.2 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液制備

2.2.2.1 對照品溶液

精密稱取甘草苷、甘草酸銨對照品適量，分別加50%甲醇制成每1 mL含甘草苷40.14 μg、甘草酸銨37.85 μg的溶液，搖勻，即得。

2.2.2.2 供試品溶液

精密稱取沙參麥冬湯物質(zhì)基準（編號S1）約2 g，置具塞錐形瓶中，精密加50%甲醇溶液25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇溶液補足減失的質(zhì)量，用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2.3 單味藥溶液

取北沙參、麥冬、玉竹、天花粉、桑葉、白扁豆和甘草各50 g，按“2.1”項下方法制備單味藥物質(zhì)基準，并按“2.2.2.2”項下方法制備，即得。

2.2.3 精密度試驗

取“2.2.2.2”項下供試品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，以甘草苷為參照峰，各主要共有色譜峰的相對保留時間RSD＜1.0%，相對峰面積RSD＜5.0%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2.2”項下供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h測定，記錄色譜圖，以甘草苷為參照峰，各主要共有色譜峰的相對保留時間RSD＜1.0%，相對峰面積RSD＜5.0%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5 重復性試驗

取沙參麥冬湯物質(zhì)基準（編號S1），制備供試品溶液6份，連續(xù)進樣，以甘草苷為參照峰，各主要共有色譜峰的相對保留時間RSD＜1.0%，相對峰面積RSD＜5.0%，結(jié)果表明該方法重復性良好。

2.3 部分共有色譜峰歸屬及相似度評價

將“2.2.2.2”“2.2.2.3”項下溶液分別注入高效液相色譜儀進行檢測，記錄色譜圖，歸屬各色譜峰。結(jié)果表明，供試品溶液中2、4、19、20號峰為桑葉特征峰，8、9、13、14、16、17號峰為甘草特征峰，1號峰為除白扁豆外其他藥物的共有峰，3號峰為除天花粉、甘草外其他藥物的共有峰，5號峰為所有藥物的共有峰，6號峰為白扁豆、甘草的共有峰，7號峰為除北沙參、天花粉外其他藥物的共有峰，10、11、12號峰為玉竹、甘草的共有峰，15號峰為北沙參、甘草的共有峰，18號峰為桑葉、甘草的共有峰，見圖1。

按“最優(yōu)最差，剩余隨機組合”方法組合方中各批次飲片（見表1），按“2.1”項下方法制備15批物質(zhì)基準，并按“2.2.1”項下色譜條件檢測。將15批特征圖譜導入國家藥典委員會《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2012A版），采用中位數(shù)法生成對照圖譜，以峰面積較大、出峰時間相對穩(wěn)定的8號峰甘草苷為參照峰，最終標定20個共有峰，指認甘草苷、甘草酸銨色譜峰，結(jié)果見圖2。同時，計算15批物質(zhì)基準相似度，結(jié)果均在0.9以上（見表2），說明15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準整體質(zhì)量較為接近，符合要求。

注：8.甘草苷；17.甘草酸銨

注：8.甘草苷；17.甘草酸銨

表2 15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準相似度評價結(jié)果（r）

編號S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S13S14S15對照 S11.0000.9310.9910.9880.9880.9350.9290.9350.9660.9560.8600.8760.8620.9050.8640.980 S20.9311.0000.9500.9560.9670.9660.9840.9870.9670.9630.9800.9830.9710.9900.9690.982 S30.9910.9501.0000.9980.9890.9560.9560.9440.9620.9460.8910.9010.8820.9220.8860.987 S40.9880.9560.9981.0000.9910.9640.9610.9470.9610.9490.9030.9100.8990.9280.8920.990 S50.9880.9670.9890.9911.0000.9660.9670.9710.9820.9770.9120.9340.9180.9530.9260.997 S60.9350.9660.9560.9640.9661.0000.9800.9480.9290.9230.9480.9510.9310.9460.9330.973 S70.9290.9840.9560.9610.9670.9801.0000.9780.9520.9470.9640.9770.9540.9760.9630.980 S80.9350.9870.9440.9470.9710.9480.9781.0000.9810.9800.9560.9810.9610.9910.9750.981 S90.9660.9670.9620.9610.9820.9290.9520.9811.0000.9920.9090.9400.9300.9620.9330.984 S100.9560.9630.9460.9490.9770.9230.9470.9800.9921.0000.9100.9460.9400.9660.9410.978 S110.8600.9800.8910.9030.9120.9480.9640.9560.9090.9101.0000.9820.9730.9680.9540.938 S120.8760.9830.9010.9100.9340.9510.9770.9810.9400.9460.9821.0000.9830.9900.9860.953 S130.8620.9710.8820.8990.9180.9310.9540.9610.9300.9400.9730.9831.0000.9730.9580.939 S140.9050.9900.9220.9280.9530.9460.9760.9910.9620.9660.9680.9900.9731.0000.9910.967 S150.8640.9690.8860.8920.9260.9330.9630.9750.9330.9410.9540.9860.9580.9911.0000.940 對照0.9800.9820.9870.9900.9970.9730.9800.9810.9840.9780.9380.9530.9390.9670.9401.000

2.4 甘草苷含量及轉(zhuǎn)移率測定

按2015年版《中華人民共和國藥典》“甘草”項下甘草苷測定方法[11]，測定15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準中甘草苷的含量，并計算其轉(zhuǎn)移率。轉(zhuǎn)移率（%）＝物質(zhì)基準中甘草苷含量×物質(zhì)基準的量÷（甘草飲片中甘草苷含量×甘草飲片用量）×100%。結(jié)果15批物質(zhì)基準的甘草苷含量為0.053%～0.478%，轉(zhuǎn)移率為38.92%～60.98%，平均轉(zhuǎn)移率為50.02%，見表3。

表3 15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準中甘草苷含量及轉(zhuǎn)移率測定結(jié)果

編號甘草飲片/g物質(zhì)基準/g出膏率/%甘草苷含量/%轉(zhuǎn)移率/%平均轉(zhuǎn)移率/% 飲片物質(zhì)基準 S130130.6434.643.870.45551.15 50.02 S230112.8033.360.450.06050.23 S330125.1038.273.240.41052.73 S430111.8633.902.950.35544.84 S530103.6227.792.330.37154.98 S630114.2934.731.330.18452.83 S730119.5033.010.620.07849.90 S830125.6432.470.660.07849.72 S930126.4138.230.640.09360.98 S1030 95.0030.333.070.47849.28 S1130116.1931.300.630.06841.55 S1230116.2332.200.760.08241.90 S1330103.2038.230.720.11555.13 S1430127.4034.630.580.05338.92 S1530123.3034.310.480.06656.18

3 討論

沙參麥冬湯由7味藥組成，其化學成分復雜。吳茵等[12]利用超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法對沙參麥冬湯加水回流樣品中9種代表成分進行含量測定，結(jié)果甘草苷、甘草酸銨含量均大于10 μg/mL，其余7種成分含量均小于1 μg/mL。本研究按照古籍方法制備沙參麥冬湯物質(zhì)基準，采用HPLC波長切換法對其特征圖譜進行研究，并對共有峰進行初步歸屬。通過對比文獻及含量測定結(jié)果，最終選定峰型較好、響應(yīng)值較高且較穩(wěn)定的甘草苷作為參照峰。甘草苷具有豐富的藥理學作用，可用于治療咳嗽、心律失常、胃潰瘍、腫瘤等，故將其作為質(zhì)量控制的指標性成分[13-15]。由于該方中的7味藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究比較薄弱，可控的指標成分少且含量較低，后期需要結(jié)合新技術(shù)開展深入研究。

經(jīng)典名方的開發(fā)要求把握藥材-飲片-物質(zhì)基準的一致性，這就需要整體把握藥材來源、炮制、提取濃縮干燥工藝、質(zhì)量控制及最終的物質(zhì)基準[16-17]。本研究15批沙參麥冬湯物質(zhì)基準的特征圖譜中，共性與差異并存：主要色譜峰的整體面貌一致，相似度較高，但部分色譜峰的峰面積差異較大，說明產(chǎn)地、采收時間、批次不同的飲片對物質(zhì)基準特征圖譜中色譜峰的響應(yīng)值有一定影響，也可能為飲片組合方式及配伍所致，有待進一步考察[18]。在經(jīng)典名方的開發(fā)利用中，應(yīng)盡量保證原料藥材的一致性，并采用多種分析手段加強經(jīng)典名方制備工藝及質(zhì)量標準研究，以保證質(zhì)量的可控性與穩(wěn)定性。

本研究通過單因素考察確定最佳提取、濃縮、干燥工藝，實現(xiàn)了古今制備工藝的轉(zhuǎn)化[19]；初步建立了沙參麥冬湯物質(zhì)基準的特征圖譜，方法學考察結(jié)果表明，重復性、穩(wěn)定性良好；并初步對特征圖譜色譜峰進行了歸屬，15批物質(zhì)基準具有較高的相似性。今后研究擬建立更多指標成分，從而更全面地反映沙參麥冬湯的整體特征。

[1] 張向群,郭旸.沙參麥冬湯臨床應(yīng)用規(guī)律探討[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥, 2008,27(3)：70-72.

[2] 武曉群,馬健,易兵,等.沙參麥冬湯臨床及實驗研究進展[J].江蘇中醫(yī)藥,2012,44(3)：75-76.

[3] 孫源.沙參麥冬湯臨床功效研究進展[J].現(xiàn)代醫(yī)學與健康研究,2019, 3(11)：7-11.

[4] 黃秀萍,張榮坤,余平安.沙參麥冬湯合五味消毒飲對Ⅲ期肺癌化療減毒增效的臨床研究[J].中華中醫(yī)藥學刊,2019,37(12)：3053-3056.

[5] 首批古代經(jīng)典名方目錄發(fā)布[J].江蘇中醫(yī)藥,2018,50(7)：1-10.

[6] 鄧哲,劉德文,杜杰,等.經(jīng)典名方研發(fā)建議的梳理和探討[J].中國實驗方劑學雜志,2019,25(17)：181-186.

[7] 唐曉章,林美斯,周菲,等.經(jīng)典名方芍藥甘草湯的物質(zhì)基準量值傳遞分析[J].中國實驗方劑學雜志,2019,25(14)：62-69.

[8] 羅菊元,陳功森,劉冬涵,等.以厚樸溫中湯為例探討煮散類經(jīng)典名方物質(zhì)基準制備工藝研究[J].中國中藥雜志,2019,44(18)：3994-3999.

[9] 成燕芬,王升菊,吳億晗,等.HPLC-DAD波長切換法同時測定身痛逐瘀湯物質(zhì)基準中8種有效成分含量[J].中國實驗方劑學雜志,2020,26(4)：16-22.

[10] 國家藥品監(jiān)督管理局.關(guān)于發(fā)布古代經(jīng)典名方中藥復方制劑簡化注冊審批管理規(guī)定的公告[EB/OL].(2018-05-29)[2018-07-10].http:// www.nmpa.gov.cn/WS04/CL2093/228247.html.

[11] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015：86.

[12] 吳茵,王蕊,任炳南,等.UPLC-MS/MS法同時測定沙參麥冬湯中9種成分的含量[J].中國藥房,2016,27(9)：1240-1241.

[13] 趙準,季玉林,吳建明,等.高效液相色譜法測定逍遙分散片中甘草苷的含量[J].中國藥業(yè),2019,28(3)：31-33.

[14] 蘇國林,劉剛,劉育辰,等.甘草苷的提取純化方法和藥理作用研究進展[J].中國現(xiàn)代中藥,2011,13(10)：48-51.

[15] 費文靜,錢勇.超高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地甘草中甘草苷和甘草酸的含量[J].食品安全質(zhì)量檢測學報,2019,10(2)：339-343.

[16] 樊啟猛,賀鵬,李海英,等.經(jīng)典名方物質(zhì)基準研制的關(guān)鍵技術(shù)分析[J].中國實驗方劑學雜志,2019,25(15)：202-209.

[17] 劉艷,章軍,楊林勇,等.經(jīng)典名方物質(zhì)基準研制策略及關(guān)鍵問題分析[J].中國實驗方劑學雜志,2020,26(1)：1-9.

[18] 代云桃,靳如娜,吳治麗,等.基于標準湯劑(物質(zhì)基準)的經(jīng)典名方制備工藝和質(zhì)量標準研究[J].中國實驗方劑學雜志,2020,26(2)：164- 174.

[19] 高喜梅,賈萌,趙曉莉,等.經(jīng)典名方傳統(tǒng)制法向現(xiàn)代生產(chǎn)工藝轉(zhuǎn)化關(guān)鍵問題探索[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2019,35(5)：601-605.

Study on Characteristic Spectrum and Determination of Classic PrescriptionDecoction

CHEN Xuejing1,2, QIN Wenjie2, XUE Huiqing1, YANG Xiaoning2

To establish a method of characteristic spectrum and indicator component detection methods; To improve the qualitative control system according to the methods of preparation ofDecoction in ancient books.The method of characteristic spectrum of 15 batches material benchmark ofDecoction was determined by using HPLC. Similarity was calculated byGlycyrrhizin contents and transfer rates in 15 batches of material benchmark were determined according to the method of “Glycyrrhizae Radix et Rhizoma” in the.Setting glycyrrhizin as the reference peak, 20 common peaks were finally identified in the characteristic spectrum ofDecoction, and 2 common peaks were identified. The similarities of 15 batches of material benchmarks were higer than 0.9. The contents of glycyrrhizin in 15 branches were 0.053%?0.478%, and the transfer rates were 38.92%?60.98%.The data obtained by the method established in this study are true and reliable, which can lay the foundation for the qualitative control of the material benchmark ofDecoction.

classic prescription;Decoction; material benchmark; characteristic spectrum; content determination

R284.1

A

1005-5304(2020)09-0087-05

10.3969/j.issn.1005-5304.202002189

國家科技重大專項－重大新藥創(chuàng)制（2015ZX09101043-008）；全國中藥特色技術(shù)傳承人才培訓項目（T20184828005）

秦文杰，E-mail：qinwenjie@zdjt.com

（2020-02-13）

（2020-02-23；編輯：陳靜）