馮建明 燕蔚 王志強(qiáng) 許秋雙 滕萌萌 楊曉娜 寧寶生 李天祥

〔摘要〕 目的 考察3種切片方法（鮮品切片、半干切片、悶潤(rùn)切片）對(duì)丹參飲片質(zhì)量的影響，擬篩選適宜的切片方法。方法 建立不同產(chǎn)地3種丹參切片方法高效液相指紋圖譜，進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)和正交偏最小二乘法分析;采用HPLC-UV法對(duì)丹參飲片中功效成分定量分析。結(jié)果 3種丹參切片方法之間存在差異，其中悶潤(rùn)切片與前兩者差別較大，鮮品切片丹參中主要功效成分損失最少，半干切片方法次之，悶潤(rùn)切片丹參中成分損失較多。結(jié)論 鮮品切片和半干切片兩種方法具有較高的可行性，其中鮮品切片為丹參最佳的切片方法，功效成分損失最少;而半干切片品相較佳，斷面質(zhì)密平整。因此，在產(chǎn)地進(jìn)行半干切片加工具有推廣價(jià)值。

〔關(guān)鍵詞〕 丹參;切片方法;含量測(cè)定;指紋圖譜

〔中圖分類號(hào)〕R282.4? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2020.08.012

〔Abstract〕 Objective To study the effects of 3 kinds of slicing methods （fresh product slicing， half dry slicing and stuffy moistening slicing） on the quality of Radix Salviae Miltiorrhizae decoction pieces， and to select the appropriate slicing methods. Methods The HPLC fingerprints of 3 kinds of slicing methods of Radix Salviae Miltiorrhizae from different areas were established， and the similarity evaluation and orthogonal partial least square analysis were carried out. HPLC-UV method was used to quantitatively analyze the functional components in Radix Salviae Miltiorrhizae decoction pieces. Results There were differences among the 3 slicing methods of Radix Salviae Miltiorrhizae， among which the differences between the stuffy moistening slicing and the first two methods were significant. The loss of main functional components in fresh Radix Salviae Miltiorrhizae slice was the least， followed by that in half dry slice， and the loss of components in stuffy moistening Radix Salviae Miltiorrhizae slice was more. Conclusion The two methods of fresh and half dry slicing are highly feasible， among which fresh slicing is the best method for Radix Salviae Miltiorrhizae with the least loss of effective components， while the half dry sections are better in appearance with dense and flat section. Therefore， to process half dry section in the production area has the value of popularization.

〔Keywords〕 Radix Salviae Miltiorrhizae; slicing method; content determination; fingerprint

丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根莖，性苦、微寒，歸心、肝經(jīng)，具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛、清心除煩、涼血消癰的功效[1]，屬常用大宗中藥材之一。丹參中主要含有脂溶性和水溶性兩大類活性成分，成分種類繁多[2]，具有抗炎、抗腫瘤、治療心血管疾病等多種藥理作用[3-5]。

中藥材切制加工有易于藥物中有效成分的溶出，也有助藥材的干燥、貯藏和炮制。2015版《中華人民共和國藥典》中規(guī)定丹參“除去雜質(zhì)和殘莖，洗凈，潤(rùn)透，切厚片，干燥”[1]。然而丹參自古有“忌水洗”的說法，現(xiàn)代研究也表明水洗易造成丹參活性成分損失[6]，曾有報(bào)道丹參產(chǎn)地趁鮮切片具有一定的合理性[7]。因此，為了有效保證加工切制丹參飲片質(zhì)量，本研究收集了我國5個(gè)丹參主產(chǎn)區(qū)的新鮮樣品，分別采用鮮品直接切片、半干切片、悶潤(rùn)切片3種切制方法進(jìn)行處理，采用HPLC指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)和主要功效成分含量測(cè)定，并經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，系統(tǒng)考察丹參3種切片方法對(duì)丹參質(zhì)量的影響，擬篩選丹參最合理的切片方法，保證其質(zhì)量，提高臨床治療效果，為進(jìn)一步完善丹參藥材加工理論提供科學(xué)的數(shù)據(jù)支撐。

1 儀器與材料

1.1? 主要儀器與試劑

美國Alltech 1500系列高效液相色譜儀（配置B05型高壓梯度泵、UV 1000型全波段可編程紫外可見檢測(cè)器、CSChrom Plus色譜工作站）;UV-6100PCS型紫外可見分光光度計(jì)（上海美普達(dá)有限公司）;YHG-600-BS-II型遠(yuǎn)紅外快速干燥箱（上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;DFZ-6050型真空干燥箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司）;SB25-12DT超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）;FA 2104電子天平（上海舜宇恒平科技儀器有限公司）。丹參酮ⅡA對(duì)照品（MUST-1103301）、丹酚酸B對(duì)照品（MUST-15081916）（北京鼎國昌盛技術(shù)有限公司）;硝酸鋁（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）;氫氧化鈉、亞硝酸鈉、95%乙醇、甲醇（分析純，天津市江天化工技術(shù)有限公司）;磷酸（色譜純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）;無水乙醇（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）;乙腈、甲醇（色譜純，天津市康科德科技有限公司）;娃哈哈純凈水（天津娃哈哈食品有限公司）。

1.2? 試驗(yàn)樣品

丹參樣品分別為采自山東夏津、四川綿陽、天津靜海、河南方城、陜西寶雞5個(gè)主產(chǎn)區(qū)新鮮藥材，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥教授鑒定為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的根及根莖。見表1。

2 方法

2.1? 丹參的切片方法

2.1.1? 鮮品直接切片? 取新鮮丹參藥材，凈選除雜，用流速為5 000 mL/min的水沖洗干凈，稍晾，切厚片（2～4 mm），曬干。

2.1.2? 半干切片? 取新鮮藥材，凈選除雜，水沖洗凈，自然晾曬，藥材稍有韌性，不易折斷，切厚片（2～4 mm），曬干。

2.1.3? 悶潤(rùn)切片? 即傳統(tǒng)的切片方法。取新鮮藥材凈選除雜，曬干，藥材輕折易斷。將干藥材用清水浸潤(rùn)，經(jīng)常翻動(dòng)，使水分緩緩滲入藥材內(nèi)部，以“藥透水盡，少泡多潤(rùn)”為原則，潤(rùn)透后，取出，切厚片（2～4 mm），曬干。

2.2? 不同產(chǎn)地丹參3種切片方法指紋圖譜研究

2.2.1? 色譜條件? 色譜柱：Agilent ZorbaxSB-C18（4.6 mm×100 mm，3.5 μm）。檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，流速1 mL/min，柱溫30 ℃。流動(dòng)相A為乙腈，B為0.1%甲酸的水溶液。梯度洗脫：0～5 min，10%～20%A;5～20 min，20%～30%A;20～25 min，30%～50%A;25～30 min，50%～65%A;30～65 min，65%～80%A;65～70 min，80%～10%A;70～72 min，10%A。

2.2.2? 對(duì)照品溶液的制備? 精密稱取105 ℃干燥至恒重的各對(duì)照品適量，以甲醇為溶劑配成各單一成分的溶液，迷迭香酸0.24 g/L，丹酚酸B 0.16 g/L，隱丹參酮0.14 g/L，丹參素0.22 g/L，丹參酮IIA 0.2 g/L的對(duì)照品儲(chǔ)備液，制備成混合對(duì)照品溶液。見圖1。

2.2.3? 供試品溶液的制備? 精密稱取各丹參樣品粉末（過三號(hào)篩）約0.1 g，置具塞錐形瓶中，精密加人甲醇20 mL，稱重，超聲處理（功率140 W，頻率42 kHz） 15 min，室溫下冷卻，精密稱定甲醇補(bǔ)重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4? 精密度試驗(yàn)? 取同一均勻標(biāo)準(zhǔn)品按照“2.2.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件，平行進(jìn)樣6次，記錄主要色譜峰的峰面積和保留時(shí)間，以4號(hào)色譜峰為參照峰，保留時(shí)間 RSD為2.45%，相對(duì)峰面積 RSD為1.49%，說明儀器精密度良好。

2.2.5? 穩(wěn)定性試驗(yàn)? 取同一樣品按照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫靜置，分別在0、2、4、8、16、24 h按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄主要色譜峰的峰面積和保留時(shí)間，以4號(hào)色譜峰為參照峰，保留時(shí)間RSD≤1.86%，相對(duì)峰面積RSD≤0.18%，說明該供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.6? 重復(fù)性試驗(yàn)? 精密量取同一樣品，按“2.2.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按照“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄主要色譜峰的峰面積和保留時(shí)間，以4號(hào)色譜峰為參照峰，保留時(shí)間RSD≤1.28%，相對(duì)峰面積RSD≤0.14%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.3? 不同產(chǎn)地丹參3種切片方法成分含量測(cè)定

2.3.1? 色譜條件? 丹參酮ⅡA色譜條件：色譜柱Agilent ZorbaxSB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相乙腈（A）-0.02%磷酸溶液（B）;檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm;進(jìn)樣量10 μL;流速1.0 mL/min;柱溫25 ℃;梯度洗脫設(shè)定為0～6 min，61%A;6～20 min，61%～90%A;20～20.5 min，90%～61%A;20.5～25 min，61%A。丹酚酸B色譜條件：色譜柱Agilent Zorbax SB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動(dòng)相乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）（22∶78）;檢測(cè)波長(zhǎng)286 nm;進(jìn)樣量10 μL;流速1.2 mL/min;柱溫25 ℃。見圖2。

2.3.2? 對(duì)照品溶液制備? 精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品2.5 mg于25 mL容量瓶中，甲醇定容得0.1 mg/mL的丹參酮ⅡA對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品3.2 mg于10 mL容量瓶中，蒸餾水定容得0.32 mg/mL的丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱取丹酚酸B對(duì)照品2.8 mg于10 mL容量瓶中，甲醇定容得0.28 mg/mL的丹酚酸B對(duì)照品儲(chǔ)備液。