郭蕊，戴同欣，錢宏波

西安市第八醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 西安 710061

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染會(huì)導(dǎo)致人體免疫系統(tǒng)受損，免疫功能異常，進(jìn)而使患者極易出現(xiàn)各種機(jī)會(huì)性感染的臨床綜合征，這種獲得性免疫缺陷綜合征被稱為艾滋病(AIDS)，從HIV 感染發(fā)展到AIDS，過程時(shí)間長(zhǎng)，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，且具有較長(zhǎng)的潛伏期、傳染性強(qiáng)，具有較高的病死率[1-2]。目前HIV感染的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，一般認(rèn)為HIV感染機(jī)體后，直接或間接的導(dǎo)致CD4+T數(shù)量減少，損害細(xì)胞免疫功能；也有臨床指出HIV 感染是導(dǎo)致CD8+T 細(xì)胞喪失抗病毒的活性或誘發(fā)機(jī)體自身免疫系統(tǒng)疾病，從而導(dǎo)致各種機(jī)會(huì)性感染或腫瘤風(fēng)險(xiǎn)上升[3-4]。臨床中檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群，用以反映機(jī)體免疫功能狀況，因此對(duì)T 淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)有助于觀察HIV感染患者機(jī)體免疫狀況，為防治和預(yù)后判斷等提供理論參考依據(jù)[5]。本研究旨在進(jìn)一步探究HIV感染者血清T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平的變化及其臨床意義，為患者的臨床診斷提供指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年1 月至2019 年5月期間西安市第八醫(yī)院收治的60 例HIV 感染患者作為研究對(duì)象(觀察組)，其中男性33 例，女性27 例；年齡17～75 歲，平均(42.28±12.46)歲；≤50 歲43 例，＞50 歲17 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均確認(rèn)HIV 抗體為陽性，診斷符合《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》(WS293-2019)；②能夠配合診療及隨訪，依從性較好者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有抗HIV 藥物治療史者；②既往有合并腫瘤者；③近期(1 個(gè)月內(nèi))接受過增強(qiáng)免疫相關(guān)治療者；④不能完成相關(guān)檢測(cè)者。選取同期健康者60 例作為對(duì)照組，其中男性35 例，女性25 例；年齡18～78 歲，平均(43.36±12.37)歲。兩組受檢者的性別和年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬同意。

1.2 檢測(cè)方法 取所有受檢者外周靜脈血1～2 mL，于乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-K2)抗凝管中，24 h 內(nèi)染色處理，使用CD45Per-cp CD3-FITC CD4-APC CD8-PE CD1656-PE (雙管中的第二管)和TruCOUNT管(美國(guó)BD公司)，在TruCOUNT管中加入20 μL T淋巴細(xì)胞亞群試劑和50 μL抗凝全血，混勻室溫暗置15 min，加入10 倍稀釋FACS 溶血素450 μL，室溫暗處?kù)o置反應(yīng)15 min，1 h內(nèi)采用美國(guó)生產(chǎn)的BD FACSCanto Ⅱ流式細(xì)胞儀，雙激光6 色，分析T 淋巴細(xì)胞亞群包括CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)以及CD4+、CD8+占細(xì)胞百分比，計(jì)算CD4+/CD8+比值，實(shí)驗(yàn)操作過程嚴(yán)格遵守儀器相關(guān)說明書。輔助性T細(xì)胞T4=CD3+CD4+，細(xì)胞毒性T細(xì)胞T8=CD3+CD8+。

1.3 觀察指標(biāo) ①兩組受檢者外周血T4、T8細(xì)胞計(jì)數(shù)情況；②兩組受試者T 淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)情況；③HIV 感染者不同年齡、性別的T 淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS24.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組受檢者外周血T4、T8細(xì)胞計(jì)數(shù)比較 觀察組患者T4、T8細(xì)胞計(jì)數(shù)及T4/T8比值與對(duì)照組比較差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 兩組受檢者外周血T4、T8細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(±s，/mm3)

表1 兩組受檢者外周血T4、T8細(xì)胞計(jì)數(shù)比較(±s，/mm3)

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)60 60 T4(CD3+CD4+)382±110 849±250 10.643 0.000 1 T8(CD3+CD8+)1031±301 579±150 9.367 0.000 1 T4/T8 0.42±0.01 1.54±0.35 13.256 0.000 1

2.2 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+%、CD4+/CD8+明顯低于對(duì)照組，CD8+、CD8+%明顯高于對(duì)照組，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表2。

2.3 不同年齡、性別患者的T 淋巴細(xì)胞亞群水平比較 不同性別患者的CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平相比，男性患者CD4+、CD4+/CD8+水平低于女性患者，CD8+高于女性患者，差異均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；50 歲以下與50 歲以上的患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表2 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s，個(gè)/μL)

表2 兩組受檢者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s，個(gè)/μL)

組別觀察組對(duì)照組t值P值例數(shù)60 60 CD3+1 065.21±315.98 1 844.34±364.07 12.519 0.000 1 CD4+492.95±145.17 1 104.17±152.21 22.508 0.000 1 CD8+995.32±169.98 583.34±169.11 13.309 0.000 1 CD4+%27.15±7.17 36.87±8.41 6.812 0.000 1 CD8+%63.87±7.78 33.34±8.31 20.774 0.000 1 CD4+/CD8+0.38±0.02 1.67±0.14 70.656 0.000 1

表3 不同年齡、性別患者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s)

表3 不同年齡、性別患者的T淋巴細(xì)胞亞群水平比較(±s)

指標(biāo)性別男性女性t值P值年齡(歲)≤50＞50 t值P值例數(shù)33 27 43 17 CD4+14.34±4.17 19.17±5.22 5.599 0.000 1 14.95±4.06 14.24±3.81 0.987 0.325 CD8+80.32±17.28 70.34±10.76 23.268 0.000 1 76.32±10.24 77.34±9.48 0.566 0.572 CD4+/CD8+0.28±0.01 0.37±0.04 16.908 0.000 1 0.29±0.03 0.29±0.01 0.000 1.000

3 討論

HIV 作為一種多嗜性病毒，能夠侵入機(jī)體感染多種細(xì)胞，其中人體免疫系統(tǒng)中T 淋巴細(xì)胞反應(yīng)最為敏感[6]。T 淋巴細(xì)胞表面的CD4 分子是HIV 的主要受體，當(dāng)HIV 感染細(xì)胞時(shí)，直接或間接地導(dǎo)致CD4+T 淋巴細(xì)胞核其他T淋巴細(xì)胞的損傷、死亡，導(dǎo)致病情最終發(fā)展為AIDS[7-8]。因此在HIV 疾病發(fā)展過程中，機(jī)體表現(xiàn)的主要特征是CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量驟減、病毒增加，由此，臨床可通過檢測(cè)人體免疫系統(tǒng)中的T淋巴細(xì)胞數(shù)量及百分比，從而可直觀地反應(yīng)出患者HIV感染程度及免疫系統(tǒng)損傷情況[9-10]。

另外，HIV 患者的NK 細(xì)胞與T 淋巴細(xì)胞亞群聯(lián)系緊密，這是由于NK 細(xì)胞是人體天然免疫系統(tǒng)的主要組成部分，能夠在不需要預(yù)先致敏作用下對(duì)人體發(fā)揮免疫作用，因此，NK細(xì)胞可在人體獲得性免疫系統(tǒng)應(yīng)答之前，對(duì)機(jī)體起保護(hù)作用[11-12]。同時(shí)NK細(xì)胞也能夠通過分泌各細(xì)胞因子，誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)獲得性免疫功能。因此，通過檢測(cè)和分析HIV患者T淋巴細(xì)胞，判斷NK細(xì)胞情況，進(jìn)而確定患者感染狀況，從而診斷其是否進(jìn)入發(fā)病期，對(duì)臨床預(yù)防和早期抗HIV治療具有重要意義[13]。

本研究結(jié)果顯示，HIV 感染患者的CD3+、CD4+、CD4+%計(jì)數(shù)顯著低于正常健康者，CD8+、CD8+%計(jì)數(shù)高于健康者，因此，CD4+/CD8+比值也顯著較低。這可能在于總T 淋巴細(xì)胞即CD3+絕對(duì)數(shù)計(jì)數(shù)正常情況下在690～2 540 個(gè)/μL，當(dāng)機(jī)體受到病毒感染或其他原因?qū)е旅庖呦到y(tǒng)損傷或造血系統(tǒng)異常時(shí)，T 淋巴細(xì)胞表達(dá)異常[14]。本研究中觀察組患者T 淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+明顯較低，CD8+陽性細(xì)胞表達(dá)不顯著，臨床中輔助T 淋巴細(xì)胞是CD3+CD4+，而抑制性T 淋巴細(xì)胞是CD3+CD8+細(xì)胞，提示觀察組患者受病毒感染使輔助T淋巴細(xì)胞降低，抑制性T淋巴細(xì)胞功能異常，機(jī)體免疫系統(tǒng)損傷。

根據(jù)HIV 感染時(shí)機(jī)體CD4+＜200 個(gè)/μL 或≤14%時(shí)，可判定患者進(jìn)入AIDS 發(fā)病期。這主要在于CD4+是免疫系統(tǒng)的中樞細(xì)胞，是效應(yīng)細(xì)胞，可以通過分泌腫瘤壞死因子、干擾素等細(xì)胞因子，從而對(duì)病毒起抑制作用[15]。本研究結(jié)果顯示HIV 患者的CD4+顯著低于健康者，這是由于CD4+T淋巴細(xì)胞作為HIV的直接攻擊對(duì)象，其數(shù)量減少可直接反應(yīng)人體免疫系統(tǒng)受損。這提示當(dāng)機(jī)體感染HIV時(shí)，各細(xì)胞因子誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生抗HIV抗體，促進(jìn)活化巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞，從而使機(jī)體CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著降低[16]。

本研究結(jié)果顯示HIV感染者CD8+、CD8+%計(jì)數(shù)高于健康者，與臨床相關(guān)研究資料[17-18]結(jié)果相一致，由于CD8+是T淋巴細(xì)胞中抗HIV的主要免疫細(xì)胞，在HIV感染機(jī)體后，CD8+T淋巴細(xì)胞發(fā)揮抗HIV作用，其數(shù)量隨著病毒增加而增加。因此CD4+/CD8+比值常在臨床中作為反映細(xì)胞免疫系統(tǒng)的敏感性指標(biāo)，當(dāng)比值下降時(shí)，可以作為判斷HIV病情嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)之一。

本研究比較不同年齡、性別的HIV 感染患者的T淋巴細(xì)胞亞群情況發(fā)現(xiàn)，50歲以下與50歲以上的患者其CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。男女之間CD4+、CD8+、CD4+/CD8+相比，男性患者的CD4+、CD4+/CD8+小于女性患者，CD8+大于女性患者，其原因有待進(jìn)一步調(diào)查研究。

綜上所述，HIV 感染改變機(jī)體T 淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)情況，通過對(duì)外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)可以進(jìn)一步了解HIV 感染者的免疫功能受損和病情進(jìn)展情況，從而更好地把握病程分期，為預(yù)防和早期治療提供理論依據(jù)。