郭輝，程廣坤，張曉雪，季潔如

上海健康醫(yī)學(xué)院附屬浦東新區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1、消化內(nèi)科2，上海 201299

胃癌是臨床上常見的惡性腫瘤，具有較高的致死率，近年來(lái)隨著人們生活節(jié)奏的加快和不良飲食習(xí)慣的增加，我國(guó)胃癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，最新報(bào)道顯示，目前我國(guó)胃癌的發(fā)病率位于所有惡性腫瘤的第二位，死亡率位于第三位，且發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)[1]。胃癌的病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)感染被認(rèn)為是胃癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素[2]。相關(guān)研究表明，Hp 可以引起胃黏膜炎癥反應(yīng)和癌前病變，最終發(fā)展為胃癌[3]。白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白細(xì)胞介素-8(interleukin-8，IL-8)和白細(xì)胞介素-32(interleukin-32，IL-32)均是與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的細(xì)胞因子。有報(bào)道顯示，IL-1β廣泛參與機(jī)體組織破壞和慢性炎癥，被認(rèn)為是驅(qū)動(dòng)癌癥炎癥的細(xì)胞因子[4]。IL-8 是趨化因子家族的重要成員，在胃癌的發(fā)生中起到重要作用[5]。而IL-32 主要由胃黏膜組織分泌，在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中扮演重要的角色[6]。本研究通過(guò)探討Hp 感染與胃癌患者血清IL-1β、IL-8、IL-32 的關(guān)系，旨在為胃癌的診斷和早期治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月至2019年10月浦東新區(qū)人民醫(yī)院收治的胃癌患者100 例作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均經(jīng)胃鏡診斷為胃癌；(2)均接受碳14 尿素呼氣試驗(yàn)；(3)無(wú)碳14 尿素呼氣試驗(yàn)禁忌。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他器官惡性腫瘤者；(2)試驗(yàn)前經(jīng)手術(shù)、放療或化療者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病及感染者；(4)妊娠哺乳期女性。根據(jù)是否存在Hp感染將患者分為Hp陽(yáng)性胃癌組66例，Hp陰性胃癌組34例。Hp陽(yáng)性胃癌組中男性40例，女性26例；年齡45～78歲，平均(61.23±7.37)歲。Hp 陰性胃癌組中男性19 例，女性15 例；年齡43～79 歲，平均(60.53±6.41)歲。另選取同期于我院體檢時(shí)行胃鏡檢查的非胃癌者100例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)受檢者均經(jīng)胃鏡檢查無(wú)胃癌及胃炎；(2)受檢者均接受碳14尿素呼氣試驗(yàn)；(3)無(wú)碳14尿素呼氣試驗(yàn)禁忌。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他器官惡性腫瘤者；(2)試驗(yàn)前經(jīng)手術(shù)、放療或化療者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病及感染者；(4)妊娠哺乳期女性。根據(jù)是否存在Hp感染分為Hp陽(yáng)性非胃癌組31例，Hp陰性非胃癌組69 例。Hp 陽(yáng)性非胃癌組中男性17 例，女性14 例；年齡42～78歲，平均(61.88±6.12)歲。Hp陰性非胃癌組中男性42 例，女性27 例；年齡44～79 歲，平均(62.11±7.67)歲。各組受檢者的一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受檢者均對(duì)研究知情同意。

1.2 檢查方法

1.2.1 胃鏡檢查 所有受檢者均在胃鏡下鉗取胃黏膜組織，將所取胃黏膜組織，經(jīng)10%甲醛溶液固定、石蠟包埋制成連續(xù)切片，應(yīng)用Giemsa法進(jìn)行染色，并在1 000 倍顯微鏡下觀察，如切片組織染成紫紅色則為Hp陽(yáng)性。

1.2.2 碳14尿素呼氣試驗(yàn) 所有受檢者空腹?fàn)顟B(tài)下進(jìn)行碳14尿素呼氣試驗(yàn)，用水吞服尿素(碳14)膠囊1粒(廠家：深圳市中核海得威生物科技有限公司；批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20068129；規(guī)格：40粒)，休息15 min后取出呼氣卡，受檢者向呼吸卡吹氣3 min，直至呼吸卡由白色變?yōu)殚冱S色，然后將呼吸卡插入Hp檢測(cè)儀，5 min后打印結(jié)果，若碳14 尿素呼氣試驗(yàn)Hp 感染U 值超過(guò)100 dpm可判定為陽(yáng)性[7]。

1.2.3 血清學(xué)檢查 所有受檢者均采集清晨空腹外周靜脈血5 mL，經(jīng)3 500 r/min 離心10 min，離心半徑12 cm分離血清，保存于-80℃冰箱中待測(cè)。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平，試劑盒購(gòu)自北京萬(wàn)泰德瑞診斷技術(shù)有限公司，嚴(yán)格按照相關(guān)試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判定 結(jié)合組織Giemsa染色和碳14尿素呼氣試驗(yàn)兩項(xiàng)結(jié)果，如兩者均為陽(yáng)性則判定為Hp感染。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS26.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析Hp感染與受檢者血清IL-1β、IL-8、IL-32的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對(duì)照組受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值比較 研究組患者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 研究組和對(duì)照組受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp感染U值比較(±s)

表1 研究組和對(duì)照組受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp感染U值比較(±s)

組別研究組對(duì)照組t值P值例數(shù)100 100 IL-1β(ng/L)136.12±29.45 29.17±8.59 34.863＜0.05 IL-8(ng/L)206.05±38.35 46.74±12.36 39.538＜0.05 IL-32(ng/L)129.39±26.54 58.43±10.75 24.781＜0.05 Hp感染U值228.38±56.86 89.71±28.78 21.759＜0.05

2.2 Hp 陽(yáng)性或陰性受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值比較 Hp 陽(yáng)性胃癌組患者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值明顯高于Hp陰性組、Hp陽(yáng)性非胃癌組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Hp陽(yáng)性非胃癌組受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32水平及Hp感染U值明顯高于Hp陰性非胃癌組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Hp 陰性胃癌組患者的血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平明顯高于Hp 陰性非胃癌組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但Hp 感染U 值比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表2 Hp陽(yáng)性或陰性受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32水平及Hp感染U值比較(±s)

表2 Hp陽(yáng)性或陰性受檢者的血清IL-1β、IL-8、IL-32水平及Hp感染U值比較(±s)

注：與Hp陽(yáng)性非胃癌組比較，aP＜0.05；與Hp陰性非胃癌組比較，bP＜0.05。

組別Hp陽(yáng)性胃癌組Hp陰性胃癌組t值P值Hp陽(yáng)性非胃癌組Hp陰性非胃癌組t值P值IL-1β(ng/L)175.84±26.89a 18.97±4.32b 33.712＜0.05 64.18±14.36 9.21±2.19 31.187＜0.05 IL-8(ng/L)268.28±22.56a 24.65±5.31b 61.949＜0.05 107.79±18.92 12.54±2.55 41.242＜0.05 IL-32(ng/L)158.28±19.81a 35.27±7.27b 34.943＜0.05 124.03±19.42 20.49±3.17 43.280＜0.05例數(shù)66 34 31 69 Hp感染U值285.54±35.27a 50.26±10.61 37.940＜0.05 152.75±23.92 48.38±8.92 31.804＜0.05

2.3 Hp 感染與受檢者血清IL-1β、IL-8、IL-32 的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，Hp陽(yáng)性者血清IL-1β、IL-8、IL-32與Hp感染U值均呈正相關(guān)(P＜0.05)，Hp陰性者血清IL-1β、IL-8、IL-32 與Hp 感染U 值均無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，見表3。

表3 Hp感染與受檢者血清IL-1β、IL-8、IL-32的相關(guān)性分析

3 討論

胃癌發(fā)病早期缺乏特異性臨床表現(xiàn)，大部分患者確診時(shí)已經(jīng)處于中晚期，喪失了手術(shù)根治的最佳時(shí)機(jī)，導(dǎo)致胃癌死亡率居高不下。近年來(lái)，隨著胃鏡檢查技術(shù)的普及，使部分胃癌患者可在早期即確診，在一定程度上提高了胃癌早期診斷率。但由于胃鏡需要在麻醉狀態(tài)下插管，操作有一定難度，且可能引起受檢者恐懼和不適，使部分人不愿意接受胃鏡檢查[8]。研究胃癌早期診斷具有重要的臨床價(jià)值。研究表明，胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多階段的漫長(zhǎng)復(fù)雜過(guò)程，其發(fā)病與遺傳因素、環(huán)境、Hp感染、飲食不規(guī)律、吸煙、酗酒等不良生活習(xí)慣有密切關(guān)系[9-10]，其中Hp 感染被認(rèn)為是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要因素，Hp已被世界衛(wèi)生組織確認(rèn)為Ⅰ類致癌原。研究表明，Hp 可以引起胃黏膜組織萎縮和化生，導(dǎo)致胃黏膜惡性病變[11]。由于Hp 是一種微生物，當(dāng)機(jī)體感染Hp 后可以引起機(jī)體免疫應(yīng)答，因此通過(guò)檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子可以為胃癌診斷提供依據(jù)。

另有研究表明，慢性炎癥在胃癌的發(fā)生及患者預(yù)后有密切關(guān)系[12]。IL-1β是白介素1的亞型，主要由內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞生成[13]。研究表明，IL-1β可以促進(jìn)B淋巴細(xì)胞增殖和分化，進(jìn)而促進(jìn)免疫球蛋白的分泌[14]。IL-1β能夠刺激集落刺激因子、血小板生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，激活T淋巴細(xì)胞，在機(jī)體免疫應(yīng)答和組織修復(fù)中發(fā)揮重要作用[15]。魏茜等[16]報(bào)道，胃癌組織中存在IL-1β異常高表達(dá)，并且IL-1β發(fā)揮抗Hp感染的作用。IL-8主要由單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞合成分泌，具有趨化T 淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的作用[17]。IL-8可以增強(qiáng)機(jī)體非特異性炎癥反應(yīng)程度，與慢性胃炎、胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系[18]。IL-32 是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，主要由NK 細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞分泌[19]。而IL-32 可以激活NF-κB、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)等多個(gè)信號(hào)通路，引起IL-1β、IL-8和腫瘤壞死因子等炎癥因子釋放[20]。本研究通過(guò)對(duì)胃癌患者和非胃癌者血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清IL-1β、IL-8、IL-32水平及Hp感染U值均高于非胃癌者，提示IL-1β、IL-8、IL-32、Hp 感染與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系。究其原因，大部分胃癌患者存在Hp 感染，導(dǎo)致血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp感染U 值升高[21]。進(jìn)一步分析顯示，無(wú)論是否患有胃癌，Hp 陽(yáng)性者血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U值均高于Hp陰性者，證實(shí)IL-1β、IL-8、IL-32、Hp感染與胃癌的發(fā)生有密切關(guān)系。WU等[22]報(bào)道Hp的Cag可以活化NF-κB 和MAPK 信號(hào)通路，引起炎癥反應(yīng)。而IL-32也可以激活NF-κB和MAPK信號(hào)通路，引起IL-1β、IL-8釋放。筆者分析，Hp感染后可能通過(guò)活化NF-κB 和MAPK 信號(hào)通路，引起血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平升高[23]。本研究結(jié)果還顯示，Hp 陽(yáng)性胃癌組血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平及Hp 感染U 值均高于Hp 陽(yáng)性非胃癌組；Hp 陰性胃癌組血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平均高于Hp 陰性非胃癌組。表明除與Hp 有關(guān)外，胃癌患者血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平均高于非胃癌者。分析胃癌患者存在細(xì)胞免疫活化，T 淋巴細(xì)胞和NK 細(xì)胞發(fā)揮抗癌作用，導(dǎo)致血清IL-1β、IL-8、IL-32水平升高[24]。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)Hp 陽(yáng)性者血清IL-1β、IL-8、IL-32 與Hp 感染U 值均呈正相關(guān)，其主要原因可能在于：Hp 感染可通過(guò)調(diào)控相關(guān)的信號(hào)通路，引起血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平升高[25]。而對(duì)于Hp 陰性者，如未發(fā)生胃癌，血清IL-1β、IL-8、IL-32 可能處于較低水平，如發(fā)生胃癌，由于存在細(xì)胞免疫活化，血清IL-1β、IL-8、IL-32水平升高，因此其水平與Hp感染U值并無(wú)相關(guān)性[26]。

綜上所述，Hp 感染是胃癌發(fā)生的重要病因之一，Hp 感染與胃癌患者血清IL-1β、IL-8、IL-32 水平異常升高存在密切聯(lián)系，在Hp 感染后胃癌的發(fā)病過(guò)程中IL-1β、IL-8、IL-32 發(fā)揮重要作用。臨床工作中可能通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)IL-1β、IL-8、IL-32 與碳14 尿素呼氣試驗(yàn)，達(dá)到早期有效診斷因Hp感染導(dǎo)致的胃癌的目的。