劉懷瑾，寧玲忠，龍 娉，劉繼根 ，曹 娜，迂 斌 ，顏運秋※

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，湖南長沙410128；2.長沙道勤生物科技有限公司，湖南長沙410125）

現(xiàn)代畜禽養(yǎng)殖業(yè)所面臨的最大威脅是畜禽的疫病，而消毒是預(yù)防動物疫病最簡單、廉價、有效、常用的技術(shù)措施，是保證豬場生物安全必不可少的重要手段之一。豬場定期消毒，凈化飼養(yǎng)環(huán)境，保障健康養(yǎng)殖，對提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益具有重大意義。目前豬場消毒的方法主要有機(jī)械清理法、物理消毒法、化學(xué)消毒法、生物消毒法等[1,2]。當(dāng)前消毒藥品種繁多，按其性質(zhì)可分為醇類、碘類、酸類、堿類、鹵素類、酚類、氧化劑類、揮發(fā)性烷化劑類等，選擇合適消毒劑，可以有效降低豬場用藥成本，提高消殺效果。本試驗通過對新開發(fā)的消毒劑開展對比實驗，旨在為豬場改善養(yǎng)殖環(huán)境提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種：金色葡萄球菌、大腸桿菌（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院分離保存）

1.1.2 培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂培養(yǎng)基

1.1.3 受試產(chǎn)品：凹凸巴斯德(長沙道勤生物科技有限公司生產(chǎn)提供)，干粉消毒劑A（市售，某公司生產(chǎn)，以下稱受試品A），干粉消毒劑B(市售，某公司生產(chǎn),以下稱受試品B)，

1.1.4 試驗器材：光學(xué)生物顯微鏡、恒溫鼓風(fēng)干燥箱、超凈工作臺、生化培養(yǎng)箱、全自動蒸汽滅菌器、錐形瓶、燒杯、7.5cm 培養(yǎng)皿、無菌棉簽、酒精燈，接種環(huán)、記號筆等。

1.2 方法

1.2.1 培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備

金色葡萄球菌、大腸桿菌分別采用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基及麥康凱瓊脂培養(yǎng)基按試劑說明進(jìn)行配制，滅菌后倒皿備用。

1.2.2 菌種純化和培養(yǎng)

超凈工作臺內(nèi)，無菌操作將金色葡萄球菌、大腸桿菌分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平皿，生化培養(yǎng)箱37.4℃培養(yǎng)24 h。分別挑取培養(yǎng)基中金黃色與玫瑰紅色單個菌落（經(jīng)革蘭染色鏡檢分別呈藍(lán)紫色較大成對呈葡萄串狀的球菌與紅色中等大小短桿菌），再次分別接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，生化培養(yǎng)箱37.4℃培養(yǎng)24 h 備用。

1.2.3 受試品抑菌對比試驗

抑菌試驗采用2 個平行組進(jìn)行，每組分別取培養(yǎng)好的金黃色葡萄球菌與大腸桿菌，分別用無菌生理鹽水洗下菌苔，各自制成為0.5 麥?zhǔn)蠁挝唬?.5×108 個/mL）細(xì)菌懸濁液400mL，搖勻備用。每個平行試驗組用100mL 無菌錐形瓶4 個，分別標(biāo)記好受試品名稱，將受試菌懸濁液分別按100mL/瓶倒入4 個100mL 錐形瓶中，其中1 瓶為陽性（空白）對照瓶，受試凹凸巴斯德、受試品A 與受試品B 各1 瓶。陽性（空白）對照組錐形瓶不加任何受試品，另3 錐形瓶分別加入稱量好的凹凸巴斯德、產(chǎn)品A、產(chǎn)品B 粉末15g，攪拌均勻后（表面會稍有液體分層）靜置作用30 min 后搖勻，分別用無菌醫(yī)用棉簽蘸取瓶內(nèi)液體劃線接種營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基與麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，生化培養(yǎng)箱37.5℃培養(yǎng)24 h。觀察抑菌結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 對金色葡萄球菌抑菌結(jié)果

金色葡萄球菌陽性(空白)對照中長滿了菌（如圖1），凹凸巴斯德試驗組培養(yǎng)皿中無菌落生長，受試品A 組、受試品B 組培養(yǎng)皿中長滿了淡黃色成片菌落，經(jīng)涂片染色鏡檢呈G+菌體較大，少數(shù)成對、多數(shù)呈葡萄串狀排列的球菌。說明凹凸巴斯德對金色葡萄球菌有非常好的抑菌殺菌效果，而受試品A 和受試品B 對金色葡萄球菌無抑制作用。

2.2 對大腸桿菌抑菌結(jié)果

大腸桿菌陽性(空白)對照組平皿長滿了玫瑰紅色菌落（如圖2），凹凸巴斯德驗組的麥康凱瓊脂基培養(yǎng)皿中均無菌落生長，受試品A 組、受試品B 組培養(yǎng)皿中長滿了玫瑰紅色成片菌落，經(jīng)涂片染色鏡檢呈G-中等大小短桿菌。說明受試凹凸巴斯德對大腸桿菌有非常好的抑菌殺菌效果，而受試品A 和受試品B 對大腸桿菌無抑制作用。

3 討論

消毒是動物養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中必不可少的一步。消毒通過物理、化學(xué)、生物的方法可以有效抑制動物生活環(huán)境中的微生物，切斷疾病的傳播途徑，達(dá)到預(yù)防控制傳染病的發(fā)生、傳播和蔓延。目前市面有多種消毒劑，大部分為化學(xué)制劑，長期使用會導(dǎo)致致病菌產(chǎn)生耐藥性，且在使用消毒劑時都是將其溶解在水中后再進(jìn)行噴灑，含有消毒劑的藥水易腐蝕欄舍和養(yǎng)殖器具，增加畜舍濕度，并刺激動物和飼養(yǎng)人員[3]。

干粉消毒劑的主要成分是蒙脫石[4]，碳酸鈣[5]等天然礦物質(zhì)，除傳統(tǒng)消毒劑功能以外，還具有干燥、吸附空氣中有害氣體及水分的特點，因此被廣泛使用。主要可用于仔豬涂抹、空氣消毒等。有研究證明，在產(chǎn)房使用干粉消毒劑消毒，可有效地減少哺乳仔豬的發(fā)病率，對產(chǎn)房仔豬死亡率有一定的改善作用[6]。本實驗結(jié)果表明，37.5℃下凹凸巴斯德對金色葡萄球菌與大腸桿菌均有很強(qiáng)的抑菌殺菌效果，而受試A 和受試品B 在該試驗中對大腸桿菌和金色葡萄球菌無明顯抑殺效果，這可能與各組消毒劑的濃度與作用時間有關(guān)[7,8]，也可能與市面上大部分干粉消毒劑對微生物的作用是吸附而非殺滅機(jī)制有關(guān)[9]。

理想的消毒劑，需要有較強(qiáng)的消毒能力及廣譜殺菌抑菌能力[10],作為干粉消毒劑，抑殺細(xì)菌是其主要功能之一，而金色葡萄球菌和大腸桿菌則分別是G+菌、G-菌的代表，也是養(yǎng)殖場常在菌，本試驗采用該兩種菌進(jìn)行抑菌實驗，客觀地驗證了受試品的抑菌性能。本實驗結(jié)果說明，在一定時間內(nèi)，受試品凹凸巴斯德在對大腸桿菌和金色葡萄球菌的抑殺效果上，明顯優(yōu)于受試品A 和受試品B。 □