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        曙紅Y與乳酸環(huán)丙沙星相互作用的分光光度法研究及應(yīng)用

        2020-10-11 12:14:28李華岑朱雷李娜邱富娜河南省獸藥飼料監(jiān)察所450008
        獸醫(yī)導(dǎo)刊 2020年15期
        關(guān)鍵詞:體系

        李華岑 朱雷 李娜 邱富娜/河南省獸藥飼料監(jiān)察所 450008

        乳酸環(huán)丙沙星(CFLX)適用于敏感細菌及支原體所致畜禽及小動物的各種感染性疾病。主要用于雞的慢性呼吸道病、大腸桿菌病、傳染性鼻炎、禽巴氏桿菌病、禽傷寒、葡萄球菌病,仔豬黃痢、仔豬白痢等。目前對乳酸環(huán)丙沙星的檢測方法主要有滴定法和高效液相色譜法。本文進行了曙紅Y(EY)與乳酸環(huán)丙沙星相互作用的分光光度法研究,建立了曙紅Y測定乳酸環(huán)丙沙星的新方法,用于乳酸環(huán)丙沙星可溶性粉中乳酸環(huán)丙沙星含量的測定,結(jié)果滿意。

        1 材料與方法

        1.1 主要儀器與試劑PE公司lamda35型雙光束紫外光譜儀;BT 224S分析天平(Sartorius公司);乳酸環(huán)丙沙星(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所,批號H0141706,含量99.5%):65.2mg·L-1;5.0×10-4mol·L-1曙紅Y溶液;0.01%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶液;0.1%十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB);0.1%十二烷基苯磺酸鈉(SDBS);乳酸環(huán)丙沙星可溶性粉(河南健達獸藥有限公司,批號為JD190714,規(guī)格:按環(huán)丙沙星計10%);所用水為純化水;其它試劑為分析純。

        1.2 實驗方法在10mL容量瓶中依次加入1.00mL曙紅Y溶液、適量乳酸環(huán)丙沙星標準溶液或待測液、1.0mL 0.01% PVP溶液,加0.1mol/L鹽酸0.6mL,用水稀釋至刻度,搖勻,以水為參比立即進行光譜掃描或固定波長為536nm進行吸光度測定。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 吸收光譜以水為空白,對體系進行光譜掃描,結(jié)果見圖1。由圖1可知,乳酸環(huán)丙沙星(13mg·L-1)最大吸收峰在277nm,曙紅B(5.0×10-5mol.L-1)可見區(qū)最大吸收峰在516nm,加入乳酸環(huán)丙沙星后體系在可見區(qū)的最大吸收紅移到536nm,紅移20nm,且吸光度明顯增加。說明體系中應(yīng)該有乳酸環(huán)丙沙星與曙紅Y的復(fù)合物生成。

        圖1 吸收光譜

        2.2 酸度對體系的影響在10mL容量瓶中,依次加入1.00mL曙紅Y溶液、3.0mL乳酸環(huán)丙沙星標準溶液,分別用1、0.1、0.01、0.001mol/L鹽酸稀釋至刻度,搖勻,以水為參比立即進行光譜掃描,結(jié)果發(fā)現(xiàn)用0.01mol/L鹽酸稀釋后體系最大吸收波長紅移最大。隨后考察了0.1mol/L鹽酸加入體積的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)體系中加入0.4~0.8mL 0.1mol/L鹽酸時,最大吸收波長紅移波長最大、紅移波長數(shù)穩(wěn)定、在536nm波長處體系和曙紅Y吸光度的差值最大,選擇0.1mol/L鹽酸加入量為0.6mL。

        2.3 體系吸光度的穩(wěn)定性體系的吸光度隨時間減小,10min后溶液變渾濁并慢慢產(chǎn)出沉淀,為了提高體系的穩(wěn)定性考察了非離子表面活性劑對吸光度的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入0.01% PVP 1.0mL后體系不再發(fā)生渾濁、吸光度非常緩慢的變小,1h內(nèi)體系吸光度僅減小3%。為提高測定準確性,選擇體系混勻后立即測定。

        2.4 最大結(jié)合數(shù)的測定固定乳酸環(huán)丙沙星濃度為1.55×10-5mol.L-1,改變曙紅Y的濃度,以相應(yīng)的試劑空白為參比測定體系的吸光度。以吸光度為縱坐標,以n(cEY/cCFLX)為橫坐標作圖,結(jié)果見圖2。由圖可知,n=1時出現(xiàn)一明顯折點。依據(jù)摩爾比法原理,乳酸環(huán)丙沙星與曙紅Y的最大結(jié)合數(shù)為1。

        圖2 摩爾比法

        圖3 吸收光譜圖

        2.5 離子強度的影響實驗用NaCl溶液考察了離子強度對體系的影響。發(fā)現(xiàn),體系中加入NaCl后,體系中NaCl濃度為0.02~0.1mol.L-1時,吸光度隨NaCl濃度增大而緩慢變小。吸光度變小,表明乳酸環(huán)丙沙星與曙紅Y可能主要通過靜電引力結(jié)合。

        2.6 表面活性劑的影響及反應(yīng)機理探討加入0.01% PVP 1.0mL,體系吸光度有一定的增大。加入陰離子表面活性劑0.1% SDBS 1.0mL,體系的吸光度幾乎完全猝滅。加入陽離子表面活性劑0.1% CTMAB 0.05mL,體系的吸光度顯著增大。

        非離子表面活性劑PVP的存在可能會聚集體系中CFLX與EY的復(fù)合物,形成膠束增敏體系使體系的吸光度增大。

        對EY中加入CFLX和CTMAB的體系進行光譜掃描,結(jié)果見圖3。由圖可知,CFLX(13mg·L-1)與CTMAB(5mg·L-1)的加入均能使EY(5.0×10-5mol.L-1)的最大吸收波長發(fā)生紅移,推測CFLX、CTMAB與EY的結(jié)合方式是相似的。CTMAB與EY的結(jié)合可能主要是CTMAB分子中的季銨N+正電荷與EY分子中的羧酸基-COO-負電荷間的作用。CFLX分子中有仲胺和叔胺,在酸性條件下,容易形成季銨N+正電荷,可以和EY分子中的羧酸基-COO-負電荷結(jié)合生成離子復(fù)合物(CFLX和EY分子結(jié)構(gòu)圖見圖4)。

        圖4 乳酸環(huán)丙沙星與曙紅Y的分子結(jié)構(gòu)圖

        體系中加入不同濃度SDBS的吸收光譜見圖5,由圖可知:隨著SDBS濃度的增大,體系最大吸收波長由533nm變?yōu)?13nm。大量SDBS(100mg·L-1)的存在會抑制EY與CFLX復(fù)合物的形成,因為靜電引力是一種非定向性的作用力,在大量SDBS陰離子的存在下,CFLX大部分可能會與SDBS結(jié)合,生成CFLX與SDBS的復(fù)合物,從而抑制CFLX與EY復(fù)合物的生成,而CFLX與SDBS的復(fù)合物在536nm沒有吸收或有很弱的吸收,從而使體系的吸光度產(chǎn)生嚴重猝滅。

        圖5 吸收光譜圖

        因而,推測乳酸環(huán)丙沙星與曙紅Y主要通過靜電引力結(jié)合,形成結(jié)合比為1:1的離子復(fù)合物。

        2.7 線性范圍、檢出限和精密度乳酸環(huán)丙沙星在1.3~19.6mg·L-1濃度范圍內(nèi)服從比爾定律;回歸方程為:A=0.0204c(mg·L-1)+0.3213,相關(guān)系數(shù)為0.9958。按cL=3S/K得方法檢出限為0.3mg·L-1。對濃度為13mg·L-1的乳酸環(huán)丙沙星標準溶液進行平行測定求得相對標準偏差RSD=1.0%(n=6)。

        2.8 樣品測定

        精密稱取樣品乳酸環(huán)丙沙星可溶性粉約0.25g,置50mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻;精密量取5mL置50mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻。取適量供試品溶液按實驗方法對樣品進行分析,結(jié)果見表1。

        表1 乳酸環(huán)丙沙星可溶性粉的測定和回收(n=6)

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