廖夢莎，劉香香

(1.上海天祥質(zhì)量服務(wù)有限公司，上海 200233，2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品公共監(jiān)測中心，廣東 廣州 510640)

抗氧化劑是指能防止或延緩食品氧化，提高食品的穩(wěn)定性和延長貯存期的食品添加劑。[1]這些有抗氧化作用的防腐劑包括天然的維生素C和維生素和人工合成的沒食子酸丙酯、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、2，6-二叔丁基對甲基苯酚(BHT)和叔丁基對羥基茴香醚(BHA)等。抗氧化劑的正確使用不僅可以延長食品的貯存期、貨架期，帶來良好的經(jīng)濟(jì)效益，而且可以更好地保障食品安全。但過量使用人工合成抗氧化劑會(huì)對人體健康有一定的影響，比如導(dǎo)致DNA損傷或致癌等[2]。因此，對食品中人工合成抗氧化劑的檢測十分重要。

在GB/T 5009.30-2003《食品中叔丁基羥基茴香醚(BHA)與2,6-二叔丁基對甲酚(BHT)的測定》中的BHA、BHT的檢測方法中，需要制備層析柱過濾再用溶劑進(jìn)行解析[3]。且溶劑選用不合理(二硫化碳毒性大，極易揮發(fā))，步驟繁瑣，接觸有毒物質(zhì)多，處理過程除油脂效果差，回收率低。而在GB 5009.32-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中9種抗氧化劑的測定》第三法氣相色譜-質(zhì)譜法中，固體類食品要經(jīng)過正己烷溶解、乙腈提取、固相萃取柱凈化[4]。樣品處理過程繁復(fù)，試劑多且毒性大，不適合大批量開展檢測工作。

目前抗氧化劑常用的檢測方法有薄層色譜法、比色法、氣相色譜法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳法等，這些方法樣品前處理較為繁瑣，而且干擾較多。氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)因其能根據(jù)保留時(shí)間和特征碎片離子雙重定性，有效地避免了干擾物的影響，極大地提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，所以在食品有毒有害殘留物質(zhì)分析中的應(yīng)用也越來越廣泛。

為了提高測定食品中抗氧化劑的前處理方法的質(zhì)量與效率，本試驗(yàn)建立氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)同時(shí)測定堅(jiān)果中叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基對甲基苯酚(BHT)、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、2，6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚4種抗氧化劑的前處理方法的研究與改進(jìn)。

1 材料與方法

1.1 供試樣品

10件堅(jiān)果樣品：鹽焗腰果、碧根果A、碧根果B、夏威夷果、鹽焗開心果A、鹽焗開心果B、炭燒腰果、氣泡瓜子、蘭花豆、西瓜子。

1.2 儀器與試劑

Agilent 7890-5975氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，安捷倫科技有限公司產(chǎn)品；渦旋混合器(穗苓貿(mào)易發(fā)展有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(步琦有限公司)。叔丁基對羥基茴香醚(BHA)標(biāo)準(zhǔn)品(純度為98.8%，天津阿爾塔科技有限公司)下同；2，6-二叔丁基對甲基苯酚(BHT)標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.52%，購買公司為上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)；叔丁基對苯二酚(TBHQ)標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.52%，購買公司為北京振翔科技有限公司)；2，6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚(Ionox-100)標(biāo)準(zhǔn)品(純度為97.8%，北京振翔科技有限公司)。甲醇(色譜純，購買公司為上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司)。

1.3 儀器條件

色譜柱：DB-5MS(30m×0.25mm×0.25m)；色譜柱升溫程序：70℃保持1min，然后以10℃/min程序升溫至200℃保持4min，再以10℃/min升溫至280℃保持4min；載氣：He氣，純度≥99.999%；流速：1mL/min；進(jìn)樣口溫度：230℃；進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1min后打開閥；電子轟擊源：70eV；離子源溫度：230℃；GC-MS接口溫度：280℃；溶劑延遲：4min。

1.4 樣品前處理

稱取堅(jiān)果樣品2.00g，置于25.0mL比色管中，加入25.0mL石油醚超聲提取兩遍，取上清液合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近干(水浴溫度45℃)。再用10mL甲醇溶解，渦旋振蕩混合后置于-18℃冰箱中冷凍分層。冷凍分層后(4h)，取上層甲醇上機(jī)測試。

1.5 測定

配制一定濃度梯度的4種抗氧化劑標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別為50μg/L、100μg/L、200μg/L、500μg/L、1000μg/L，上機(jī)讀值，以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。將試樣溶液注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到相應(yīng)色譜峰響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中抗氧化劑的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理溶劑的選擇

BHA、BHT、TBHQ、Ionox-100幾乎不溶于水，但溶于乙醇、甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑，可利用極性有機(jī)溶劑與油脂不相溶的特性，直接采用有機(jī)溶劑對樣品多次萃取提取抗氧化劑。蔡發(fā)、李興根、許彩蕓等都對有機(jī)溶劑的選擇進(jìn)行了研究[5-7]，結(jié)合文獻(xiàn)，最終選擇提取效率高、價(jià)格低且毒性小的甲醇作為提取溶劑。

2.2 色譜分析

4種抗氧化劑的保留時(shí)間、定量離子、定性離子及駐留時(shí)間見表1。0.01mg/kg的叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基對甲基苯酚(BHT)、叔丁基對苯二酚(TBHQ)、2，6-二叔丁基-4-羥甲基苯酚(Ionox-100)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見圖1。

表1 4種抗氧化劑的保留時(shí)間、定量離子、定性離子及駐留時(shí)間

2.3 線性范圍與定量限

以3倍信噪比對應(yīng)的濃度為檢出限,10倍信噪比對應(yīng)的濃度為定量限。本實(shí)驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)線性系數(shù)(R2)、定量限結(jié)果見表2,從表2中可以看出各組分在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)線性良好,其線性系數(shù)均大于0.99。4種抗氧化劑的方法定量限在0.128～0.176mg/kg之間?！禛B 5009.32-2016食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中9種抗氧化劑的測定》第三法氣相色譜-質(zhì)譜法中定量限為1.0mg/kg，本方法定量限低于此標(biāo)準(zhǔn)方法中定量限。

表2 4種抗氧化劑的線性方程、線性系數(shù)、定量限

2.4 加標(biāo)回收率和精密度

對BHA、BHT、TBHQ 、Ionox-100分別選取1.0mg/kg、4.0mg/kg、20.0mg/kg，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)水平重復(fù)測定7次來驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度和精確度?；厥章始跋鄬?biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見表3。

表3 4種抗氧化劑的加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)

由表3可見，實(shí)驗(yàn)回收率在86.8%～100.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.9%～9.6%。證明此方法精密度高，加標(biāo)回收率較高，具有可操作性。

2.5 實(shí)際樣品測定

應(yīng)用所建立的分析方法對10件堅(jiān)果樣品(鹽焗腰果、碧根果A、碧根果B、夏威夷果、鹽焗開心果A、鹽焗開心果B、炭燒腰果、氣泡瓜子、蘭花豆、西瓜子)進(jìn)行檢測，在氣泡瓜子仁中檢出TBHQ 28.0 mg/kg，其他9件樣品未檢出。

3 討論

本試驗(yàn)建立了一套有效的同時(shí)檢測堅(jiān)果中4種抗氧化劑的檢測分析方法，采用GC-MS法檢測堅(jiān)果中BHA、BHT、TBHQ、Ionox-100 4種抗氧化劑。且對前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，采用石油醚提取、甲醇溶解、冷凍分層后取上層甲醇上機(jī)測試的方法。與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)相比，操作簡單、快速準(zhǔn)確。

4 結(jié)論

本研究建立了同時(shí)檢測堅(jiān)果中BHA、BHT、TBHQ、Ionox-100 4種抗氧化劑的氣相色譜質(zhì)譜法，該方法樣品前處理簡單快速，靈敏度和選擇性高，重復(fù)性好，精密度和準(zhǔn)確度良好，為堅(jiān)果中4種抗氧化劑的同時(shí)檢測提供了一種高效、可靠、快速的方法。